Name: الفئران البروستاتا الجزئي تشريح والإخصاء الجراحي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: تعلم تشريح البروستاتا الجزئي والإخصاء الجراحي في الفئران لدراسة سرطان البروستاتا وتأثيرات الهرمونات. هذه الطريقة تتيح فحص الغدد البروستاتية بشكل فردي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقدمت بعض الشخصيات في هذه المخطوطة بسخاء من قبل المختبر بارت O. وليامز. معتمدة على الكتاب من قبل المعهد الوطني للسرطان يمنح U54CA143803، CA163124، CA093900، وCA143055.

هذا البروتوكول يلتقي ويتبع المبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدم جامعة جونز هوبكنز. 1. الصغرى تشريح البروستات ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس خنقا غاز ثاني أكسيد الكربون أو أسلوب معتمد بديل وفقا للمبادئ التوجيهية رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دبوس الماوس في موقف ضعيف إلى لوحة تشريح عن طريق وضع دبوس من خلال كل من الكفوف الأربعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رش البطن مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد الجلد من أسفل البطن مع ملقط، واستخدام المقص لقطع طريق الجلد أو الغشاء البريتوني حوالي 1 سم الأمامي إلى فتحة القضيب، والحرص على عدم قطع أي أجهزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الجلد والغشاء البريتوني من أسفل البطن، بزيادة جانبي البطن إلى القفص الصدري، وفضح التجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على المثانة والمسالك البولية التناسلية، وكشف لهم عن طريق تحريك بلطف أجهزة الدهون وغيرها إلى الجانب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باليودملقط نانوغرام، وقبضة الأسهر في قاعدة بالقرب من مجرى البول، والمسيل للدموع بعيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر مع الأسهر المعاكس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط، بعناية قبضة المثانة وسحب عنه، بينما في وقت واحد باستخدام مقص لقطع طريق مجرى البول أسفل المثانة والبروستاتا البطنية (حوالي 1 سم تحت قاعدة المثانة). ملاحظة: كما يتم سحبها المثانة، وسوف في (المثانة تحتوي على، قسم من مجرى البول، كل فصوص البروستاتا، والحويصلات المنوية) كامل الجهاز البولي التناسلي تأتي معها. قد يكون هناك بعض المقاومة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجهاز البولي التناسلي (الاتحاد العام للعمال) إلى 60-100 مم طبق بتري تحتوي على ما يقرب من 5-10 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تؤدي الجزء المتبقي من بروتوكول تشريح تحت المجهر. استخدام اثنين من ملقط غرامة، واحد في كل يد. عقد ملقط &quot;مثل قلم رصاص&quot; وراحة الساعدين على أعلى مقاعد البدلاء وذلك لتحقيق استقرار لهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط غرامة لوضع الاتحاد العام للعمال بحيث المثانةعلى القمة، وأشار مجرى البول أسفل، ويتم وضع الحويصلات المنوية على جانبي المثانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبضة مجرى البول مع ملقط واحد وبعناية سحب الدهون بعيدا مع ملقط أخرى دون تمزيق أي نسيج البروستاتا. ملاحظة: سوف تظهر الدهون &quot;لامعة&quot; نسبة إلى الأنسجة المحيطة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبمجرد إزالة الدهون، واستخدام ملقط لتمزيق النسيج الضام بين اثنين من فصوص البطنية من البروستاتا وفرقوا بينهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة واحدة من الفص بطني، استخدم واحد ملقط لقبضة الفص البطني واحد بالقرب من الحافة، واستخدام الملقط أخرى إلى قبضة أن الفص في قاعدة أقرب إلى مجرى البول ممكن. في حين لا تزال تخيم على قاعدة من الفص، استخدام الملقط أخرى إلى قبضة مجرى البول. سحب الفص بعيدا عن مجرى البول مع شركة، الحركة السلسة. تأكد بعدم بقاء أنسجة البروستاتا تعلق على مجرى البول. وضع الفص في الوسط المناسب، اعتمادا على الخطوة التجريبية المقبلة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإصلاح والبارافين تضمين لياليوافرة للتحليل النسيجي، وضع الفص في 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة (NBF) 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفص في تجميد المتوسطة، مثل أكتوبر، لحفظ البرودة وباجتزاء 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفص في برنامج تلفزيوني الباردة لعزل خلية واحدة للثقافة أو التدفق الخلوي 9. