طرق الحادة وتحت الحادة الفئران Hindlimb نقص التروية

الهدف العام من هذا البروتوكول هو نمذجة مرض الشريان المحيطي البشري عن طريق وضع غرز جراحية أو مُضيقات أميرويد (ameroid constrictors) على الشريان الفخذي للفأر لاستحثاث نقص تروية حاد أو دون حاد في الطرف الخلفي، على التوالي. يُعد مرض الشريان المحيطي مشكلة سريرية هامة، وقد تم تطوير هذه التقنيات باستخدام النماذج الحيوانية لتمثيل المرض البشري بشكل أفضل. وتكمن الميزة الأساسية لهذه التقنيات في قدرة الباحث على التحكم في شدة وتوقيت بدء نقص تروية الطرف.

سيقوم مايك بادجيت، وهو فني من مختبري، بشرح الإجراء. قبل البدء بالإجراء بيوم أو يومين، تأكد من أن الفأر في حالة تخدير كامل من خلال عدم استجابته لقرصة الإصبع، ثم ضع مرهم العين. بعد ذلك، استخدم آلة تشذيب كهربائية صغيرة لحلاقة الشعر من كلا الطرفين الخلفيين.

عند الانتهاء من تقصير كل الشعر، ضَع كريم إزالة الشعر الذي تم تدفئته مسبقاً. وبعد مرور دقيقة واحدة، امسح الكريم برفق باستخدام قطعة شاش مبللة. ثم ضع الفأر في قفص استشفاء مبطن بمناديل ورقية فارغة حتى يتمكن من الحفاظ على وضعية الاستلقاء البطني.

في يوم الجراحة، ضع الفأر المخدّر بالكامل تحت مجهر تشريح ستيريو من نوع technic في وضعية الاستلقاء، وثبّت الساقين باستخدام شريط لاصق جراحي. في حال استخدام وسادة تدفئة يتم التحكم في درجة حرارتها، قم بتوصيل مسبار درجة الحرارة، وثبّته بقاعدة منصة الجراحة باستخدام شريط لاصق جراحي. بعد ذلك، استخدم ثلاث مسحات متبادلة من بوفيدون أيودين والكحول لتنظيف موقع الجراحة، وغطِّ الحيوان بملاءة جراحية معقمة تحتوي على فتحة عند موقع الشق الجراحي.

باستخدام المشرط، قم بإجراء شق أولي على طول منتصف الفخذ الإنسي من الركبة باتجاه البطن. ثم استخدم مقصاً دقيقاً لزيادة طول الشق إلى حوالي 1 cm. وباستخدام الملقط، افتح الشق للكشف عن الغشاء الذي يغطي النسيج الدهني الإربي.

بعد ذلك، استخدم ملقطاً مغلقاً لاختراق الغشاء وصولاً إلى المساحة الموجودة بين النسيج الدهني والبطن. قم بتخفيف الضغط عن الملقط برفق لفصل النسيج الدهني عن عضلات البطن، مما يكشف عن الحزمة الوعائية العصبية. ومن الضروري تحديد الأوعية الدموية الرئيسية وفروعها بشكل صحيح قبل تشريح الحزمة الوعائية العصبية.

يمكن أن تؤدي الاختلافات في موقع المضيقات أو مواقع الربط إلى تغيير شدة نقص التروية بشكل كبير، مما يؤدي إلى تباين ملحوظ في النتائج. أدخل مباعداً في الشق الجراحي، واسحب أنسجة البطن باتجاه رأس الحيوان للكشف عن موقع المضيّق الأميرويدي الداني، والذي يقع مباشرة قبل الشريان الفخذي الجانبي الملتف. ثم أدخل مباعداً إنسياً وآخر وحشياً في الجزء القاصي من الشق لتوسيع المجال الجراحي، مع سحب أنسجة الدهون الإربية باتجاه القدم وبعيداً عن الموقع الجراحي.

يجب أن تكون الفروع الذيلية القريبة والسطحية للشريان الفخذي مرئية بوضوح. يقع الشريان الفخذي الجانبي الدوار على بعد حوالي خمسة مليمترات قريبًا من الفروع الذيلية، وقد يكون محجوبًا بغشاء. الآن، قم بتمرير طرف أحد الملاقط برفق تحت الغشاء الذي يربط الأوعية معًا لإدخال نصف الطرف بين الوريد والشريان.

بعد ذلك، أغلق الملقط ومزق الغشاء برفق. وعند إزالة الغشاء بالكامل، أدخل طرف الملقط المغلق بين الوريد والشريان، ثم خفف الضغط عن الملقط لإحداث فجوة بين الوعائين. وفي حالة نقص تروية الطرف تحت الحاد، مرر طرف الملقط أسفل الشريان الفخذي لعزل الوعاء عن الحزمة العصبية الوعائية.

