نموذج الفأر من الشبكية الإسكيمية-ضخه إصابة خلال ارتفاع ضغط العين

الهدف العام من هذه التقنية هو تقديم نموذج تجريبي لإصابة نقص تروية الشبكية وإعادة تروية الشبكية ، وعواقبها المرضية. تستخدم هذه الطريقة بشكل شائع للتحقيق في الآليات الكامنة وراء تروية الشبكية ، وكذلك لتقييم الأساليب العلاجية المحتملة لعلاج الأمراض المرتبطة بها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تخلق إصابة تستهدف بشكل كبير هياكل العين ، بينما تسبب الحد الأدنى من الضرر للأنسجة المحيطة.

تمتد فائدة هذه التقنية نحو فهم وثلاثة أشهر من المظاهر المتعددة لإصابة نقص التروية في الشبكية ، بما في ذلك: الالتهاب ، والإجهاد التأكسدي ، وضعف التحديق في وحدة الأوعية الدموية العصبية في الشبكية. يعد العرض التوضيحي بالفيديو لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن التقنيات الجراحية لوضع القنية قد يكون من الصعب إعادة إنتاجها بدون دليل مرئي. قبل البدء في الإجراء ، قم بتسخين قفص فارغ على الطاولة.

ثم أدخل الطرف الحاد للمجموعة الأساسية المثقوبة مسبقا في زجاجة من 0.1٪ هيبارين الصوديوم ، قاع الهيبارين الصوديوم من امتداد القطب الوريدي. افتح غطاء فلتر الهواء الموجود على الأنبوب. ثم ارفع زجاجة الصوديوم الهيبارين إلى 163 سم من سطح الطاولة إلى ذروة قطرة الهيبارين الصوديوم، لإنتاج ضغط تدفق الصوديوم الهيبارين البالغ 120 ملليلتر من الزئبق.

افتح المجموعة الأساسية من أنبوب موقع Y المثقوب مسبقا ، للسماح لصوديوم الهيبارين بملء الأنبوب ، وقم بتوصيل المجموعة الأساسية المثقوبة مسبقا من أنبوب موقع Y بمشعب الصمامات الخمسة. بعد ذلك ، باستخدام تركيبات أنبوب Luer male إلى Luer ، قم بتوصيل إبر نصف بوصة قياس 30 بالمشعب المكون من خمسة منافذ. أدخل كل إبرة في الجزء الخاص بها بحجم عشرة بوصات من أنابيب قياس 30.

بعد ذلك ، باستخدام مرقئ الدم ، اكسر أطراف إبرة جديدة مقاس 30 نصف بوصة وأدخل نهاياتها الحادة في النهايات المفتوحة للأنابيب قياس 30. بعد ذلك ، استخدم الشريط لترتيب أنابيب الإبرة بحيث يتم وضع الأنابيب المتصلة بالمنافذ الداخلية أعلى الأنابيب المتصلة بالمنافذ الخارجية لمنع تشابك الأنبوب أثناء قنية الغرفة الأمامية. الآن ، قم بتشغيل تدفق الصوديوم 0.1٪ من الهيبارين إلى مشعب الصمامات الخمسة وإلى كل منفذ فردي لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق لإزالة أي فقاعات هواء.

ثم قم بإيقاف تشغيل جميع المنافذ الموجودة على مشعب الصمامات الخمسة. لإجراء القنية ، بعد إعطاء التخدير ، ضع جميع الفئران في القفص الدافئ على طاولة الجراحة ، مما يؤكد تحقيق التخدير العميق من خلال عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم بعد خمس إلى عشر دقائق. ثم قم بإعطاء قطرة واحدة من تروبيكاميد لتوسيع حدقة العين ، وقطرة واحدة من البروباراكايين للتخدير الموضعي في كل عيون من عيون ، وترتيب الفئران بترتيب التخدير ، بحيث يكون أول فأر مخدر هو أول فأر يتم تقميمه.

أثناء انتظار دخول قطرات العين حيز التنفيذ ، قم بإعداد قطع مستقيمة من الشريط اللاصق بحجم أربع بوصات ، واسحب الشريط بإحكام قبل التمزيق ، ووضع قطعة واحدة من الشريط اللاصق جانبا لكل. لاحظ أن عدم سحب الشريط بإحكام ، سيؤدي إلى تجعيد الشريط. عندما يكون الفأر الأول جاهزا ، ضع تحت المجهر الجراحي.