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 1.15 مع الفص البطني الآخرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة واحدة من الفص الأمامي، واستخدام الملقط لسحب بلطف الفص بعيدا عن الحويصلة المنوية، والتأكد من عدم ثقب الحويصلة المنوية. مرة واحدة الفص مستقلة عن الحويصلة المنوية، إزالته في نفس منوال الفص البطني في خطوة 1.15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 1.17 مع الفص الأمامي الآخرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الوجه الجهاز البولي التناسلي المتبقية على مثل هذا البروستاتا ظهري مرئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة واحدة من الفص الظهرية الوحشية، واستخدام ملقط لتمزيق النسيج الضام بين اثنين من الفص الظهرية الوحشية وكذلك النسيج الضام بين الفصوص ورانه الخلفية منطقة الحويصلات المنوية. إزالة الفص بطريقة مماثلة كما الفص البطني في خطوة 1.15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 1.20 مع الفص ظهراني الآخرين. </li></ol> 2. الإخصاء الجراحي ملاحظة: هذا هو عملية جراحية البقاء على قيد الحياة، لذلك عقامة، والتخدير، وإدارة الألم مهمة لاستكمال الأخلاقي والناجح لهذا البروتوكول. متابعة جميع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية. استخدام مصدر حراري خارجي، مثل بطانية المياه إعادة تدوير، أثناء إجراء العمليات الجراحية لمنع انخفاض حرارة الجسم. لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية. لا عودة الحيوان الذي خضع لعملية جراحية للشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما. الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل استخدامها في الجراحة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على سطح نظيف ومعقم تخدير الماوس باستخدام التدابير المناسبة (على سبيل المثال 2٪ استنشاقه الأيزوفلورين) وموقف م[أوس] في موقف ضعيف. ملاحظة: يمكن أيضا أساليب التخدير البديلة، مثل الكيتامين، يمكن استخدامها، اعتمادا على بروتوكول الحيوان المعتمدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق ردود الفعل الماوس عن طريق معسر أصابع القدم. إذا لم الماوس رد فعل، انتقل إلى الخطوة التالية. إذا لم تتفاعل، الانتظار 1-3 دقائق والتحقق مرة أخرى. حلق المنطقة الجراحية مع الحلاقة الكهربائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جو معقم و مطهر إعداد البطن من الفأرة باستخدام الدعك بالتناوب من 70٪ من الإيثانول واليود أو الإجراءات الموصى بها من قبل الموظفين البيطريين المؤسسي أو IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مشرط معقم، وجعل شق عمودي 1 سم من خلال الجلد في خط الوسط من أسفل البطن، حوالي 1.5 سم الأمامي للقضيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (&lt;1 سم) من خلال الغشاء البريتوني، الحرص على عدم قطع أي أجهزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط معقم، وقبضة قطع حافة الصفاق ورفعه برفق بحيث تكون قادرا على رؤية التجويف البريتوني تحت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط معقم آخر، والوصول إلى الالبريد التجويف البريتوني وقبضة إما إلى اليسار أو اليمين منصة الدهون الخصية، الأفقي إلى المثانة. سحب لوحة الدهون من خلال فتحة في الصفاق والجلد حتى تأتي الخصية بها كذلك. احرص على عدم إصابة أي أنسجة أو أعضاء أخرى خلال هذه الخطوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قلم الكي، وقطع من خلال لوحة الدهون التي تحتجز الخصية. خفض ببطء من خلال شريان الخصية مع الكي القلم ملاحظة: إذا تم قطع شريان الخصية سريع جدا، قد يكون هناك الكثير من نزيف قد يكون الماوس ليتم التخلص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم قطع لوحة الدهون والشرايين، وإزالة الخصية والدهون وسادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2،6-2،9 مع الخصية الأخرى. ملاحظة: أسلوب بديل لإزالة الخصيتين هو ligate جراحيا شريان الخصية، تليها قطع السفينة مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة الصفاق مغلق مع خياطة للامتصاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أغلق التيلة الجلد مع مقاطع الجرح الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة مسكن لإدارة الألم، ومكانالماوس في قفص نظيفة في قفص دفئا لمدة 5-10 دقائق. رصد الماوس لعلامات الألم أو النزيف. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Impot+Res%22%5BJournal%5D)">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238(2011).</li>
<li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice%3A+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li>
<li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li>
<li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li>
<li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li>
<li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li>
<li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men--warning%3A+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li>
<li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li>
<li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+genetics+of+prostate+cancer%3A+new+prospects+for+old+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li>
</ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

