التصور الأوعية الدموية ومتني التجديد بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ في الفئران العادية

تصور تجديد الأوعية الدموية والمتني بعد استئصال الكبد الجزئي بنسبة 70٪ في الفئران العادية. تقليديا ، يتم تقييم تجديد الكبد عن طريق قياس زيادة وزن الكبد وحجمه وكذلك عن طريق تحديد معدل تكاثر خلايا الكبد. في الوقت الحاضر ، نحن مهتمون بتجديد كبد الأوعية الدموية في الفئران ونريد تصور نمو الأوعية الدموية وتحديدها.

وبالتالي ، فإننا نؤسس سير العمل لتصوير تجديد الأوعية الدموية. يتكون سير العمل من أربع خطوات: تباين شجرة الأوعية الدموية ، والحصول على الأشعة المقطعية ، وإعادة البناء ثلاثية الأبعاد ، والتحليل الكمي والنوعي للصور الناتجة. يبدأ سير العمل بتباين شجرة الأوعية الدموية.

أولا نكشف الكبد ، سواء كان طبيعيا أو مقطوعا ، ثم نقوم بحقن مركب تباين السيليكون المبلمر في الوريد البابي أو الوريد الكبدي ، اعتمادا على نظام الأوعية الدموية المعني. بعد ذلك ، يخضع الكبد المزروع للمسح الضوئي في التصوير المقطعي المحوسب الصغير. بعد المسح ، نقوم بإجراء إعادة بناء الأوعية الدموية ثلاثية الأبعاد باستخدام برنامج Imalytics قبل السريري.

إذا كانت الجودة التقنية للصور الناتجة جيدة بما فيه الكفاية ، فيمكن إجراء إعادة بناء ثلاثية الأبعاد باستخدام HepaVision. يستخدم هذا البرنامج في العيادات لتخطيط جراحة الكبد الصفراوية. بالإضافة إلى التصور ثلاثي الأبعاد لشجرة الأوعية الدموية ، يسمح هذا البرنامج بتصور وحساب حجم الكبد ، والكبد الكلي وكل فص ، بناء على أوعية الإمداد والتصريف.

بعد إعادة البناء ، يمكننا تحديد معلمات إضافية تدل على نمو الأوعية الدموية مثل طول وقطر وعاء معين بمساعدة التقنيات الحسابية. سيسمح ذلك بوصف كمي لنمو الأوعية الدموية. من ناحية أخرى ، يمكن تقطيع عينات الفورمالين الثابتة Microfil إلى أقسام تسلسلية.

يمكن تلطيخ الأقسام التسلسلية ورقمنتها باستخدام ماسح ضوئي كامل للشرائح. بعد التسجيل الصلب والمرن للأقسام التسلسلية ، يمكن إعادة بناء الأشجار الوعائية ثلاثية الأبعاد لكل من الأنظمة الوريدية البوابية والكبدية. في خطوة مستقبلية ، نريد استكشاف التوزيع المكاني للأحداث الجزيئية.

أحد الأمثلة على الحدث الجزيئي ذي الأهمية في تجديد الكبد هو ظهور علامة الانتشار Ki-67 في نوى خلايا الكبد وتوزيعها المكاني في أشجار الأوعية الدموية المعاد بناؤها ثلاثية الأبعاد. بعد ذلك ، سنقدم مقدمة مفصلة عن كيفية إجراء حقن Microfil. تحضير الكواشف.

بالنسبة لخليط مركب Microfil ، نحتاج إلى مخفف MV ، ومركب MV ، في حالتنا ، MV-120 الأزرق ، وعامل المعالجة. نحتاج أيضا إلى الماصات والأنبوب والماصة. قم بإعداد اثنين من المليلتر MV-120 في أنبوب واحد سعة خمسة ملليلتر.

ثم قم بتخفيفه بإضافة ثلاثة ملليلتر MV مخفف. امزجهم عن طريق رجهم برفق. لمحلول الهيبارين الملحي ، أضف 1 ملليلتر من الهيبارين إلى محلول ملحي سعة 10 مل.

