هندسة الأنسجة عن طريق الجوهرية الأوعية الدموية في في فيفو غرفة هندسة الأنسجة

الهدف العام من هذا الإجراء هو خلق مساحة يمكن أن تنمو فيها الأنسجة وتتوسع بالتزامن مع تطوير إمدادات دم قوية ، مما يؤدي في النهاية إلى توليد كتلة من الأنسجة الوعائية الكبيرة وثلاثية الأبعاد. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في هندسة الأنسجة الوعائية لأغراض ترميمية وكذلك لاستبدال الأعضاء وإصلاحها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الأنسجة التي تم إنشاؤها حديثا يتم توفيرها جوهريا من خلال شبكة الأوعية الدموية الخاصة بها دون الحاجة إلى الاعتماد على الانتشار من البيئة للبقاء على قيد الحياة.

ستظهر الإجراء سو مكاي وليليانا بيبي. تخدير فأر لا يقل وزنه عن 250 جراما ، وقم بتقييم عمق التخدير باستخدام قرصة إصبع القدم. إذا كان الجرذ لا يستجيب ، فحافظ على تخديره باستخدام 2٪ isoflurane طوال العملية.

بعد ذلك ، ضع مرهما إبسوميا على العينين. ثم ، مع الفئران ، استخدم شفرات الحلاقة الكهربائية لحلاقة الفخذ وإزالة الشعر بشاش مبلل. بعد ذلك ، قم بتنظيف المواقع الجراحية بمحلول الكلورهيكسيدين الذي يحتوي على 70٪ إيثانول.

أخيرا ، ثنى بمناشف معقمة واستمر في الجراحة. باستخدام شفرة رقم 15 ، قم بعمل شق جلدي بطول أربعة سنتيمترات في الفخذ الأيسر بالتوازي مع الرباط الإربي. بعد ذلك ، قم بقطع وسادة الدهون الأربية المكشوفة محيطا بالمقص ، واتركها متصلة بالعنيق الوعائي ، بناء على الأوعية الشرسوفية.

الآن ، باستخدام المقص الدقيق ، حرر التصاقات النسيج الضام الغشائي بين جدار البطن والأوعية الفخذية الأساسية. بعد ذلك ، ضع ضاعما على جدار البطن واسحبه وسطيا لكشف الرباط الإربي وطول الأوعية الفخذية بالكامل. بعد ذلك ، باستخدام ملقط دقيق ومقص منحني ، قم بتشريح الوريد الشرسوفي وعزله عن الدهون المحيطة.

سيعمل هذا الوريد كحبل. استمر في فتح غمد الأوعية الدموية الذي يحتوي على الأوعية الفخذية والعصب. افتحه على طول الطريق من الرباط الإربي إلى التشعب البعيد إلى الفرع الشرسوفي.

في هذه المرحلة ، وطوال الإجراء بأكمله ، يعد التعامل اللطيف مع الأوعية الفخذية أمرا بالغ الأهمية. يمكن أن يؤدي تلفها إلى تجلط الدم وفشل التجربة بأكملها. بعد ذلك ، باستخدام ملقط دقيق ، التقط الوريد الفخذي عن طريق adventitia وافصله برفق عن الأنسجة المحيطة والشريان المصاحب.

خلال هذه الخطوة ، لا تفهم سمك جدار الوريد بالكامل ، مما قد يتسبب في صدمة في البطى ، مما يجعل الوريد عرضة للتخثر. خلال هذه الخطوة أيضا ، قم بربط الفروع الجانبية بخيط نايلون 10-0 ، أو تخثرها باستخدام تخثر ثنائي القطب. مع حر الوريد الفخذي تماما ، اربطه بشكل قريب وبعيد باستخدام 4-0 خيوط حريرية للحصول على طعم وريدي لا يقل طوله عن 10 ملليمترات ، والذي يتضمن حوالي نصف سنتيمتر من الفرع الشرسوفي.

يعمل الفرع كحبل حبل لإبقاء الحلقة مفتوحة في الغرفة. بعد ذلك ، قم بقص adventitia من نهايات الكسب غير المشروع. إذا لزم الأمر ، يمكن تأجيل هذه الخطوة إلى ما قبل مفاغرة الجراحة الدقيقة.

قم بإنهاء تحضير طعم الوريد عن طريق شطفه بمحلول ملحي هيباريني وتركه يرتاح محملا بمحلول ملحي هيبارين. بعد ذلك ، أغلق الجرح باستخدام خياطة حريرية مستمرة 4-0 وغرز أو ثلاث غرز متقطعة بسيطة إضافية. للبدء ، قم بكشف الرباط الإربي وطول الوعاء الفخذي بالكامل للطرف المقابل كما هو موضح سابقا.

بعد ذلك ، باستخدام ملقط دقيق ، قم بتشريح وعزل كل من الشريان الشرسوفي والوريد من وسادة الدهون المحيطة. كن لطيفا عند سحب الأنسجة بعيدا عن الأوعية. استمر في التقاط الشريان الفخذي عن طريق المغامرة وتحريره من الأنسجة المحيطة.

في هذه العملية ، قم بربط أو تخثر الفروع الجانبية للشريان. ثم ضع المشبك بالقرب من الشريان الفخذي والوريد. الآن ، باستخدام خياطة حريرية 4-0 ، قم بربط الشريان الفخذي والوريد البعيد لظهور الأوعية الشرسوفية.

الآن ضع خلفية متباينة بلاستيكية معقمة أسفل الأوعية واستخدم مقصا صغيرا حادا ومستقيما لقطع كل وعاء بشكل عرضي. بمجرد القطع ، اغسل الأوعية بقوة بكميات كبيرة من المحلول الملحي الهيباريني حتى تتم إزالة كل الدم من التجويف. الآن أحضر طعم الوريد إلى مجال الجراحة.