استخدم مجموعة ثانية من الملاقط المائلة للإمساك بحافة المضيّق، ووجّه المضيّق أسفل الشريان الفخذي. بعد ذلك، ضع الشريان داخل فتحة المضيّق. تالياً، حدد موضع المضيّق القاصي على الشريان الفخذي في المنطقة التي تسبق مباشرة تفرع الشريان إلى الشريانين المأبضي والصافني، ثم ضع الشريان الفخذي داخل فتحة المضيّق.

بالنسبة لنقص تروية الطرف الحاد، يتم تمرير خيط جراحي 7-0 تحت الشريان في نفس موضع المضيّق القريب، ثم يُربط الشريان. بعد ذلك، يتم عمل ربطة ثانية على بُعد حوالي 1 مليمتر من الربطة الأولى جهة المصب، واستخدام مقص زنبركي لقطع الشريان بين الربطتين. وبالنسبة لقطع الشريان القاصي، توضع الربطات على بُعد حوالي 1 مليمتر من بعضها البعض، مباشرة قبل موضع تفرع الشريان الفخذي إلى الشريان المأبضي والشريان الصافن.

بعد ذلك، أغلق الشق باستخدام غرز vicryl متقطعة بمقاس five-0، وانقل الفأر إلى وسادة تدفئة بدرجة حرارة 37 degree Celsius أسفل جهاز تصوير تروية دوبلر الليزري. الآن، قم بتشغيل جهاز التصوير، وشغل برنامج التقاط الصور. انقر فوق أيقونة New Single Image لفتح نافذة إعداد الماسح الضوئي، واضبط حجم المسح على large، وسرعة المسح على four milliseconds per pixel.

قم بتغيير قيم X وY في لوحة وحدات منطقة المسح (Scan Area) إلى القيم المناسبة، ثم انقر فوق علامة تبويب الفيديو والمسافة (Video and Distance)، وقم بمحاذاة كلا الطرفين الخلفيين ضمن منطقة المسح. انقر فوق المسافة التلقائية (Auto Distance)، ثم انقر فوق التالي (Next) لفتح نافذة تفاصيل العينة (Subject Details)، وأدخل معلومات العينة. انقر فوق التالي (Next) للانتقال إلى نافذة المسح.

بعد ذلك، انقر على زر Start Measurement لفتح مربع حوار Confirm or Override Scan Distance، ثم انقر على OK لبدء عملية المسح. عند اكتمال المسح، انقل الفأر إلى قفص استعادة فارغ مزود بمراقبة حتى يتم التعافي الكامل. وبالإضافة إلى الاختلافات المتأصلة في الدراسات الحيوانية، يمكن لعوامل أخرى أن تؤدي إلى تباين في تصوير تروية ليزر دوبلر، بما في ذلك درجة حرارة الجسم ووضعية الحيوان.

يعتمد نموذج نقص تروية الطرف الخلفي دون الحاد على جودة المضيقات الأميرودية (ameroid constrictors)، والتي يمكن أن تتباين بشكل كبير ضمن الدفعة الواحدة. يجب إجراء تصوير تروية بدوبلر الليزري فور انتهاء الإجراء بينما لا يزال الحيوان تحت تأثير التخدير لإثبات آثار الجراحة، وتحديد المستوى المرجعي للتروية بعد العملية. وينبغي ملاحظة فقدان كامل لتروية الطرف الخلفي بعد تحريض نقص تروية الطرف الحاد، بينما يُلاحظ عادةً انخفاض طفيف فقط في التروية بعد وضع المضيقات الأميرودية في النموذج دون الحاد.

تسمح هذه الإجراءات باستكشاف آثار درجات متفاوتة من نقص التروية على إعادة تشكيل الأوعية الدموية وتجدد العضلات الهيكلية في الفأر كنموذج لمرض الشرايين المحيطية لدى البشر. وبمجرد إتقان هذه الإجراءات، يمكن إكمالها في غضون 15 دقيقة تقريبًا إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. وأثناء محاولة إجراء هذه الجراحات، من المهم تذكر المراقبة المستمرة لدرجة حرارة الجسم ومدى كفاية التخدير في الحيوان.

من خلال تعديل وضع الرباطات أو المضيّقات، يمكن تعديل شدة الإصابة بنقص التروية، وهو ما قد يمثل متغيراً هاماً اعتماداً على الخلفية الجينية للحيوان، أو وجود عوامل خطر قلبية وعائية. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث نقص تروية حاد ودون حاد في الأطراف الخلفية للفأر، وتحديد التشريح الوعائي لضمان الحصول على نتيجة مناسبة وقابلية تكرار الإجراء.