تحضير طاولة العمليات. أولا ، نحتاج إلى مجهر ، وثانيا ، هناك حاجة إلى مجموعة من المواد الاستهلاكية. 6-0 خيوط حريرية و 6-0 من مادة البولي بروبلين ، وخمسة محاقن مليلتر وواحدة من المحاقن ، وإبر قياس 30 و 21 ، وأنبوب تمديد لتوصيل الحقنة والقسطرة ، وقسطرة قياس 26 مع إدخال إبرة ، وأطراف قطنية وشاش.

ثالثا ، هناك حاجة إلى أدوات جراحية. الأدوات الصغيرة والمشابك والتخثر الكهربائي. رابعا ، هناك حاجة إلى مضخة نضح.

تحضير. ضع الفأر في غرفة تحريض التخدير وقم بتخدير الفأر بنسبة 2٪ إيزوفلوران و 0.3 مل في الدقيقة من الأكسجين. ثبت الماوس المخدر على طاولة العمليات باستخدام الأشرطة ، مع استنشاق مستمر من 2٪ إيزوفلوران و 0.3 ملليلتر في الدقيقة من الأكسجين.

حقن ميكروفيل ، النظام الوريدي البابي. قم بعمل شق عرضي على البطن باستخدام مقص لطبقة الجلد وتخثر كهربائي لطبقة العضلات. انقل الأمعاء إلى الجانب الأيسر باستخدام أطراف قطنية وقم بتغطية الأمعاء بشاش مبلل بالمحلول الملحي.

تشريح الوريد البابي تحت المجهر. ضع خياطة حريرية 6-0 تحت الوريد البابي الكبدي الإضافي على مسافة ملليمتر واحد تقريبا من تشعبه. اربطه بشكل فضفاض لاستخدامه لاحقا.

حقن محلول الهيبارين الملحي بواسطة وريد القضيب للهيبارين الجهازي لمدة خمس دقائق. ستوضح هذه الرسوم المتحركة إجراء إدخال القسطرة. أولا ، ضع خياطة الحرير 6-0 أسفل الوريد البابي الكبدي الإضافي ، ثم أدخل القسطرة قياس 26 في الوريد البابي وقم بإصلاحها باستخدام مشبك.

اربط الخيط الموضوع مسبقا لتثبيت القسطرة ومنع تدفق الدم من الوريد الطحالي والوريد المساريقي. هنا سوف نوضح الإجراء الجراحي. أدخل القسطرة قياس 26 بإبرة.

أدخل القسطرة أكثر وحرك الإبرة ببطء في نفس الوقت. إصلاح القسطرة باستخدام مشبك. املأ القسطرة بالكامل بمحلول الهيبارين الملحي لتجنب فقاعات الهواء.

قم بتوصيل أنبوب التمديد بالقسطرة وقم بإصلاحها بإحكام. قم بتشغيل مضخة التروية. ابدأ نضح الهيبارين الملحي بمعدل تدفق 0.4 ملليلتر في الدقيقة.

لاحظ أن الفصوص اليمنى تصبح شاحبة مباشرة بعد التروية. اشطف الكبد باستخدام المحلول الملحي للحفاظ على رطوبته أثناء إجراء التروية بالكامل. القتل الرحيم للفأر عن طريق التروية تحت التخدير.

استمر في تروية الهيبارين لعدة دقائق حتى يصبح الكبد كله شاحبا. قبل تروية Microfil ، أضف عامل معالجة 0.1 مل إلى مركب Microfil المحضر لتسريع إجراء البلمرة. قم بتحميل مركب Microfil في حقنة سعة خمسة ملليلتر وأنبوب تمديد.

تخلص من فقاعات الهواء عن طريق حقن محلول الهيبارين الملحي في القسطرة ، كما كان من قبل. قم بتوصيل الأنبوب بالقسطرة وتثبيته بإحكام. ابدأ حقن Microfil بمعدل تدفق 0.2 مليلتر في الدقيقة لمدة دقيقة إلى دقيقتين تقريبا.

لاحظ العامل الأزرق ينتشر ببطء في فروع الوريد البوابي. أوقف التروية عندما تظهر بنية الوعاء الدموي الأزرق على سطح كل فص كبد كما هو موضح في دائرة حمراء. اترك الكبد لمدة 15 دقيقة على الأقل لبلمرة مركب Microfil.