البروستاتا الصغيرة تشريح يسمح للتجريب الفص محددة وتحليل البروستاتا الماوس (الشكل 1). في نماذج الفئران المعدلة وراثيا، ويمكن اعتبار الظواهر في فص واحد أن لا ينظر في غيرها. أيضا، للتحليل النسيجي، يؤكد هذا البروتوكول الذي أقصى قدر ممكن من أنسجة البروستات نقية يمكن مقطوع وملطخة، دون غيرها من أنسجة الجهاز البولي التناسلي موجودة في القسم. وأخيرا، لإجراء التجارب وحيدة الخلية، ويسمح هذا البروتوكول لعزل خلايا البروستاتا نقية تقريبا. يمكن أن مجموعات تخصيب الخلايا الظهارية ا...

البروستاتا هي الموقع الاكثر شيوعا من سرطان بين الرجال في الولايات المتحدة. فإن ما يقرب من 220،000 من الرجال وسيتم تشخيص كل عام مع سرطان البروستاتا، وحوالي 27،000 الرجال فريسة لمرضهم 1. الرجال لديهم خطر 1 في 7 مدى الحياة لتشخيص سرطان البروستاتا في الولايات المتحدة 1. البروستات الحميدة تضخم (BPH)، وتوسيع المرتبطة بالعمر غير سرطاني في البروستاتا، هو أيضا شرط على نطاق واسع، مما يؤثر على أكثر من 80٪ من الرجال فوق 80 2. وعلى هذا النحو، والبروستاتا هي محور قدرا كبيرا من البحث. وقد استخدمت نماذج الماوس على نطاق واسع لدراسة أمراض البروستاتا 3. وعموما، فإن البروستاتا الماوس هو ممثل ممتاز للغدة الإنسان 4، ولكن هناك أوجه التشابه والاختلاف بين الفأر وتشريح البروستات البشري وعلم وظائف الأعضاء 5. في كلا النوعين، وتقع البروستاتا عند قاعدة المثانة، التي تحيط مجرى البول. غدة البروستاتا الإنسان هو لو واحديكون، تنقسم إلى أربع مناطق: المركزي، والانتقال، الطرفية، والأمامي سدى عضلي ليفي. في المقابل، فإن البروستاتا الماوس تتكون من ثلاثة فصوص يقترن في مواقع مختلفة حول الإحليل: الأمامي، بطني، وظهراني جانبي. على المستوى الخلوي، والفرق الرئيسي هو أن الخلايا القاعدية إلى نسبة الخلايا اللمعية في الإنسان حوالي 1: 1، ولكن من 1: 4 في الفئران 6. سدى الفئران هي أيضا مختلفة في الفئران النسبية على البشر - البشر لديهم العضلات الملساء أكثر اتساعا، في حين أن طبقة العضلات هو أرق بكثير في البروستاتا في الفئران. والصحيح تحديد وتشريح، والتعامل مع البروستاتا الماوس ضرورية لبحث الماوس البروستاتا. مستويات الهرمون يؤثر بشكل كبير على التنمية والتوازن للغدة البروستاتا لدى كل من البشر والفئران. في حين يبدو الاستروجين للعب دور في تنمية البروستاتا 7، الهرمون الأكثر أهمية في البروستاتا هو هرمون تستوستيرون. هرمون التستوستيرون هو ضروري لتطور غديد الصيانة. التالية إما الإخصاء البدني أو الكيميائي، ما يقرب من 90٪ من الخلايا اللمعية في apoptose البروستات الكبار، والغدة تتقلص. إذا كان يعيد التستوستيرون للفرد في ظل ظروف الإخصاء، والبروستاتا هي قادرة على تجديد نفسها بكامل طاقتها. يبدو هرمون تستوستيرون أيضا لدفع سرطان البروستاتا، وهذا هو السبب العلاج الحرمان الاندروجين هو استراتيجية علاجية شائعة الاستخدام. ومع ذلك، العديد من أنواع السرطان البروستاتا تصبح مقاومة للالحرمان الاندروجين. وبالإضافة إلى ذلك، الرجال الذين يخضعون للعلاج الحرمان من الأندروجين لعلاج سرطان البروستاتا الخضوع لدورات الظروف مخصي ومجدد. في الماوس، الإخصاء الجراحي، جنبا إلى جنب مع تجديد الهرموني للالبروستاتا عن طريق إعادة تقديم التستوستيرون، هو أداة هامة لدراسة مقاومة الإخصاء وآثار الدراجات التستوستيرون في البروستات. في هذه المقالة، وسوف نناقش وإظهار التقنيات المناسبة التي يمكن من خلالها المستخدمانه والصغرى تشريح البروستات الماوس، فضلا عن جراحيا يخصوا على فأرة الحاسوب.

