بروتوكول لالتقييم الوظيفي من كامل البروتين التشبع الطفرات المكتبات الاستفادة من الإنتاجية العالية التسلسل

الهدف العام لهذا البروتوكول هو وصف التقييم الوظيفي لمكتبات الطفرات الشاملة للتشبع في موقع واحد للبروتينات ، باستخدام تسلسل عالي الإنتاجية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات الكيمياء الحيوية والتطور الجزيئي. مثل ، ما هي القيود الهيكلية والتطورية الكيميائية الحيوية على البروتينات؟

وكيف يمكننا هندسة البروتينات ذات الوظائف الجديدة؟ الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تزيد من عدد من قراءات التسلسل المفيدة في دراسة طفرات تشبع البروتين الكامل ، عن طريق تعدد بناء المكتبة وتسلسلها. بعد تحضير صفيحة من PCR Master Mix وفقا لبروتوكول النص ، استخدم ماصة متعددة القنوات لنقل 10 ميكرولتر من الألواح المكونة من 96 بئرا التي تحتوي على بادئات الطفرات الحسية المخففة مسبقا إلى الآبار المتشابهة في ألواح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).