الفئران هند الاطراف طويل العظام تشريح ونخاع العظم عزل

الهدف العام من إجراء تشريح العظام وعزل نخاع العظم الطويل هذا هو إزالة العظام الطويلة بسرعة وبشكل منهجي وجمع نخاع العظم لمزيد من التحليل النهائي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة ببيولوجيا نخاع العظام ورم خبيث السرطان وعلم المناعة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن عملية التشريح سريعة وموحدة ، وإجراء عزل نخاع العظم معقم إلى حد ما ، ابدأ بوضع الماوس في وضع ضعيف.

ثم قم بتثبيت جميع وسادات المخلب الأربعة أسفل مفصل الكاحل ورش الماوس بنسبة 70٪ من الإيثانول ، مع غمر الساقين جيدا. بعد ذلك ، قم بعمل شق صغير على يمين خط الوسط في أسفل البطن فوق الورك مباشرة ، وقم بتمديد الشق أسفل الساق وتجاوز مفصل الكاحل. اسحب الجلد للخلف.

ثم قم بقص عضلة الفخذ المثبتة في الطرف القريب من عظم الفخذ لفضح الجانب الأمامي من عظم الفخذ ، وقم بتثبيت العضلة من الساق باستخدام الدبوس بزاوية 45 درجة من اللوحة. باستخدام المقص على الجانب الخلفي من عظم الفخذ ، اقطع أوتار الركبة بعيدا عن مفصل الركبة. ثم اسحب الجلد وعضلات أوتار الركبة المثبتة في الطرف القريب من عظم الفخذ لفضح الجانب الخلفي من العظم ، وقم بتثبيت عضلات أوتار الركبة من الساق ، ووضع الدبوس بزاوية 45 درجة.

باستخدام الملقط ، أمسك الطرف البعيد لعظم الفخذ فوق مفصل الركبة مباشرة. ثم قم بتوجيه شفرات المقص على جانبي عمود الفخذ باتجاه مفصل الورك. بعد الوصول إلى رأس الفخذ ، قم بلف المقص ، وحرك الشفرة العلوية مباشرة فوق رأس الفخذ لخلع عظم الفخذ.

الآن أمسك الجزء العلوي من عمود الفخذ بالملقط ، واقطع الأنسجة الرخوة بعيدا عن رأس الفخذ لتحرير عظم الفخذ من الحق. ثم اسحب عظم الساق بالكامل ، بما في ذلك عظم الفخذ والركبة والساق ، لأعلى وبعيدا عن الجسم ، وقم بقطع النسيج الضام والعضلات التي تربط الساق بالجلد بعناية. عندما تتم إزالة كل النسيج الضام ، قم بتمديد مفصل الكاحل بشكل مفرط وقم بلف المقص كما هو موضح للتو لخلع الساق.

الإمساك بالطرف البعيد من الساق والحرص على عدم قطع الأوتار ، اسحب الساق لأعلى وبعيدا عن الجسم ولوحة الدبوس. ثم قم بإزالة أي نسيج ضام متبقي متصل بالعظم الطويل في الركبة وأي عضلة إضافية أو نسيج ضام متصل بعظم الفخذ والساق. لتحضير العظم الطويل لعزل النخاع ، أمسك عظم الفخذ بحيث تكون الرضفة متجهة بعيدا ورأس الفخذ متجها لأسفل.

بتمديد مفصل الركبة ولف المقص لخلع الساق من عظم الفخذ. ثم قم بإزالة أي نسيج ضام يربط عظم الفخذ والساق معا. بعد ذلك ، أمسك عظم الفخذ بحيث يكون الجانب الأمامي متجها بعيدا ورأس الفخذ متجها لأسفل ، وقم بتوجيه المقص لأعلى عمود الفخذ إلى اللقمة

قم بتدوير المقص برفق ذهابا وإيابا لإزالة اللقمة والرضفة والمشاشية ، مما يؤدي إلى تعريض الميتافيز. بعد ذلك ، استخدم الملقط والمقص والكيمويبس لإزالة أي عضلة إضافية أو نسيج ضام متصل بعظم الفخذ. بعد ذلك ، أمسك الساق بحيث يكون الجانب الأمامي متجها بعيدا ونهاية الكاحل متجهة لأسفل.

إذا كانت المشاشية الظنبوبية سليمة ، فقم بتوجيه المقص لأعلى عمود الظنبوب إلى اللقمة وقم بتدوير المقص برفق ذهابا وإيابا لإزالة اللقمة والمشاشية ، مما يؤدي إلى تعريض ميتافيزيا الظنبوب. ثم قم بإزالة أي عضلة إضافية أو نسيج ضام متصل بالساق ، كما هو موضح للتو. لحصاد نخاع العظام ، ادفع أولا إبرة قياس 18 من خلال قاع أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.5 ملليلتر.

ثم ضع العظام الطويلة في الأنبوب ، ونهاية الركبة لأسفل ، وأغلق الغطاء. قم بتعشيش أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.5 مل في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر ، وقم بعمل أجهزة الطرد المركزي للأنابيب بمعدل أكبر من أو يساوي 10 ، 000 مرة جم في جهاز طرد مركزي دقيق لمدة 15 ثانية. تحقق من أن نخاع العظم قد تم نسجه من العظام عن طريق الفحص البصري.

يجب أن تظهر العظام بيضاء ، ويجب أن تكون الحبيبات الكبيرة مرئية في الأنبوب الأكبر. ثم تخلص من العظام في أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.5 مل ، نخاع العظم في الحل المناسب لتحليل المصب المطلوب. تقنية التشريح السريع هذه مناسبة لعدد من التحليلات النهائية ، بما في ذلك قياس الأنسجة والأنسجة

في الواقع ، كما يتضح من إعادة بناء التصوير المقطعي المحوسب الصغير التمثيلي ، يتم الحفاظ على كل من العظم الإسفنجي والقشرة القشرية ، مما يسمح بقياس كمية دقيقة للمعلمات الهيكلية الموحدة لقياس الأنسجة العظامية. في هذا القسم النسيجي التمثيلي من الظنبوب الرسمي والثابت ومنزوع الكلس الملطخ ب H و E ، يمكن ملاحظة الحفاظ على سلامة كل من العظام المتكلسة ونخاع العظم الخلوي للتحليل النسيجي. علاوة على ذلك ، فإن نخاع العظم المعزول بواسطة هذا الإجراء مناسب للعديد من التطبيقات النهائية ، بما في ذلك زراعة الخلايا الأولية لناقضات العظم أو بانيات العظم.

بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال التقنية في حوالي سبع دقائق ، من تشريح العظام الطويل إلى عزل نخاع العظم ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة الإجراء ، من المهم أن تتذكر وضع الماوس لسهولة التشريح. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل FACS أو عمليات الخلية المفردة الأخرى للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بالتغيرات في مجموعات خلايا نخاع العظم.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تشريح العظام الطويلة للفئران بسرعة وعزل نخاع العظم عن طريق الطرد المركزي.