<table><tbody><tr><td>الأدوات الجراحية</td><td>Roboz</td><td>مختلف</td><td></td></tr><tr><td>الفورمالديهايد</td><td>سيجما</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT متوسط</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>يجب وضعها على الثلج الجاف للتجميد, وتخزينها في -80 & درجة; C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>متاح أيضا من البائعين عبر الإنترنت</td></tr><tr><td>قلم Cuutery</td><td>Pen Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>خياطة الحرير</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>مقاطع الجروح الجراحية</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

الفئران البروستاتا الجزئي تشريح والإخصاء الجراحي

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

تستخدم نماذج الفئران على نطاق واسع لدراسة سرطان البروستاتا والأمراض الأخرى. يعتبر الفأر نموذجا ممتازا لدراسة البروستاتا وقد تم استخدامه كبديل للاكتشافات في تطور البروستاتا البشري وأمراضه. يسمح التشريح الدقيق للبروستاتا بدراسة متسقة لتشريح البروستاتا الخاص بالفص ، والأنسجة ، والخصائص الخلوية في حالة عدم تلوث الأنسجة الأخرى. يؤثر هرمون التستوستيرون على تطور البروستاتا ومرضه. يعد علاج الحرمان من الأندروجين علاجا شائعا لمرضى سرطان البروستاتا ، لكن العديد من أورام البروستاتا تصبح مقاومة للإخصاء. يسمح الإخصاء الجراحي لنماذج الفئران بدراسة مقاومة الإخصاء والجوانب الأخرى للبيولوجيا الهرمونية على البروستاتا. يمكن أن يقترن هذا الإجراء بإعادة إدخال هرمون التستوستيرون ، أو التجديد الهرموني للبروستاتا ، وهي طريقة قوية لدراسة سلالات الخلايا الجذعية في البروستاتا. معا ، يفتح تشريح البروستاتا الدقيق والإخصاء الجراحي العديد من الفرص لإجراء أبحاث قوية ومتسقة لتطور البروستاتا وأمراضه. تصف هذه المخطوطة بروتوكولات التشريح الدقيق للبروستاتا والإخصاء الجراحي في فأر المختبر.

