نموذج الفئران من المعوية الإسكيمية-ضخه إصابة

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء إصابة مستحثة عن نقص تروية الأمعاء القابلة للتكرار في منطقة الفئران عن طريق الإغلاق المؤقت للفروع الجانبية الطرفية والطرفية للشريان المساريقي العلوي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في فهم الطرق الأساسية في مجال أمراض الجهاز الهضمي والمناعة مثل فهم آلية إصابة الرضفة وتجديدها. ميزة هذه التقنية هي أنه يمكن القيام بها من قبل أي فرد مدرب في المختبر.

ميزة أخرى هي أن الإجراء نفسه لا يسبب وفيات الفئران. جهز موقع الجراحة كما هو محدد في البروتوكول النصي. بعد ذلك ، استخدم المقص الجراحي لإجراء بضع البطن من ثلاثة إلى خمسة سنتيمترات متوسطة.

ثم قم بتغطية المنطقة الجراحية بضمادة معقمة غير ملتصقة مبللة بالمحلول الملحي. اعزل الأعور والحرقفة ، واستخدم مسحات قطنية مبللة بالمحلول الملحي لكشف الشريان المساريقي العلوي. ثم لتسهيل تطبيق المشبك ، استخدم ملقط الضغط لرفع الأمعاء برفق والعثور على مقص القزحية لقطع المساريق على جانبي الشريان المساريقي العلوي في الموضع المقطوع المطلوب.

أمسك الأمعاء في الوضع المرتفع ، واضغط برفق على مشبك اليد الأخرى لفتح فكي مشبك الأوعية الدموية الدقيقة عالي الجودة 70 G-Force. ثم ضع المشبك على الوعاء ، وحرر الفكين برفق ، مع إغلاق الوعاء. ضع مقطعا أو اثنين من مقاطع الأوعية الدموية الدقيقة بنفس الطريقة ، حتى يتم إنشاء منطقة من خمسة إلى سبعة سنتيمترات من الحرقفة الإقفارية المجاورة للأعور عن طريق انسداد الفروع من الدرجة الأولى للشريان المساريقي العلوي.

ضع الآن مقطعين من الأوعية الدموية الدقيقة 40 G-Force عبر الأمعاء لمنع تدفق الدم الجانبي ، وتحديد منطقة الأمعاء الإقفارية. عندما تكون جميع المشابك في مكانها ، ضع منديلا معقما ودقيقا مبللا بمحلول ملحي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية على منطقة الجراحة ، وحافظ على نقص التروية لمدة 60 دقيقة مع المراقبة الدقيقة. إذا تم إجراء عملية نقص التروية بشكل صحيح ، فستتغير المنطقة إلى اللون الأحمر النبيذ في غضون 30 دقيقة تقريبا ، وستتضخم الأوعية الدموية البعيدة عن موضع المقطع ، مما يشير إلى انسداد ناجح.

في نهاية نقص التروية ، ضع علامة على حواف المنطقة الإقفارية بعشرة لترات صغيرة من هيماتوكسيلين جيل ، لتسهيل حصاد الأنسجة الإقفارية والأنسجة السليمة المجاورة. في نهاية نقص التروية ، أضف بضع قطرات من المحلول الملحي على منطقة المشبك ، وقم بإزالة مشابك الأوعية الدموية الدقيقة برفق باستخدام مشبك. بعد ذلك ، ادفع الأمعاء برفق إلى تجويف البطن باستخدام أطراف قطنية مبللة بالمحلول الملحي.

قم بإزالة الوسادة غير الملتصقة ، وأغلق جدار البطن والجلد باستخدام مشابك جرح سرقة غير قابلة للصدأ بسعة تسعة ملليمترات. احتفظ بالحيوانات في قفص ساخن ونظيف لفترة إعادة التروية المرغوبة ، وفحص الفئران كل 30 دقيقة للتأكد من ثباتها. في نهاية التروية ، قم بالقتل الرحيم للفأر ، وافتح تجويف البطن وحصاد الأنسجة الطبيعية الإقفارية والمجاورة.

بعد ذلك ، استخدم حقنة سعة 30 مليلتر مزودة بإبرة تزقيم مملوءة بالمحلول الملحي لغسل محتويات الأمعاء ، ثم قطع الأمعاء طوليا. إذا كانت عينة من الأمعاء مطلوبة لتحليل الجين السريع ، فاحتفظ بجزء طولي من نقطة واحدة من خمسة إلى ملليمترين. للتحليل النسيجي ، استخدم زوجا من الملقط لدحرجة الأمعاء في لفافة سويسرية ، ووضع القطع المكثفة بين وسادات رغوة الخزعة في الكاسيت.

أخيرا ، ضع الكاسيت في الفورمالين المخزن بنسبة عشرة بالمائة لإصلاح الأنسجة المعوية الإقفارية والصحية. هنا ، يتم عرض شريط نسيجي تمثيلي يحتوي على لفائف سويسرية محضرة من التحكم ، ومناطق إقفارية الحرقفة بعد ساعة واحدة من نقص التروية وساعة واحدة من إعادة التروية. لاحظ اختلاف اللون بين الأنسجة الضابطة والأنسجة الإقفارية.

كما تم تضمين قطعة من الطحال لتسهيل وضع الأمعاء الضابطة ونقص تروية الدم أثناء المعالجة والتلطيخ. في هذه الصور ، يظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين التمثيلي للتحكم ، والمناطق الإقفارية من الحرقفة بعد ساعة واحدة من نقص التروية ، أو ساعة واحدة من نقص التروية متبوعة بساعتين من إعادة التروية. لاحظ الضرر الشديد للظهارة الذي لوحظ بعد ساعة واحدة من نقص التروية ، والذي يتميز ب VILI النزفي ، وتعرية الظهارة مع الاستئصال الجزئي إلى الكامل للقصور ، وتسلل الخلايا المناعية.

بعد ساعتين من إعادة التروية ، يستمر تلف VILI والالتهاب ، ولكن لا يوجد نزيف في الأنسجة. يوضح تحليل تعبير سينيكا الالتهابي بعد ساعة وساعتين من إعادة تروية نقص التروية في الأمعاء الإقفارية والتحكم في التنظيم الإضافي في عامل نخر الورم ألفا ، IL واحد بيتا ، IL ستة sideacine ، بالإضافة إلى زيادة في Cxcl اثنين من تعبير mRNA الكيميائي في كل من ظروف إعادة تروية نقص التروية مقارنة بالتحكم في الأنسجة السليمة. بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن إكمالها في ثلاث ساعات ونصف ليتم إجراؤها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء إصابة إعادة تروية نقص تروية الأمعاء القابلة للتكاثر.