خطوة بالبروتوكول الخطوة لجراحة تحت الشبكية في الأرانب

الهدف العام من هذا التدخل الجراحي هو استبدال ظهارة صبغة الشبكية المختلة ، أو RPE ، لإيجاد علاج محتمل للأمراض المرتبطة ب RPE ، مثل الضمور البقعي المرتبط بالعمر. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال البصريات حول العلاج القائم على الخلايا والتنكس البقعي المرتبط بالعمر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها قد توفر طريقة نقل لركيزة استبدال الخلايا أو أجهزة توصيل الأدوية إلى الفضاء تحت الشبكية.

على الرغم من أن هذه الطريقة قد توفر نظرة ثاقبة لاستئصال الزجاجية وجراحة تحت الشبكية في الأرانب ، إلا أنه يمكن استخدامها أيضا على الكائنات الحية النموذجية الأخرى ، مثل الخنازير أو أو البشر. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة ، حيث لا تكون الجراحة داخل العين معقدة فحسب ، بل يجب أيضا مزامنة الموظفين والتنظيم والتكنولوجيا لهذا الإجراء بشكل جيد. سيوضح إجراء تحميل الأدوات فابيان ثيلتجيس ، ما بعد الدكتوراه ، ورالف برينكين ، ممرض فرك جراحي ، وكلاهما من مختبري.

قبل البدء في الجراحة ، تأكد من المستوى المناسب من التخدير وقم بتطبيق مرهم العين على العين الأخرى للحيوان التي لم يتم تشغيلها. بعد ذلك ، ضع الأرنب تحت مجهر جراحي على جانبه الأيسر ، بحيث تكون العين اليمنى متجهة لأعلى والأنف مرتفعا قليلا بواسطة طية بطانية. تطهير العين لمدة دقيقة واحدة ببضع قطرات من بوفيدون اليود.

ثم اشطف العين باستخدام BSS معقم ، وقم بتغطية رأس بستارة معقمة مع فتحة عين مقطوعة مسبقا. ضع قطعة من ثنى الشق الجراحي اللزج مقاس 12 × 17 سم على العين واستخدم المقص لكشف العين بشق أفقي في خط الوسط. باستخدام الفرجار المقلوب ، قم بإزاحة العين في الوضع الداعم وقم بتأمين الأنسجة بخياطة حريرية 3-0.

بعد ذلك ، استخدم زوجا من مقص Vannas لشق الملتحمة بالقرب من الحافة ، على بعد حوالي ملليمتر واحد من الأوعية الدموية المجاورة ، وتوسيع العضلة الصفاق الموازية للطياف. افصل الملتحمة بصراحة ، متبوعا بشق عمودي عمودي من ستة إلى سبعة ملليمترات لعمل حرف T "في الملتحمة. قم بإجراء استئصال صفاق صغير آخر حول موضع الساعة 2.

بعد ذلك ، أدخل بعناية طرف شفرة شبكية زجاجية دقيقة عيار 23 من خلال الصلبة ، مشيرا إلى القطب الخلفي للعين على بعد 3.5 ملم من الطرف في موضع الساعة 8. لتجنب تكبير الشق ، اسحب الشفرة ببطء في نفس الاتجاه وقم بوضع خياطة فيكريل 7-0 مسبقا. بعد ذلك ، أدخل قنية التسريب الجانبية المخصصة في الفتحة الصلبة ، واستخدم الخيط الموضوعة مسبقا لتأمين القنية.

اضبط ضغط العين على 20 إلى 24 ملم من الزئبق. بعد ذلك ، استخدم مبزل مسطح الرأس قياس 25 لثقب الصلبة في موضع الساعة 2 ، وأدخل مصباح ثريا قياس 25 في المنفذ. قم بتأمين الضوء بشريط لاصق ، واضبطه على حوالي 30٪ من الطاقة ، ثم اضبطه بشكل فردي.