تم إزالة كل فصوص البروستاتا ستة من الماوس عن طريق البروستاتا الصغيرة تشريح (الشكل 1). ويتكون الجهاز البولي التناسلي كامل (UGT) من كل فصوص البروستاتا، والمثانة، الحويصلات المنوية، والإحليل (الشكل 1A). الأسهر يعلقها على مجرى البول، ولكن هي لا لزوم لها البروستاتا الصغيرة تشريح، وبالتالي يمكن الغواصين قبل إزالة الاتحاد العام للعمال عن طريق قطع الإحليل (الشكل 1B-1C). سيبقى الجهاز البولي التناسلي معا مرة...

توضح هذه المخطوطة بروتوكولات البروستاتا الدقيقة تشريح والإخصاء الجراحي في مختبر الفار. نحن أيضا تصوير النتائج التمثيلية التي تنتجها هذه البروتوكولات. وأخيرا، ونحن نناقش مزايا والاستفادة من هذه البروتوكولات.

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

الهدف العام من هذه الإجراءات هو إتاحة دراسة البروستاتا، بالإضافة إلى الظروف الهرمونية المتغيرة داخل الفأر. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال سرطان البروستاتا، مثل تأثيرات الحرمان الهرموني على التسرطن في البروستاتا. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في إمكانية دراسة تأثيرات العمليات المرضية والتغيرات الهرمونية المختلفة في غدد البروستاتا الفردية.ابدأ بتثبيت فأر على لوحة التشريح في وضع الاستلقاء الظهري عن طريق غرز دبابيس في وسائد أقدام كل مخلب، ثم رش البطن بـ 70%ethanol. بعد ذلك، أمسك جلد أسفل البطن باستخدام الملاقط، واستخدم المقص لقص الجلد والبريتون في نقطة تبعد حوالي واحد سنتيمتر أمام فتحة القضيب. استمر في قص الجلد والبريتون من أسفل البطن صعوداً على كلا جانبي البطن وصولاً إلى القفص الصدري، وذلك لكشف التجويف البريتوني.بعد تحديد موقع المثانة والمجرى البولي التناسلي (UGT)، قم بتحريك الدهون والأعضاء الأخرى برفق إلى الجانب للكشف عن الأنسجة البولية. بعد ذلك، وباستخدام ملقط، أمسك الأسهر عند قاعدته بالقرب من الإحليل، ثم قم بنزع الوعاء. وبعد إزالة القناة الأخرى، استخدم الملقط لإمساك المثانة وسحبها للأعلى بعناية، مع استخدام المقص في الوقت ذاته للقطع عبر الإحليل أسفل البروستاتا البطنية وعلى بعد سنتيمتر واحد تقريباً أسفل قاعدة المثانة.انقل الجهاز البولي التناسلي الذكري (UGT) الذي تم حصاده إلى طبق بتري بقطر 60 إلى 100 مليمتر يحتوي على 5 إلى 10 مليلتر تقريباً من محلول PBS، وضع الطبق تحت مجهر التشريح. بعد ذلك، أمسك زوجاً من الملاقط الدقيقة في كل يد، مع إمساك الأدوات مثل أقلام الرصاص، وأسند الساعدين على سطح المختبر على جانبي المجهر للحفاظ على ثباتهما. قم بتوجيه الجهاز البولي التناسلي الذكري (UGT) باستخدام الملاقط بحيث تكون المثانة متجهة للأعلى، والإحليل متجهاً للأسفل، والحويصلات المنوية متمركزة على جانبي المثانة.أمسك الإحليل بملقط واحد، واستخدم الملقط الآخر لسحب الدهون بعناية دون إزالة أي نسيج من البروستاتا. وعند إزالة كافة الدهون، قم بتمزيق النسيج الضام بين الفصين البطنيين للبروستاتا لفصلهما. بعد ذلك، وأثناء الإمساك بأحد الفصين البطنيين بالقرب من الطرف باستخدام زوج من الملاقط، أمسك بقاعدة الفص في أقرب نقطة ممكنة من الإحليل.الآن، حرك زوج الملاقط الآخر لتثبيت الإحليل مع سحب الفص بعيداً عن الوعاء الدموي بحركة ثابتة وسلسة. تأكد من عدم وجود أي أنسجة بروستات متبقية ملتصقة بالإحليل. بعد ذلك، ضع الفص في الوسط المناسب، وفقاً للخطوة التجريبية التالية.بعد عزل الفص البطني الآخر بنفس الطريقة، استخدم الملقط لسحب أحد الفصوص الأمامية برفق بعيداً عن الحويصلة المنوية، مع الحرص على عدم ثقب الحويصلة المنوية. ثم بمجرد استقلال الفص عن الحويصلة المنوية، قم بإزالته بنفس الطريقة التي تم توضيحها للتو للفص البطني. بعد عزل الفص الأمامي الثاني، اقلب غدة UGT المتبقية بحيث يصبح البروستاتا الظهرية مرئية، واستخدم الملقط لتمزيق النسيج الضام بين الفصين الظهريين الجانبيين وبين الفصوص والمنطقة الخلفية للحويصلات المنوية.