أغسطس 29, 2016
تصف هذه المخطوطة إعداد وتنفيذ وتحليل الجرأة والعدوانية والضحلة في أسماك الزرد واختبار وجود متلازمة سلوكية. سيسمح النهج الموحد للقياس الكمي السلوكي بمقارنة أسهل عبر الدراسات. يمكن إجراء تعديلات على هذا البروتوكول حيث يمكن تشغيل كل اختبار على حدة.
الهدف العام من هذا البروتوكول هو توحيد المنهجية المستخدمة لمراقبة وتحليل وتفسير الجرأة والعدوانية والمتلازمات السلوكية الضحلة في أسماك الزرد. بشكل مباشر ، يمكن لهذه الطريقة الإجابة على أسئلة في النظرية التطورية والبنية السكانية والديناميكيات السكانية. عند دمجها مع تقنيات متعددة التخصصات ، يمكن تطبيقها في مجالات مثل علم الأدوية وعلم السموم وعلم الوراثة السلوكية والغدد الصماء.
الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الجرأة والعدوانية والمزيج الضحل يشمل العديد من السلوكيات المدروسة جيدا والتي يمكن قياسها بسهولة في الزرد. ويمكن تعديل كل اختبار للإجابة على الأسئلة التجريبية البديلة. ابدأ بفصل سمكة الزرد بشكل عشوائي إلى النسبة المناسبة من الأسماك البؤرية إلى الأسماك المحفزة.
قم بتخزين جميع الأسماك في رفوف مبيت أسماك الزرد في ظل دورة إضاءة / ظلام صارمة من 12 إلى 12 ساعة. قم بإطعام طعام رقائق الأغذية لجميع الأسماك البؤرية والتحفيزية كل يوم. وإطعام الجمبري المالح مرة واحدة فقط في الأسبوع في الأيام غير البحثية.
بعد ذلك ، قم بإعداد ثلاثة خزانات فحص في المختبر. واحد للعدوان والجرأة والضحلة في المواقع التي تقلل من احتمالية حدوث محفزات خارجية ضارة. واترك مساحة كافية لكاميرا فيديو لالتقاط الخزان بأكمله.
قم بإعداد كاميرا الفيديو ، بحيث يكون لها وضوح كاف لعرض ملصقات الخزان ، وكذلك لتمييز السلوكيات الدقيقة للأسماك البؤرية. حافظ على الكاميرا في نفس الموضع مع رؤية كاملة للخزان أثناء جميع تسجيلات الفحص السلوكي ، لتقليل الاختلافات غير المقصودة في التسجيل السلوكي نتيجة للتسجيلات التفاضلية. بعد ذلك ، حدد مخطط وضع العلامات لتتبع التاريخ ورقم السمكة ورقم الفحص لجميع المقايسات السلوكية.
قم بتسمية الجزء الخارجي من الخزان بشريط لاصق في عرض الكاميرا. سجل هذه المعلومات في دفتر ملاحظات مختبر للرجوع إليها بسرعة ومراقبة الجودة في المستقبل. أخيرا ، قم بإعداد خزان تأقلم سيتم استخدامه بين جميع الفحوصات ، وكذلك مباشرة بعد إزالة الأفراد من رف السكن.
ابدأ بالحصول على خزان مستطيل سعة 19 لترا بقياس 30 × 15 × 10 سم. جهز الخزان بأقسام خارجية غير شفافة تحيط بثلاثة جوانب من خزان العدوان ، مع ترك الجزء الأمامي مكشوفا للعرض لتقليل المحفزات الخارجية غير المرغوب فيها. قسم الخزان بعلامات خارجية إلى أربعة أرباع مستطيلة متساوية.
استخدم سد السيليكون لتثبيت مرآة داخل الربع السفلي الأيسر ، مائلة بزاوية 22.5 درجة ، لتشكيل مثلث قائم الزاوية مقابل أقصى الجانب الأيسر من الخزان. احصل على مياه عذبة قديمة ، دافئة مسبقا إلى 27.5 إلى 28.5 درجة مئوية ، جاهزة للإضافة إلى خزان العدوان من أجل التأكد من أن درجة حرارة الماء في خزان التأقلم وخزان العدوان في حدود درجتين مئويتين من رف السكن. قم بكوب سمكة بؤرية من رف السكن وانقلها إلى خزان تأقلم منفصل حيث تتأقلم لمدة 10 دقائق.
تأكد من أن كاميرا الفيديو تركز على خزان فحص العدوان والسجل الصحفي. بعد ذلك ، انقل السمكة البؤرية على الفور عن طريق الحجامة من خزان التأقلم إلى خزان العدوان. سجل خزان العدوان لمدة 10 دقائق و 30 ثانية.
بعد ذلك ، قم بكوب السمكة البؤرية من خزان العدوان مرة أخرى إلى خزان التأقلم. عند مشاهدة التسجيل بعد اكتمال الفحص ، انتظر 30 ثانية بعد إدخال السمكة إلى الخزان كفترة تأقلم إضافية قبل تسجيل السلوكيات. أخيرا ، قم بتسجيل اختبار عدوان واحد مرتين على الأقل حتى يتم تسجيل الاختبار باتفاق عال بين التكرارات.
لإعداد مقايسة الجرأة ، احصل أولا على خزان صغير شبه منحرف سعة 1.5 لتر ، يبلغ طوله 15 سم وأعلى 26.5 سم وقاع 22.5 سم ، وعرض 6 سم. لف الورق غير الشفاف حول ثلاثة جوانب من الخزان ، واترك الجزء الأمامي مكشوفا للعرض. ضع قطعة رقيقة واحدة من الشريط اللاصق خارج الخزان لترسيم الجزء العلوي من الجزء السفلي من الخزان.
بعد ذلك ، تأكد من أن درجة حرارة الماء في خزان الجرأة في حدود درجتين مئويتين من رف السكن. انقل السمكة البؤرية من رف السكن إلى خزان التأقلم واتركها تتأقلم لمدة 10 دقائق. تأكد من تركيز كاميرا الفيديو على مقايسة الجرأة واضغط على التسجيل على الجهاز.
انقل السمكة البؤرية على الفور من خزان التأقلم إلى خزان الجرأة وسجلها لمدة ثماني دقائق و 30 ثانية. عند مشاهدة التسجيل بعد اكتمال الفحص ، اترك فترة تأقلم إضافية مدتها 30 ثانية بعد إدخال السمكة إلى الحوض قبل التسجيل. أخيرا ، قم بتسجيل اختبار جرأة واحد مرتين على الأقل ، حتى يتم تسجيل الاختبار باتفاق عال بين التكرارات.
لإعداد مقايسة المياه الضحلة ، احصل على خزان سعة 76 لترا يحتوي على ثلاث مقصورات مقسمة على مقسمين زجاجيين مختومين بسد سيليكون. خارجيا ، استخدم الشريط اللاصق لتمييز منطقتي تفضيل على بعد ستة نقاط وثلاثة خمسة سنتيمترات من كل من الفواصل الزجاجية التي تحدد كل منطقة تحفيز. ضع أقساما خارجية غير شفافة حول ثلاثة جوانب من الخزان الضحل واترك الجزء الأمامي مكشوفا للعرض.
بعد ذلك ، حدد المياه الضحلة للتحفيز للتأقلم لمدة 12 ساعة على الأقل قبل الاختبار واجعلها تبقى في الخزان الضحل طوال فترة التجربة. انقل السمكة البؤرية من رف السكن إلى خزان تأقلم منفصل عن طريق الحجامة حيث تتأقلم لمدة 10 دقائق. ثم انقل الأسماك البؤرية عن طريق الحجامة من خزان التأقلم إلى المقصورة المركزية لخزان المياه الضحلة.
اسمح بفترة تأقلم مدتها 10 دقائق قبل فترة مراقبة التسجيل الحي مدتها 10 دقائق ، حيث يتم تعريف الأسماك الضحلة على أنها داخل منطقة التفضيل في الغرفة التي تضم المياه الضحلة المستهدفة. بعد ذلك ، حدد الوقت المستغرق في كل منطقة تفضيل ، بالإضافة إلى الوقت المستغرق في الحجم المركزي. أخيرا ، بعد اكتمال المقايسات ، انقل الأسماك إلى خزان طرفي منفصل سيكون بمثابة خزان الوجهة النهائي لجميع الأفراد البؤريين المستخدمين.
نظر هذا البروتوكول في الارتباطات المتسقة في العدوان والجرأة والسلوكيات الضحلة لأسماك الزرد لتحديد ما إذا كانت هناك متلازمة سلوكية. هنا ، يمثل المكون الأول سلوكيات العدوانية ، بينما يرتبط المكون الثاني بسلوكيات الجرأة. نظرا لأن سلوكيات العدوان والجرأة لا يتم تمثيلها بنفس المكون ، يمكن استنتاج أن هناك غياب لمتلازمة سلوك عدوانية الجرأة في الزرد.
بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء البروتوكول الكامل لسمكة بؤرية واحدة في 70 دقيقة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تتعرف على نفسك وفريقك بكل سلوك مستهدف لتقليل تحيز المراقب. سيؤدي تسجيل نفس تسجيل الفيديو عدة مرات أيضا إلى زيادة الثقة في نتائجك.
بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى في المجالات الدوائية أو الجينية أو الفسيولوجية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية حول العوامل الداخلية والخارجية التي تؤثر على المتلازمات السلوكية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية مراقبة وتحليل وتفسير الجرأة والعدوانية والمتلازمات السلوكية الضحلة في الزرد. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك!
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تحدد هذه المخطوطة منهجية معيارية لملاحظة وتحليل سلوكيات الجرأة والعدوانية والتجمع في أسماك الزيبرفيش. يسهل هذا النهج إجراء المقارنات بين الدراسات المختلفة ويسمح بإدخال تعديلات على المقايسات الفردية.
تتيح المقاييس السلوكية الموحدة في أسماك الزيبرفيش (zebrafish) تقديرًا كمياً دقيقاً للجرأة والعدوانية والتجمع في أسراب، مما يدعم الاكتشافات القائمة على الفرضيات في البحوث السلوكية العصبية والصيدلانية. وتوفر هذه البروتوكولات نقاط نهاية كمية وقابلة للتكرار، وهي ضرورية للتحقق من الأهداف في المراحل المبكرة وتقليل المخاطر الميكانيكية. كما تسهل مرونتها وقابليتها للتكرار إجراء المقارنات بين الدراسات واتخاذ القرارات على مستوى المحفظة البحثية في مجال البحث والتطوير قبل السريري.
توضع مقاييس سلوك سمكة الزيبرا هذه ضمن التسلسل الممتد من الاكتشاف المبكر إلى المرحلة قبل السريرية، مما يتيح اختبار الفرضيات، والتحقق من الأهداف، والحد من المخاطر الميكانيكية قبل تحديد المركبات الرائدة.