استخدم مشرطا 20 لإزالة ظهارة القرنية الوذمية لتسهيل الرؤية بشكل أفضل داخل العين. الآن ، قم بإجراء بضع تصلب آخر باستخدام شفرة الشبكية المجهرية ذات المقياس 23 عند موضع الساعة 10 وضع خياطة فيكريل 7-0 على شكل حرف U حول الصلبة المحفورة دون ربط العقدة بالكامل. أدخل طرف الجسم الزجاجي عالي السرعة في الشق وابدأ استئصال الزجاجية حول منفذ الدخول.

قم بتقطيع الخلط الزجاجي إلى قطع صغيرة بحد أقصى 2 ، 000 إلى 3 ، 000 قطع في الدقيقة ، مع الاستمرار في استئصال الزجاجية فوق القرص البصري والنخاع الليفي ، والشفط بحد أقصى 200 ملم من الزئبق. لفصل الخلط الزجاجي برفق عن شبكية العين ، أمسك الجسم الزجاجي فوق القطب الخلفي والسفلي من القرص واستمر في الشفط دون قطع. عندما يكتمل الانفصال الزجاجي الخلفي ، قم بحقن ما يقرب من 50 ميكرولتر من المركب محل الاهتمام لتصور الجسم الزجاجي العائم أثناء إزالته شبه الكامل.

عندما يتم تحضير العين ، اشطف مزرعة الخلايا المزروعة ثلاث مرات باستخدام BSS غير المكملة من الدرجة العليا. بعد ذلك ، املأ طبق زراعة الخلايا 100 × 20 ملم ب 10 ملليلتر من BSS من درجة العيون وأضف ملحق ثقافة الخلايا إلى الطبق. ضع الطبق في المنتصف تحت مجهر ضوئي ، واستخدم إبرة مجوفة بيضاوية حادة مصنوعة خصيصا لكمة ركيزة مسطحة على شكل حبة 2.4 × 1.1 ملم مع حافتين طويلتين وحافتين دائريتين خارج مزرعة الخلية.

قم بإغراق الإبرة برفق من خلال المنفذ الثاني باستخدام BSS لغسل الغرسة في طبق زراعة الخلايا المملوء ب BSS. للحصول على حافة ثالثة ، قم بعمل شق 0.5 مل في أحد الأطراف المستديرة للغرسة واستخدم ملقط تقشير غشاء عيار 23 لنقل الغرسة إلى محطة التحميل المخصصة. تأكد من أن الغرسة في وضع مستقيم ، ثم استخدم الملقط لدفع الغرسة برفق بالكامل في أداة إطلاق النار حتى يتم تأمين كل الأنسجة داخل الطرف ووضع طرف مطلق النار في محطة التحميل أسفل BSS حتى يتم زرع الخلايا.

لتمكين زرع الخلايا تحت شبكية العين ، اقترب من الشبكية العصبية بإبرة حقن تحت الشبكية قابلة للتمديد قياس 41 متصلة بحقنة محكمة الغلق للغاز وحقن BSS تحت الشبكية لإنشاء انفصال شبكية الفقاعة. عندما يبلغ قطر الفقاعة حوالي 2 إلى 3 قرص ، استخدم مقص VR رأسي عيدا مقاس 23 لتكبير بضع الشبكية إلى 1.5 ملم واستخدم سكين شق 1.4 ملم لتمديد بضع التصلب في الساعة 10 بدقة إلى نهج قياس 20. بعد ذلك ، حاول تمرير دمية مطلق النار عيار 20 من خلال بضع التصلب ، وتوسيع الشق حسب الضرورة لضمان انتقال سلس ولكن مريح لمطلق النار المحمل.

بعد ذلك ، قم بتمرير مطلق النار المحمل عبر شق الصلبة عند 20 إلى 24 ملم من الزئبق إلى حافة بضع الشبكية وحقن الغرسة تحت الشبكية من وضع فوق الشبكية. يجب أن ينتقل مطلق النار عبر الصلبة بسرعة في المحاولة الأولى ، لذا تأكد من بضع التصلب بالحجم الأمثل. يجب بعد ذلك زرع خلايا RPE تحت الشبكية بزاوية ضحلة لتجنب انحباس الحافة الأمامية للغرسة في غشاء Bruch.