حقن ميكروفيل ، الجهاز الوريدي الكبدي. يتبع الإجراء بشكل أساسي نفس خطوات الحقن في الجهاز الوريدي البابي. ضع خياطة حريرية 6-0 تحت الوريد البابي الكبدي الإضافي على مسافة ملليمتر واحد تقريبا من تشعبه.

ثم أدخل قسطرة في الوريد البابي وثبتها عبر المشبك. أدخل قسطرة أخرى في الوريد الأجوف السفلي وثبته بمشبك أيضا. اربط الخيط الموضوع مسبقا لتثبيت القسطرة ومنع تدفق الدم من الوريد الطحالي والوريد المساريقي.

ضع مشبك على الوريد الأجوف السفلي فوق الهيباتيك لمنع تدفق الكبد. ربط فروع الوريد الأجوف السفلي ، بما في ذلك الأوردة الكلوية والنهاية البعيدة للوريد الأجوف السفلي. اغسل الكبد باستخدام محلول الهيبارين الملحي عن طريق القسطرة الأولى.

قم بتنقية الجهاز الوريدي الكبدي بمركب Microfil عبر القسطرة الثانية. النتائج ، إعادة بناء التصوير المقطعي المحوسب الصغير. حصلنا على إعادة بناء الأوعية الدموية ثلاثية الأبعاد باستخدام برنامج Imalytics قبل السريري بعد الفحص المسبب للتصوير المقطعي المحوسب.

ظهر تجديد الأوعية الدموية في كل من الأنظمة الوريدية البابية والكبدية على شكل استطالة وتوسيع لهياكل الأوعية الدموية الرئيسية بالاشتراك مع تفرع الأوعية الصغيرة. في اليوم الثاني بعد الجراحة ، استطالت الأشجار الوعائية للفصوص المتبقية. بحلول اليوم السابع بعد الجراحة ، أصبحت فروع صغيرة إضافية من نفس الوريد البابي الرئيسي والوريد الكبدي مرئية.

النتائج ، إعادة بناء ثلاثية الأبعاد ملونة لشجرة الأوعية الدموية الكبدية والمناطق الكبدية التابعة. تم تصور كل فص كبد بسهولة في جميع الأبعاد الثلاثة بعد إعادة بناء مشفرة بالألوان بواسطة HepaVision. كما هو موضح في الجدول ، تم تحديد الأحجام الكبدية للكبد الكلي وكل فص ، كما هو موضح هنا ، للنظام الوريدي الكبدي للكبد الطبيعي.

النتائج والمقاطع التسلسلية وإعادة البناء. من ناحية أخرى ، خضعت عينة ميكروفيل الثابتة للفورمالين للتقسيم التسلسلي. تم رقمنة الأقسام التسلسلية الملطخة باستخدام ماسح ضوئي كامل للشرائح واستخدامها لإعادة بناء شجرة الأوعية الدموية لكلا النظامين.

هذه هي المقاطع العرضية لكومة من الأقسام التسلسلية لكبد الفأر قبل وبعد التسجيل الصلب والمرن. بعد تسجيل الكمبيوتر ، يمكن إعادة بناء الأنظمة الوريدية والكبدية البوابية في نموذج ثلاثي الأبعاد واحد. تحتاج هذه الخطوة التي تستغرق وقتا طويلا يدويا وحسابيا إلى مزيد من التحسين.

الخطوة التالية ، وهي تصور التوزيع المكاني للأحداث الجزيئية فيما يتعلق بأشجار الأوعية الدموية قيد التطوير حاليا. يمكن تصور هذه الخطوة على أنها اندماج لمعلومات التصوير المقطعي المحوسب الصغير المستمدة من شجرة الأوعية الدموية المتناقضة مع المعلومات النسيجية أو كتصور ثلاثي الأبعاد للمعلومات النسيجية البحتة. في هذه الحالة ، ستكون معلومات التصوير المقطعي المحوسب الصغير بمثابة مراقبة الجودة لإعادة البناء ثلاثية الأبعاد القائمة على الأنسجة.

بمجرد تحقيق ذلك ، لدينا أداة للتحقيق بشكل أفضل في تجديد الكبد. خاصة التوزيع المكاني للأحداث الجزيئية والحمة الكبدية فيما يتعلق بتجديد الأوعية الدموية.