بعد ذلك، قم بإزالة الفصوص الجانبية الظهرية الفردية، كما تم توضيحه للتو. لإجراء عملية الإخصاء، ابدأ بوضع فأر مخدّر على سطح نظيف ومعقم في وضعية الاستلقاء على الظهر، وتأكد من مستوى التخدير المناسب عن طريق قرص إصبع القدم. إذا لم يستجب الفأر، استخدم ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة المنطقة الجراحية وتعقيم البطن.بعد ذلك، استخدم مقصاً جراحياً معقماً لإجراء شق عمودي بطول 1 cm عبر خط منتصف جلد أسفل البطن، على مسافة 1.5 cm تقريباً أمام القضيب، يليه شق أصغر عبر البريتون، مع الحرص على عدم قطع أي من الأعضاء. وباستخدام ملقط معقم، ارفع حافة البريتون المقطوعة برفق لرؤية التجويف البريتوني، واستخدم ملقطاً معقماً آخر لسحب إحدى الوسائد الدهنية للخصية حتى تظهر الخصيتان. ثم استخدم قلم كيّ لقطع الوسادة الدهنية ببطء، مع تثبيت الخصيتين حتى يتم قطع الشريان الخصوي.إذا تم قطع الشريان بسرعة كبيرة، فقد ينزف الوعاء الدموي بشكل مفرط، مما يتطلب القتل الرحيم للفأر. لذا، أوصي بتسخين قلم الكي في نبضات متقطعة، وعدم تركه يسخن أكثر من اللازم، ثم تحريك الأداة ببطء عبر الشريان حتى لا ينزف الحيوان حتى الموت. وبمجرد قطع الوسادة الدهنية والشريان، يتم التخلص من الخصية والوسادة الدهنية وتكرار عملية الإخصاء للخصية الأخرى.بعد إزالة الخصية الثانية، أغلق الصفاق باستخدام غرز حريرية معقمة، وثبّت الجلد باستخدام مشابك الجروح الجراحية. بعد ذلك، أعطِ مسكنات الألم للسيطرة على الألم وضع الفأر في قفص نظيف، فوق سخان أقفاص، لمدة تتراوح من 5 إلى 10 دقائق مع المراقبة، حتى يتعافى تماماً. يتكون الجهاز البولي التناسلي الكامل من جميع فصوص البروستاتا الستة، والمثانة، والحويصلات المنوية، والإحليل.يتصل الوعاء الناقل بالإحليل، إلا أنه غير ضروري لعملية التشريح الدقيق للبروستاتا، وبالتالي يمكن فصله قبل إزالة المسالك البولية التناسلية (UGT). ستظل المسالك البولية التناسلية سليمة بمجرد إزالتها من البطن؛ وتكون مغطاة بنسيج دهني يجب إزالته للوصول إلى فصوص البروستاتا. في هذه التجربة النموذجية، تلا عملية الإخصاء دورتان من التجديد الهرموني، وتمت مراقبة مستويات التستوستيرون في المصل باستخدام تقنية ELISA.كما هو متوقع، اختفت مستويات التستوستيرون فعلياً في ظل ظروف الإخصاء. وفي وجود التاموكسيفين، وهو معدل انتقائي لمستقبلات الإستروجين، لم يُلاحظ أي فرق معنوي مقارنة بالحالة الطبيعية هرمونياً. ومع ذلك، أدت إعادة إدخال التستوستيرون بعد الإخصاء إلى ارتفاع حاد ومفاجئ في مستويات التستوستيرون في المصل.بعد التشريح المجهري، تتقلص فصوص البروستاتا في الفئران المخصية بشكل ملحوظ، بينما تستعيد الفصوص من الحيوانات المعالجة بالتستوستيرون حجمها الأصلي. وعلاوة على ذلك، يكشف صبغ الهيماتوكسيلين والإيوزين لأنسجة البروستاتا الأمامية في الظروف الطبيعية، والخصي، والتجدد، عن انخفاض حاد في نمو الأنسجة القوي في المقاطع المأخوذة من الحيوانات المخصية. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إتمامها في غضون خمس دقائق لكل فأر، إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.أثناء محاولة إجراء عملية الإخصاء، من المهم تذكر الحفاظ على تعقيم كل شيء والتأكد من التحكم في الألم الذي يشعر به الفأر. بعد الإخصاء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل إعادة إدخال الأندروجين، للإجابة على أسئلة إضافية حول تأثيرات التستوستيرون على أورام البروستاتا. بعد تطويرها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال سرطان البروستاتا لاستكشاف التسرطن، والنمو، ومقاومة الإخصاء في الفئران.