بعد ذلك ، قم بتشغيل أول منفذ صوديوم 0.1٪ من الهيبارين على مشعب الصمامات الخمسة ، واستخدم زوجا من الملقط لتحفيز عين واحدة برفق. بعد ذلك ، أدخل إبرة القنية قياس 30 في الغرفة الأمامية في منتصف الطريق تقريبا بين الألياف النطاقية وقمة القرنية. مع الحرص على تجنب اختراق الكونريا مرة ثانية.

لاحظ أنه يتم استخدام حركة التواء لطيفة لإدخال القنية بعمق في الغرفة الأمامية. الآن ، اضغط على أنبوب قياس 30 على سطح الطاولة لتقليل أي حركة للقنية المدخلة أثناء الوصول إلى قطعة من الشريط ، واستخدم الشريط لتثبيت الأنبوب على الطاولة. بمجرد تأمين الأنبوب ، سجل وقت بدء الجراحة.

استخدم المجهر للتحقق من عدم وجود تسرب ، وأن عين التروية وإعادة التروية أكبر من العين المقابلة ، لإثبات وجود انتفاخ العين. تطبيق Hypromellose على كلتا العينين كل 30 دقيقة ، حتى نهاية التجربة لتليين القرنية ، وإغلاق أي تسريبات دقيقة. في حالة تحريك أثناء العملية ، ارفع الذيل وقم بإعطاء معزز الكيتامين داخل الصفاق.

بعد 90 دقيقة من تقبيل الأول ، اسحب القنية برفق من الغرفة الأمامية ، وقم بتليين كلتا العينين باستخدام هلام التشحيم. عند إزالة القنيات اللاحقة ، ضع كل فأر مرة أخرى في القفص على طاولة الجراحة ، حتى تتعافى تماما. بعد إزالة جميع القنيات ، قم بتطهيرها بمناديل كحولية.

ثم استخدم حقنة سعة 60 مليلتر مملوءة بالهواء لطرد الصوديوم الهيبارين من مشعب الصمامات الخمسة ، وإبر قياس 30 ، وأنابيب قياس 30 ، والقنيات. بعد ذلك ، اشطف جميع الأدوات بحقنة 60 مليلتر مملوءة بالماء المقطر. أخيرا ، قم بطرد الماء المقطر من جميع المواد ب 60 مل من الهواء ، وقم بتخزين المعدات المطهرة والمغسولة لاستخدامها لاحقا.

يكشف وضع العلامات المناعية NeuN للنوى العصبية عن فقدان كبير للخلايا النيورونالية ، بعد إهانة التروية وإعادة التروية ، عن طريق التصوير المجهري متحد البؤر ، بعد سبعة أيام من إصابة التروية وإعادة الضهار. في الواقع ، يوضح القياس الكمي اليدوي للخلايا الإيجابية NeuN في السيطرة ، والعيون المعاد تقويها التروية ، انخفاضا في عدد الخلايا العصبية لطبقة الخلايا العقدية بعد الإصابة ، مما يشير إلى وجود موت الخلايا الناجم عن نقص التروية وإعادة الضهار. تشير اتساع الموجة A والموجة B المنخفضة الموثقة بواسطة تخطيط كهربية الشبكية أيضا إلى حدوث ضعف ناتج عن نقص التروية وإعادة التروية في وظيفة الخلايا العصبية في الشبكية مقارنة بالعيون الضابطة غير المصابة.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية على عشرة في حوالي خمس ساعات ، بما في ذلك الساعتين الأخيرتين اللتين تقضيهما في انتظار تعافي الفئران من التخدير. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم صيانة التخدير العميق. كما التخدير الفعال سيمنع إزاحة القنية عن طريق حركة.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل تخطيط كهربية الشبكية للإجابة على أسئلة إضافية حول وظيفة الشبكية. مكنت هذه التقنية الباحثين في طب العيون وعلم الأعصاب وبيولوجيا الأوعية الدموية من استكشاف التسبب في الأوعية الدموية العصبية في الشبكية والتدخل العلاجي في القوارض. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء إصابة مستهدفة في الشبكية ، على الرغم من قنية الغرفة الأمامية للعين.

لا تنس أن العمل بالأدوات الجراحية يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، وأن الاحتياطات ، مثل استخدام التخلص الفعال من الأدوات الحادة ، يجب دائما اتخاذ الإجراءات أثناء تنفيذ هذا الإجراء.