العصب الشظية الإصابات الطريقة: مقايسة موثوقة لتحديد واختبار العوامل التي إصلاح العضلية المفارق

الهدف العام من طريقة إصابة الأعصاب الطرفية هذه هو فحص الوصلات العصبية العضلية المتجددة في الفئران بشكل موثوق. ستساعدنا هذه الطريقة في تحديد التغيرات الجزيئية والخلوية والوظيفية المرتبطة بتجديد الوصلات العصبية العضلية. الميزة الرئيسية لهذا الإجراء هي أنه يمكن مقارنة معدل تجديد الوصلات العصبية العضلية بشكل موثوق بين المجموعات التجريبية إلى حد كبير في حالة عدم وجود تغيرات عضلية.

سيوضح الإجراء ويليام دالكين ، طالب الطب في مختبري. قبل البدء في الإجراء ، استخدم 80٪ من الإيثانول لتنظيف موقع الجراحة واللوح والأدوات ، متبوعا بالتطهير ببوفيدون اليود. بعد ذلك ، ضع الماوس على اللوح الجراحي وتأكد من عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم.

قم بمحاذاة الأطراف داخل القيود مع الطرف الخلفي المستهدف في وضع طبيعي تشريحيا وتمتد مفاصل الركبة قليلا دون دوران داخلي أو خارجي. بعد ذلك ، انقل تحت المجهر الجراحي واضبط اللوح حتى يظهر مفصل الركبة العظمي والتلال بين عضلات الظنبوب الأمامية وعضلات المعدة من خلال الهدف. باستخدام مشرط وملقط ، قم بعمل شق بطول ثلاثة سنتيمترات تقريبا عبر الجلد ، عموديا على المسار الأساسي للعصب الشظوي المشترك.

استمر في الشق من خلال اللفافة السطحية التي تكشف العضلة ذات الرأسين الفخذية والعضلات الجانبية الواسعة ، متبوعا بشق من سنتيمتر إلى سنتيمترين من خلال اللفافة العميقة المتصلة لفصل العضلات. بعد ذلك ، استخدم المباعدات الميكانيكية لانحسار العضلة ذات الرأسين الفخذية الذيلية للكشف عن العصب الشظوي المشترك. تتبع العصب بالقرب من ذلك حتى يتم العثور على تقاطعه مع وتر الرأس الجانبي لعضلة المعدة.

بعد ذلك ، استخدم ملقطا دقيقا لإمساك العصب الذي يقوم بمحاذاة الأطراف بالتوازي مع الحدود الجانبية لوتر المعدة وتطبيق ضغط ثابت ومركز لمدة خمس ثوان لسحق العصب الشظوي المشترك. أمسك الملقط بشكل عمودي على الألياف ، وامسك الأنسجة بالمنطقة الواقعة خلف طرف الملقط مباشرة ، وقم بالضغط بقوة ولكن لطيفا لسحق خطي نظيف للعصب على طول حدود الوتر. افحص العصب بصريا من خلال المجهر الجراحي للتأكد من سحق الأنسجة بالكامل.

سيظهر العصب شفافا في موقع الإصابة. إذا تم استخدام الفئران التي تعبر عن بروتينات التألق في المحاور الطرفية ، فسوف يختفي التألق من موقع الإصابة. إذا كان العصب قد تضرر بشكل كاف ، فقم بإزالة الضاعرات وإعادة تنظيم العضلات في مواقعها التشريحية.

بعد ذلك ، استخدم 6-0 خيوط حريرية لإغلاق موقع الشق بواحد إلى ثلاث خيوط بسيطة متقطعة وضع الماوس على وسادة تسخين في قفص نظيف مع المراقبة حتى يتم استرداده تماما. يؤدي ضغط العصب لمدة خمس ثوان باستخدام ملقط ناعم إلى اختفاء YFP من موقع الإصابة. يظل epineurium متجاورا ، ويعمل كقناة للتجديد الدقيق للمحاور إلى أهدافها الأصلية.

في إناث الفئران البالغة من العمر 70 يوما ، تكون إصابة الأعصاب كافية للتسبب في تنكس جميع الأجزاء المحورية البعيدة عن السوما العصبي ، بعد أربعة أيام من السحق. بعد سبعة أيام من السحق ، تعيد النهايات العصبية بنشاط احتلال مواقع ما بعد التشابك التي تم إخلاؤها. في اليوم 12 ، تستمر النهايات العصبية في التمايز إلى مواقع ما قبل التشابك ويتم إعادة تعصيب الوصلات العصبية العضلية بالكامل.

هناك تباين ضئيل بين الفئران التي تم تجريدها لنفس المدة الزمنية ، مما يدل على أنه يمكن استخدام تكسير الأعصاب الشظوية كمقايسة لمقارنة إعادة تعصيب العضلات بين من نفس العمر والجنس. كما هو متوقع ، يحدث عدد من التغييرات في المحاور الحركية ألفا لأنها تعيد تعصيب ألياف العضلات. تتوسع مخاريط النمو المحورية وتتفرع عندما تتلامس مع مواقع ما بعد التشابك ، وتنمو على مناطق محددة من ما بعد المشبك ، وتبلغ ذروتها في التجاور شبه الكامل للنهايات المحورية ، مع مواقع ما بعد التشابك.

كما يتضح من تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ، تزداد الجينات المرتبطة بالوصلة العصبية العضلية بعد إزالة التعصيب وتنخفض مع إعادة تعصيب الوصلات العصبية العضلية. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 15 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تأخذ وقتك ، وتتخيل جميع الهياكل ، وتتحقق جيدا من الحصول على سحق كامل.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل QPCR للإجابة على أسئلة إضافية حول الجينات التي يتم تنظيمها أو تنظيمها. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الأعصاب لاستكشاف التجديدات المشبكية في الفئران. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء سحق العصب الشظوي لفحص معدلات إعادة تعصيب الوصلات العصبية العضلية في الفئران.