تستخدم علفا بروتوكول مسار طول ل ذبابة الفاكهة يرقات

الهدف العام من هذا الاختبار هو تحديد المكون الحركي لذبابة الفاكهة سلوك اليرقات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الوراثة السلوكية حول المساهمات الجينية والبيئية في الاختلافات الفردية في سلوك اليرقات. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها سريعة وقابلة للتكرار وتسمح بجمع أحجام العينات الكبيرة.

بشكل عام ، قد يكافح الأشخاص الجدد في هذه الطريقة لأن نجاح الاختبار يعتمد على توقيت النمو والتعامل المتسق والدقيق مع الاختبار. سيظهر الإجراء Ina Anreiter و Oscar Vasquez ، طلاب الدراسات العليا في مختبري. قم بإعداد الزجاجة عن طريق قطع الثقوب في جانب واحد من زجاجة ثقافة ذبابة بلاستيكية بسعة ستة أونصات.

بعد ذلك ، استخدم حقنة لملء أغطية أطباق بتري بوسط عصير العنب المعد مسبقا حتى يصنع سطح وسط عصير العنب قبة فوق حافة الغطاء. قم بتخزين أطباق العنب في وعاء رطب ومحكم الغلق عند أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين. صب 40 مل من طعام الذباب المعد مسبقا في أطباق بتري مقاس 100 × 15 ملم.

احصل على ثلاث ألواح زجاجية سوداء بعشرة آبار دائرية قطرها عشرة سنتيمترات ومرتبة في تصميم اثنين في خمسة لاختبار اليرقات ، وموزعة زجاجية سوداء تستخدم لنشر عجينة الخميرة على ألواح زجاج شبكي. ثم افصل الأغطية عن قيعان أطباق بتري. اجمع 100 إلى 150 أنثى و 50 إلى 75 ذكرا.

اسمح للإناث والذكور بالتزاوج بين عشية وضحاها في زجاجة ثقافة ذبابة سعة ستة أونصات مع طعام ذبابة قياسي. انقل الذباب إلى زجاجة احتكاك ، واستخدم شريطا لاصقا لتأمين طبق العنب بكمية صغيرة من معجون الخميرة الطازج فوق الجزء العلوي من الزجاجة. اترك الزجاجة واقفة رأسا على عقب مع صفيحة العنب في الأسفل للسماح للبالغين بوضع البيض على طبق العنب.

تخلص من طبق العنب الأول بعد 24 ساعة وضع طبق عنب جديد في زجاجة التعليق. بعد 22 ساعة ، أخرجي أطباق العنب من الزجاجات وضعيها في طبق بتري مقاس 60 × 15 ملم. بعد ذلك ، ضع طبق عنب جديد مع معجون الخميرة الطازجة على الزجاجة.

قم بإزالة جميع اليرقات والتخلص منها من صفيحة العنب المصنفة باستخدام مسبار تشريح. احتضن أطباق العنب التي تم تطهيرها لمدة أربع ساعات في الظروف القياسية. بعد أربع ساعات ، اختر 100 L1 ، أو يرقة الطور الأول ، لكل سلالة من أطباق العنب وضعها على أطباق الطعام.

ضع اليرقات على الطعام برفق ، دون ثقب الطعام ودون دفن اليرقات. يمكن قطف مجموعات من عشر يرقات ووضعها في وقت واحد. تجنب الازدحام عن طريق توزيع اليرقات على طبق الطعام.

احتضن أطباق الطعام حتى تكون الاختبار قبل عشر ساعات من بدء التجول ، عندما تغادر اليرقات الطعام بحثا عن موقع شرنق. إذا بدأت اليرقات في التجول ، وكانت تتحرك على غطاء طبق بتري ، كما ترون هنا ، فإن أكبر من أن تختبر ويجب إعادة تقييم وقت نموها. قم بإذابة الخميرة في الماء بنسبة واحد إلى اثنين.

تأكد من أن المعجون النهائي يقطر ويترك شرائط على سطح المعجون تذوب بسرعة. يعد تقييم الاتساق الصحيح لمعجون الخميرة أكثر أهمية من استخدام النسبة الدقيقة بسبب التباين بين العلامات التجارية ودفعات الخميرة والبيئة. باستخدام فرشاة الرسم ، اختر اليرقات برفق من طبق الطعام من السلالة الأولى.

اجمع اليرقات في طبق بتري واغسل اليرقات برفق بالماء لإزالة كل الطعام. اغسل اليرقات بسرعة بملليلترين من الماء واتركي اليرقات برفق حتى تجف بمنديل معملي. احتفظ باليرقات في بيئة رطبة ولكن لا تغمرها في الماء لتجنب الإجهاد.

رتب ثلاث لوحات اختبار جنبا إلى جنب ، واضبط مؤقتا لمدة خمس دقائق لكل لوحة اختبار. ضع معجون الخميرة على الجزء العلوي من لوحات الاختبار واستخدم الموزعة لتوزيع طبقة رقيقة من عجينة الخميرة على كل لوحة اختبار بحيث تحتوي جميع الآبار على طبقة متساوية من الخميرة. ضع يرقة واحدة برفق في وسط كل بئر.

ابدأ المؤقت لمدة خمس دقائق مباشرة بعد وضع اليرقات الأولى على كل طبق. ثم ضع باقي اليرقات في الآبار المتبقية. ضع غطاء طبق بتري فوق كل بئر.

عندما ينفد المؤقت ، ابدأ في تتبع أطوال المسار المتبقية في الخميرة باستخدام علامة دائمة دون إزالة اليرقات من اللوحة. تتبع أطوال المسار بنفس الترتيب والسرعة التي تم بها وضع اليرقات على الألواح. أخيرا ، كرر خطوات اختبار طول مسار اليرقات لكل سلالة.

كشفت البيانات التي تم جمعها على مدار ثلاثة أيام متتالية من الاختبار عن تأثير إجهاد كبير ، حيث تسافر المركبات الجوالة أبعد من الجالسات. بالإضافة إلى تأثير الإجهاد ، كان لليرقات التي كانت محرومة من الطعام لمدة أربع ساعات قبل الاختبار أطوال مسارات أقل بكثير من اليرقات التي تغذى. بشكل عام ، كانت أطوال المسار أطول عندما تمت تربية كلتا السلالتين على أغذية غنية بالمغذيات مقارنة بالأطعمة منخفضة المغذيات.

إذا تم إجراؤه بشكل صحيح ، فإن هذا الاختبار يسمح لشخص واحد باختبار ما يصل إلى 500 يرقة بسهولة في أربع ساعات ، مما يجعله ذا قيمة للتنميط الظاهري على نطاق واسع. باتباع الإجراء الذي أظهرناه للتو ، يمكن اختبار متغيرات أخرى مثل الجنس أو الحرمان من الطعام أو جودة الطعام لإظهار تأثير هذه المتغيرات على أنماط الحركة المتعلقة بالطعام. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية قياس الحركة المتعلقة بالغذاء ذبابة الفاكهة لتقييم المساهمات الجينية والبيئية للاختلافات الفردية في السلوك.