نهج الجراحي لانسداد الشريان الدماغي الأوسط وضخه المستحثة السكتة الدماغية في الفئران

الهدف العام لطريقة Longa هو تكاثر نقص التروية في جذر الشريان الدماغي الأوسط ، أو MCA ، حيث تحدث السكتات الدماغية الإقفارية في البشر بشكل شائع بسبب انسداد MCA. يمكن أن تساعدنا هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال السكتة الدماغية مثل كيفية إيجاد هدف علاجي مناسب لعلاج هذا المرض. الميزة الرئيسية لطريقة Longa على عكس التقنيات البديلة هي معدل البقاء على قيد الحياة.

هناك أيضا زيادة في تفاعلات الخلايا البطانية للكريات البيض وحجم الاحتشاء باستخدام هذه التقنية. سيوضح هذا الإجراء شانتل فيتال ، مدير مختبري. بعد إحداث التخدير في ذكر C57 أسود ستة فأر وفقا لبروتوكول النص ، راقب عمق التخدير عن طريق قرصة القدم وقم بتطبيق مرهم عين معقم لمنع الجفاف.

ثم احلق رقبة. ضع الماوس في وضع ضعيف على حصيرة منظمة لدرجة الحرارة وأدخل مسبارا مستقيميا لمراقبة درجة حرارة الجسم والحفاظ عليها من 36.5 زائد أو ناقص 0.1 درجة مئوية. ثم استخدم 70٪ كحول إيثيلي لتطهير الجلد.

بعد ذلك ، باستخدام مقص القزحية المستقيم ، قم بعمل شق خط الوسط وسحب الأنسجة الرخوة لكشف الأوعية. باستخدام ملقط دومون ، قم بتشريح الشريان السباتي المشترك ، أو CCA ، والشريان السباتي الخارجي ، أو ECA ، من الأنسجة المحيطة دون الإضرار بالعصب المبهم. باستخدام حرير 7-0 ، قم بعمل خياطة مؤقتة عن طريق ربط عقدة فضفاضة حول CCA.

بعد ذلك ، قم بعمل خياطة دائمة حول ECA والأوعية الأصغر الممتدة منها عن طريق ربط الأوعية بإحكام. الآن ، قم بعمل خياطة حول ECA القريب من تشعب CCA. بعد ذلك ، ضع مشبك وعاء صغيري حول الشريان السباتي الداخلي ، أو ICA ، والشريان الجفري ، أو PPA.

باستخدام مقص زنبركي للتشريح الدقيق ، قم بعمل شق صغير في ECA بالقرب من الخيط الدائم قدر الإمكان وأدخل خيوطا أحادية برأس سيليكون 180 ميكرومتر. مع إدخال الفتيل ، شد الخيط المؤقت حول ECA وإزالة مشبك الأوعية الدقيقة. استخدم مقص الزنبرك للتشريح الدقيق لقطع ECA بين الخيط البعيد الدائم ونقطة دخول الفتيل.

قم بتوجيه الفتيل من خلال ICA حتى يتم الشعور بالمقاومة في MCA. راجع التفاصيل الإضافية في بروتوكول النص. بعد فترة انسداد مدتها 30 دقيقة ، قم بإزالة الفتيل باستخدام ملقط دومون لسحبه برفق للخلف وتأمين الخيط حول الطرف المفتوح من ECA.

قم بإزالة الخيط المؤقت حول CCA عن طريق فك الرباط بعناية للسماح باستئناف تدفق الدم عبر CCA. قم بإزالة الضاعات ، ثم استخدم خياطة جراحية مستمرة لإغلاق الشق. حقن الماوس بملليلتر واحد من المحلول الملحي تحت الجلد لتجديد الحجم ومع الكاربروفين المسكن لتخفيف الألم وعدم الراحة من العملية الجراحية.

راقب الفأر طوال فترة التعافي من التخدير في قفص مخصص يتم تسخينه إلى 30 درجة مئوية وضع الطعام المهروس في طبق بتري على أرضية القفص لتشجيع الأكل. باستخدام نظام تسجيل مكون من 18 نقطة ، قم بتقييم الفئران عصبيا بعد فترة إعادة التروية المناسبة لتقييم الدرجات العامة والحركية والحسية والحس العميق. تتوافق الدرجة العصبية الأعلى مع انخفاض الوظيفة العصبية.

لقياس حجم احتشاء النخالة ، بعد تحفيز التخدير ومراقبة العمق وفقا لبروتوكول النص ، ضع الماوس في وضع ضعيف واستخدم مقص القزحية المستقيم لقطع الجلد من البطن إلى الرقبة قبل قطع الصفاق. باستخدام ملقط دومون ، ارفع عظم القص واقطع الضلوع. بعد ذلك ، استخدم زوجين من مرقئ الدم لفتح الجانبين الأيسر والأيمن من الصدر لتعريض القلب.