ضع طعم الوريد بحيث يكون الطرف القريب من طعم الوريد جاهزا للمفاغرة إلى الوريد الفخذي المتلقي ، والنهاية البعيدة للشريان الفخذي المتلقي. سيسمح ذلك للدم بالتدفق من الشريان إلى الجانب الوريدي دون مقاومة من الصمامات داخل الطعم الوريدي. تأكد من أن الأوعية الفخذية والطعم الوريدي يستقر في موضعهما الطبيعي دون أي تقلبات.

باستخدام خياطة نايلون 10-0 ، قم بإجراء مفاغرة جراحية على كلا الجانبين. مفاغرة الجراحة الدقيقة الجيدة وغير الرضحية هي المفتاح. الأضرار التي لحقت بالجزء الداخلي للوعاء الدموي ، أو تجفيف الأوعية ، أو الغرز الموضوعة بشكل غير صحيح تجعل الموقع المفاغرة عرضة لتكوين الجلطة.

بعد ذلك ، تحقق من وجود تسريبات في كلا الموقعين المفاغرة. قم بحل التسريبات الصغيرة ، التي تبدو وكأنها دم غير نابض يخرج من موقع مفاغرة ، عن طريق وضع قطعة صغيرة من الدهون أو إسفنجة في الأعلى وضغطها برفق لمدة خمس إلى 10 دقائق. ستحتاج التسريبات النابضة الأكبر التي تغمر الحقل بأكمله بسرعة إلى غرز إضافية.

بعد ذلك ، تحقق من سالكية الحلقة الشريانية الوريدية. يجب أن يؤدي الانسداد اللطيف للشريان الفخذي إلى تقلصه. على العكس من ذلك ، يجب أن يؤدي انسداد الوريد الفخذي إلى احتقان الحلقة.

الآن ضع قاعدة غرفة هندسة الأنسجة تحت الحلقة الشريانية الوريدية. تأكد من أن الحلقة تستقر في وضعها الطبيعي دون أي تقلبات أو مكامن الخلل. ثم ، باستخدام 6-0 خيوط نايلون ، قم بتأمين قاعدة الغرفة في الرباط الإربي واللفافة العضلية الأساسية.

بعد ذلك ، ضع الغطاء فوق قاعدة الغرفة. اضغط على الفروع الشرسوفية تحت الغطاء لتثبيت الحلقة في موضعها. بعد ذلك ، أغلق الجرح باستخدام خياطة حريرية مستمرة 4-0 ، بالإضافة إلى غرزتين أو ثلاث غرز متقطعة بسيطة إضافية.

أخيرا ، اسمح للحيوان بالتعافي من التخدير في قفص فردي ، وإعطاء جرعة واحدة من الكاربروفين تحت الجلد كمسكن. جهز للجراحة كما كان من قبل. يمكن زرع غرفتين في فأر واحد ، واحدة في كل فخذ.

ثم اعزل وعاء الفخذ كما هو موضح سابقا. مع تحرير كل من الشريان والوريد تماما من الأنسجة المحيطة وفروعها المربوطة ، قم بإحضار الغرفة إلى مجال الجراحة. بعد ذلك ، ضع كل من الأوعية الفخذية السليمة في الشقوق المقابلة لقاعدة الغرفة.

تأكد من عدم وجود أي منهما ملتوي أو ملتوي. بعد ذلك ، أغلق الغرفة عن طريق ربط الغطاء بالقاعدة. ثم أغلق الجرح واترك يتعافى كما هو موضح سابقا.

تم إجراء الجراحة الدقيقة لغرف هندسة الأنسجة كما هو موضح. تم تصميم أنواع مختلفة من الأنسجة بنجاح باستخدام غرفة الأوعية الدموية في الجسم الحي ، والتي تشمل أنسجة القلب مع خلايا عضلة القلب في الفئران حديثي الولادة ، والأنسجة العضلية مع الخلايا العضلية الهيكلية للفئران ، والأنسجة الدهنية مع الهيدروجيل المشتق من مصفوفة الأنسجة الدهنية خارج الخلية. يسمح نظام التجقيم بالقياس الكمي غير المتحيز لحجم الأنسجة المحدد.

على سبيل المثال ، تم استخدام الخلايا البطانية الملطخة بالليكتين في المقاطع المستعرضة لتقدير أحجام الأوعية الدموية. بعد زرع الخلايا المصنفة بأصباغ الفلورسنت في الجسم الحي ، يمكن تتبع مصيرها. على سبيل المثال ، تم الكشف عن خلايا عضلة القلب في الفئران حديثي الولادة المسمى بصبغة i في تركيبات الأنسجة بعد ثلاثة أيام من الزرع.

بدلا من ذلك ، يمكن استخدام الأجسام المضادة الخاصة بالأنواع لتحديد الخلايا المزروعة في دراسات التحويل الغريب. على سبيل المثال ، يمكن تحديد الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان المزروعة في الفئران التي تعاني من ضعف المناعة في الأنسجة التي يتم حصادها من الغرفة. بمجرد إتقان ، يمكن زرع حجرة التدفق والحلقة الشريانية الوريدية في حوالي 20 و 90 دقيقة على التوالي.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم الحفاظ على العقم في جميع الأوقات واتخاذ التدابير اللازمة في حالة حدوث التلوث. لا تنس أن التعامل اللطيف مع الأوعية الدموية ومفاغرة الجراحة الدقيقة اللارضية هي المفتاح لضمان النجاح. بهذا المعنى ، نوصي بالتدريب الجراحي الدقيق الأساسي قبل محاولة هذا الإجراء ، خاصة لبناء الحلقة الشريانية الوريدية.