اضبط الغرسة بحيث يتم وضعها تحت شبكية العين بعيدا بشكل معقول عن بضع الشبكية. بعد ذلك ، قم بإزالة المنفذ من بضع التصلب وحقن 25 ميكرولترا من التريامسينولون من خلال منفذ الثريا. باستخدام 7-0 خيوط جراحية، أغلق عمليات استئصال التصلب في الساعة 2 و10 وتحقق من وجود تسرب.

قم بإزالة قنية التسريب وأغلق آخر عملية قطع التصلب على الفور باستخدام خياطة فيكريل 7-0 الموضوعة مسبقا. باستخدام إبرة قياس 30 ، قم بحقن BSS لضبط ضغط العين حسب الضرورة ، أثناء الجس. أخيرا ، قم بخياطة الملتحمة ب 7-0 Vicryl وقم بإزالة الحرير الداعم ، مع الحرص على تجنب الضفيرة الوريدية المدارية العميقة.

معدل نجاح النقش تحت الشبكية حوالي 60٪ عند إجراء استئصال الزجاجية الأساسية ، والذي يزداد إلى أكثر من 75٪ عند إحداث انفصال زجاجي خلفي. هنا ، يتم عرض صورة انعكاس الأشعة تحت الحمراء لمنظار العين بالليزر للظهارة الصبغية الشبكية المزروعة على غشاء بوليستر بعد إجراء غير معقد ، مع ظهور ضمور المستقبلات الضوئية الناتج عن التفاعل المناعي كهالة حول الغرسة. في صورة التصوير المقطعي البصري للتماسك البصري في المجال الطيفي المقابل ، يمكن ملاحظة ترقق الطبقة النووية الخارجية كرد فعل على زرع الأجانب في RPE ، خاصة في شبكية العين مع وجود شريط انعكاس مفرط مرئي فوق الغرسة.

ومع ذلك ، فإن شبكية العين العصبية المجاورة للغرسة تظهر نطاقات انعكاس شبه طبيعية ، مما يشير إلى توصيل غير رضحي للزرع. كما لوحظ من خلال تلطيخ H / E ، يحدث تندب تحت الشبكية وضمور الطبقة النووية الخارجية في الأرانب غير المزروعة بالمناعة. يبدو أيضا أن غشاء Bruch الموجود أسفل الغرسة متجاور ، حيث تحتوي المشيمية الشعرية على بعض كريات الدم الحمراء المتناثرة ، مما يؤكد أيضا عدم وجود صدمة أثناء تسليم الزرع.

بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في ساعة واحدة إذا لم تتم مواجهة أي مضاعفات. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إنشاء فقاعة الشبكية وبضع الشبكية كبيرة بما يكفي لتناسب الغرسة. أيضا ، عادة ما يؤدي التدخل الجراحي الأسرع إلى نتائج أفضل.

بعد هذا الإجراء ، يمكن استخدام طرق أخرى مثل التصوير المقطعي للتماسك البصري أو علم الأنسجة للإجابة على أسئلة إضافية ، مثل نجاح الزرع ، والتوافق الحيوي تحت الشبكية ، وبقاء الخلايا المزروعة. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات بيولوجيا الخلايا الجذعية والمواد الحيوية لاستكشاف التوصيل تحت الشبكية لمشتقات الخلايا الجذعية و / أو الركائز الحاملة الوظيفية الحيوية لأمراض الشبكية ، وخاصة RPE. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء جراحة استئصال الزجاجية وزرع تحت الشبكية في الأرانب.

لا تنس أن العمل مع العدسة والشبكية والجسم الزجاجي والواجهة تحت الشبكية يمكن أن يكون خطيرا للغاية وأن الاحتياطات ، مثل وضع اليد الصحيح ، والتصور الجيد ، والضغط المستقر داخل العين يجب دائما اتخاذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.