أدخل إبرة قياس 26 متصلة بحقنة بحجم خمسة ملليمترات في البطين الأيسر واقطع الأذين الأيمن. ثم باستخدام محلول ملحي عادي بدرجة حرارة الغرفة ، أو PBS ، قم بنقاء القلب حتى يصبح السائل صافيا. باستخدام مقص وملقط القزحية المستقيمة ، قم بإزالة رأس وإزالة الدماغ بعناية من الجمجمة.

بعد ذلك ، استخدم شفرة حلاقة لقطع البصلة الشمية والمخيخ حتى يتناسب الدماغ مع المصفوفة. بعد تبريد المصفوفة ، ضع الدماغ بالداخل وضعه على الجليد. ثم باستخدام شفرة حلاقة ، قم بعمل أول قطع في الدماغ على بعد ملليمترين من الأعلى واترك الشفرة في مكانها.

باستخدام شفرة حلاقة ثانية ، قم بعمل قطع آخر بطول ملليمترين خلف الأولى. ثم قم بإزالة شفرة الحلاقة الأولى مع توصيل الأنسجة. كرر هذه العملية حتى يتم تقطيع جميع الأنسجة.

ضع كل قطعة بالترتيب الذي تم تقطيعها به إلى بئر واحد من صفيحة مكونة من 24 بئرا تحتوي على 2٪ اثنين ، ثلاثة ، خمسة ثلاثي فينيلترازوليوم كلوريد ، أو TTC ، وضع اللوحة في حمام مائي ضحل عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بعد الحضانة لمدة 10 دقائق ، اقلب الشرائح. بعد ذلك ، ضع كمية صغيرة من 10٪ من الفورمالين في آبار صفيحة جديدة مكونة من 24 بئرا وانقل الأجزاء إلى آبار الفورمالين بالترتيب الذي تم قطعها به.

بعد مسح الأجزاء في الكمبيوتر ، استخدم برنامج تحليل ImageJ لتحليل حجم الاحتشاء كنسبة مئوية من شريحة الدماغ بأكملها عن طريق تحديد المنطقة المحتضنة لإنشاء قياس منطقة. بعد ذلك ، قم بقياس نصف الكرة المقابل بالكامل لتحديد المنطقة. أخيرا ، اقسم منطقة الاحتشاء على مساحة نصف الكرة المقابل واضربها في 100 لتحديد حجم الاحتشاء.

كما هو موضح هنا ، تم استخدام قياس تدفق دوبلر بالليزر لتأكيد نضح تدفق الدم في منطقة MCA قبل وبعد إعادة تروية MCA. عندما يتم تحرير ربطة CCA المؤقتة بعد 30 دقيقة من نقص التروية لإزالة الخيوط وإعادة التروية ، هناك زيادة في التروية التي وصلت إلى أقل بقليل من 100٪ من التروية الأساسية بعد خمس دقائق من إعادة التروية. المدرجة في هذا الجدول هي الدرجات العصبية المتعلقة بتقييم العجز العام والحسي والحركي والتحسس العميق.

هذا الرسم البياني أن النتيجة ل 27 فأرا في 24 ساعة كانت 12.56 زائد أو ناقص 0.7 وظلت مرتفعة بعد أسبوع واحد عند 11.50 زائد أو ناقص 1.5. تمثل الدرجة العصبية الأعلى انخفاضا في الوظيفة العصبية. أظهرت أحجام الاحتشاء أنماطا مشابهة للنتيجة العصبية في 24 ساعة.

كما هو موضح هنا ، بعد 24 ساعة من MCAo ، كان لدى الفئران أحجام احتشاء كبيرة زادت بعد أسبوع واحد من السكتة الدماغية. بمجرد إتقانها ، يمكن تنفيذ هذه التقنية في غضون 15 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم الحفاظ على درجة الحرارة عند 36.5 درجة مئوية.

بعد هذا الإجراء ، يمكن أيضا تنفيذ طرق أخرى مثل ربط الأعور والثقب. يتيح لنا ذلك الإجابة على أسئلة إضافية مثل آثار الإنتان قبل وبعد السكتة الدماغية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث نقص التروية عن طريق إدخال شعيرات أحادية في الشريان الدماغي الأوسط وإزالتها للسماح بإعادة التروية.

لا تنس أن العمل مع الأجهزة مثل مقص القزحية والملقط يمكن أن يكون خطيرا ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات.