تشريح وشقة-تصاعد للThreespine أبو شوكة الخيشومي الهيكل العظمي

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح الهيكل العظمي الفرعي Stickleback وتركيبه بشكل مسطح. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات التنمية وعلم الوراثة والتطور. مثل كيفية تكيف مع البيئات الجديدة وكيف ينشأ التباين في مورفولوجيا البالغين أثناء التطور.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه من خلال تشريح الهيكل العظمي الفرعي وتركيبه بشكل مسطح ، يمكن تصور مجموعة متنوعة من السمات الغذائية التي لا يمكن دراستها في التركيب الكامل. في التحضير ، راجع مورفولوجيا الهيكل العظمي للرأس ذات الصلة للعمود الفقري الثلاثة. بعد تحضير السمكة للتشريح ، ابدأ بإدخال ملقط حاد رقم خمسة في جانب العين ، بزاوية 45 درجة لثقب الغشاء الذي يغطي العين.

ثم قشر غشاء العين ، مثل غطاء وعاء الزبادي. بعد ذلك ، أدخل ملقطا مفتوحا خلف العين ، وامسك بالعصب البصري ، وقم بإزالة العين. احرص على تجنب ثقب العين ، وإلا فسوف يتسرب الميلانين.

كرر هذه العملية مع وضع العين على الجانب الآخر. بعد ذلك ، ضع شفرة مقص صغير أسفل الجانب الخلفي من رفرف البراكل ، واقطع الأنسجة الرخوة ظهريا فوق الفتحة ، باتجاه محجر العين. بعد ذلك ، قم بقطع العظم الأمامي ، وهو الجزء الظهري من محجر العين.

ثم قم بقطع عظم الوتدي في منتصف الخط ، حول مركز محجر العين. كرر قطع الأوبركل على الجانب الآخر. بالنسبة للخطوات التالية ، يمكن استخدام أشواك الحوض كمقابض.

يتم طيها عن طريق سحبها برفق بعيدا عن الجسم. الآن ، أدخل الملقط أسفل المجردة ، وقشر الوجه ببطء بعيدا عن الجسم. تقليم أي أنسجة رخوة لا تزال ملتصقة في هذه العملية.

كن حذرا حول الجرعات الخيشومية ، واحرص على عدم تعطيلها. من السهل الإمساك بطريق الخطأ بأول عظم سريفي ، جنبا إلى جنب مع البيركول عند إزالة الهيكل العظمي للوجه. انظر تحت percoll الخاص بهم وأنت تقشره للأمام للتأكد من أنه ليس لديك أي شيء إضافي.

الآن ، باستخدام الملقط ، افصل السيراتوهيال عن جانبي خط الوسط القاعدي ، مع تقشير وإزالة الهيكل العظمي للوجه القحفي الأمامي. كرر على الجانب الآخر. يشمل الهيكل العظمي للوجه القحفي الأمامي الفك بأكمله ، والهيكل العظمي اللامي بالكامل ، والعناصر الظهرية والداخلية الأساسية والجزء الأمامي من الجمجمة.

بعد ذلك ، أدخل ملقطا مغلقا أسفل أنبوب الأمعاء مباشرة ، واسحبه إلى الأمام. إغاظة العضلات والأربطة المتبقية المرتبطة بالهيكل العظمي الفرعي في هذه العملية. بعد ذلك ، استخدم طرف الملقط المغلق لكشط العضلات التي تربط الهيكل العظمي الفرعي الظهري بعلبة الدماغ البطني.

كشط بحركة خلفية إلى أمامية. كرر عملية إزالة العضلات على الجانب الآخر من stickleback. بعد ذلك ، قم بإزالة الهيكل العظمي الفرعي ، عن طريق الإمساك بقاعدة أنبوب الأمعاء وسحبه من الأمام.

افصل أنبوب الأمعاء باستخدام قطع عمودي ، خلف القناة الدموية الخامسة. من الأخطاء الشائعة إمساك أنبوب الأمعاء الأمامي جدا مما يترك الأنبوب الأمامي البطني خلفه. تأكد من الإمساك بعمق في الجزء الخلفي في التجويف الصدري ويمكنك دائما إزالة أنبوب الأمعاء الزائد لاحقا.

بعد إزالة أي شظايا عظمية متبقية من علبة الدماغ على الجانب الظهري من الهيكل العظمي الفرعي. أدخل المقص في السلة الفرعية ، وقم بعمل قطع ظهري بين المجموعات ثنائية الجوانب لألواح الأسنان الظهرية. حافظ على هذا القطع في المنتصف لتجنب التسبب في تلف ألواح الأسنان الظهرية.

بعد ذلك ، قم بعمل قطعتين جانبيتين ضحلتين في تجويف الأمعاء المطاطي في الطرف الخلفي من الهيكل العظمي الفرعي. في الطرف المضاد لأنبوب الأمعاء. للمساعدة في فتح الهيكل العظمي الفرعي.

الآن ، انقل الهيكل العظمي إلى أنبوب ميكروسنتري ريفورج محمل بنسبة 50 في المائة من الجلسرين ، ونقطة صفر اثنين من هيدروكسيد البوتاسيوم بنسبة خمسة بالمائة للتطهير اللطيف. أو بدلا من ذلك ، قم بنقله إلى الجلسرين النقي إذا لم تكن هناك حاجة إلى مزيد من المقاصة. إذا كانت هناك حاجة إلى إعادة التلوين ، يتم تقديم التفاصيل في بروتوكول النص.

للتحضير للتركيب ، قم بتغيير المحلول إلى الجلسرين النقي ، وقم بهز الأنبوب لمدة خمس دقائق على الأقل. بعد ذلك ، قم بإزالة الهيكل العظمي الفرعي وضعه بالقرب من قاع زلة غطاء زجاجي مقاس 22 × 60 ملم مع الجانب الظهري لأعلى. الآن ، انقل بضع قطرات من الجلسرين إلى الهيكل العظمي.

بعد ذلك ، قم بتدوير كرتين صغيرتين من طين النمذجة ، ولعب واحدة على طرفي زلة الغطاء ، فهي تعمل كفواصل. بعد ذلك ، ضع زلة غطاء ثانية بشكل فضفاض فوق المستحضر ، مع ضغط كاف لتسطيح الهيكل العظمي الفرعي الأمامي. الآن ، افتح السديلة الظهرية اليسرى ، بما في ذلك ألواح الأسنان الظهرية ، وحرك السديلة بين زلات الغطاء.

ثم افعل الشيء نفسه مع السديلة الظهرية اليمنى. وادفع الهيكل العظمي الفرعي بالكامل بعيدا عن حافة زلة الغطاء. لإكمال الإجراء ، اضغط برفق على زلة الغطاء العلوي لتسطيح كرات الطين.

يكفي فقط حتى يحافظوا على الهيكل العظمي الفرعي مثبتا بشكل مسطح. لكن ليس لدرجة أنه يتم سحقه. إذا تم حجب صف من المرافق أثناء العملية ، فقم بتحريك الملقط بين الغطاء وأعد توجيه ceratobranchial أو المستحضر بأكمله.

عند تركيبه بشكل مسطح في الجلسرين النقي ، يمكن تخزين المستحضر بشكل مسطح في درجة حرارة الغرفة لمدة عقد على الأقل. ينتج عن هذا البروتوكول هيكل عظمي فرعي مقطوع ومسطح. حيث يمكن تأريخ مجموعة متنوعة من السمات الغذائية المهمة.

من وجهة النظر الظهرية ، يمكن بسهولة تصور وتأريخ جميع صفوف الخيشومية ، وجميع صفائح الأسنان البلعومية ، وجميع العظام المتفرعة تقريبا. أليزارين ريد S ، أيضا على مرشح رودامين أو مرشح أحمر مشابه ، مما يسمح بوضع العلامات المزدوجة مع علامات أخرى وطرق بديلة للتصور. في هذه الصورة ، يتم تمييز المجمعات الخيشومية بالقيراط.

تمييز الأسنان برؤوس الأسهم ، ويتم تمييز العظام بعلامات النجمة. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء التشريح في بضع دقائق وإجراؤه على مئات بسرعة نسبيا. وبينما أظهرنا تشريح الهيكل العظمي الفرعي stickleback ، نأمل أن يتم استخدام هذا الإجراء كدليل لمجموعة متنوعة من أنواع الأسماك.

من خلال تشريح الهيكل العظمي الفرعي ، يمكننا تصور مجموعة متنوعة من السمات الغذائية المهمة بسرعة وسهولة ، غير المرئية في الحوامل الكاملة. السماح بفهم أفضل لتطور وتطور الهيكل العظمي للوجه القحفي.