murine-prostate-micro-dissection-and-surgical-castration

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

في هذا الفيديو ، نصف إجراء تشريح الجهاز البولي التناسلي أو UGS من نموذج فأر ذكر. يتم تشريح UGS بشكل أكبر خارج الجسم الحي لعزل غدة البروستاتا ودراسة دورها في تطور سرطان البروستاتا.

استخراج البروستاتا من الجهاز البولي التناسلي للفأر: تقنية لفصل غدة البروستاتا عن أعضاء الجهاز البولي والأعضاء التناسلية الأخرى في الفأر الذكر

في هذا الفيديو ، نوضح إجراء إعطاء الحقن داخل البروستاتا لخلايا سرطان البروستاتا في نموذج الفأر. يمكن استخدام نماذج الفئران التقويمية لدراسة أصل المرض والاستجابة للعلاجات العلاجية في بيئة غير جراحية وذات صلة سريريا.

الحقن داخل البروستاتا للخلايا السرطانية: تقنية لتوصيل الخلايا السرطانية لإنشاء نموذج فأر سرطان البروستاتا التقويمي

يصف هذا الفيديو طريقة لتحرير جينات معينة في خلايا غدة البروستاتا باستخدام نظام توصيل قائم على الفيروس الغدي. يسمح هذا النهج بتغيير تقويم العظام والموضعي للتعبير الجيني باستخدام تقنية كريسبر لتطوير نماذج فئران جديدة لسرطان البروستاتا.

نمذجة سرطان البروستاتا في نماذج الفئران المعدلة وراثيا: تقنية تحرير الجينات الموضعية بوساطة CRISPR / Cas9 في خلايا فص البروستاتا الأمامي للفأر

هذا النموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية يسمح للالكمي لحجم الورم، وتعميم الخلايا السرطانية، وتشكيل ورم خبيث متميزة إلى الرئة. كما يجب أن الهروب خلايا الجهاز الرئيسي، تدخل مجرى الدم، وزرع في موقع ثانوي، وهذا النموذج يلخص بشكل فعال السيناريو في البشر.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

سرطان البروستاتا هو ثاني أكثر الأسباب شيوعا للوفيات المرتبطة بالسرطان في الولايات المتحدة. يوفر نموذج سرطان تقويم العظام نهجا مفيدا لفهم بيولوجيا سرطان البروستاتا وتقييم فعالية الأنظمة العلاجية. يصف هذا البروتوكول الخطوات التفصيلية اللازمة لإنشاء نموذج فأر تقويم العظام لسرطان البروستاتا.

ما قبل السريرية مثلي فأري موديل سرطان البروستاتا البشرية

والهدف من هذا البروتوكول لإثبات حقن خلايا سرطان البروستاتا، مع عملية الاخصاء اللاحقة داخل البروستاتا. نماذج أورثوتوبيك قبل الإكلينيكية المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا بالغة الأهمية لدراسة المرض في سياق ذات صلة سريرياً وورم المكروية ومضيف الأشخاص.

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

هندسة الأنسجة بنيات الكلوي توفر حلاً للنقص في الجهاز والآثار الضارة للغسيل الكلوي. هنا، يمكننا وصف بروتوكول للصغير تشريح الكليتين مورين لعزل قطاعات كورتيكو النخاع. يتم زرع هذه الأجزاء في ثوابت خالية من السقالة الخلوية، تشكيل أورجانويدس الكلوي.

ميكروديسيكشن شرائح الأنسجة الكلوية الأولية، وإدماج مع تكنولوجيا بناء رواية خالية من السقالة

هذا البروتوكول وصف أسلوب المنشأة حديثا لإيصال الفيروس إلى البروستاتا مورين. استخدام التكنولوجيا كريسبر/Cas9، overexpression الجينات، أو تسليم recombinase لجنة المساواة العرقية، التقنية تسمح التعديلات أورثوتوبيك التعبير الجيني ويطبق نموذج رواية ماوس لسرطان البروستاتا.

فيروس تقديم أدلة كريسبر للبروستاتا موريني لتحوير الجينات

الفئران المهندسة وراثيا نماذج مفيدة للتحقيق وآليات سرطان البروستاتا. نقدم هنا بروتوكولا لتحديد وتشريح البروستاتا الفصوص من ماوس الجهاز البولي التناسلي والتفريق بينهم على أساس في علم الأنسجة، وعزل والثقافة خلايا البروستاتا الأولية في المختبر الماغنيسيوم لتحليلات المتلقين للمعلومات.

تحديد وتوصيف النسيجي، وتشريح للماوس الفصوص البروستاتا لفي المختبر كروي 3D نماذج الثقافة

نعرض طريقة لتشريح وتشريح نماذج سرطان البروستاتا الماوس، مع التركيز على تشريح ورم البروستاتا. كما يتم تقديم بروتوكول خطوة بخطوة لتوليد الأعضاء ورم البروستاتا الماوس.

جيل من الأعضاء الورم من نماذج الماوس المهندسة وراثيا من سرطان البروستاتا

تصف هذه المخطوطة طريقة متسقة لإجراء عمليات استئصال خصية القوارض واستئصال المبيض بسرعة للبقاء على قيد الحياة.

استئصال الخصية واستئصال المبيض لتقليل إنتاج هرمون الجنس

تعلم تشريح البروستاتا الجزئي والإخصاء الجراحي في الفئران لدراسة سرطان البروستاتا وتأثيرات الهرمونات. هذه الطريقة تتيح فحص الغدد البروستاتية بشكل فردي.

الفئران البروستاتا الجزئي تشريح والإخصاء الجراحي

استكشف المزيد من الفيديوهات