Name: بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: تعلم عزل دائرة ويليس في الفئران لدراسة الأوعية الدموية الدماغية دون تغيير بنية الأوعية. هذه الطريقة تساعد الباحثين على فهم التعبير الجيني المرتبط بأمراض الأوعية الدماغية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل جامعة باريس السادسة ومنحة بيير فابر الابتكار.

تم تنفيذ كافة الإجراءات وفقا للمعايير الجماعة الأوروبية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وبموافقة لجنة الاخلاق المحلية لإجراء التجارب على الحيوانات (إيل دو فرانس-باريس-لجنة والاعتماد 4270). 1. التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ جرعة قاتلة من بنتوباربيتال (تصل إلى 1 ملغ / 10 غرام من وزن الجسم) (إبرة 27 عيار وحقنة 1 مل) البريتونى إلى فئران بالغة قبل الجراحة. </li></ol> 2. السفينة الإرواء ملاحظة: ليست هناك حاجة لتطبيق التعليم والتدريب المهني مرهم للعين خلال نضح السفينة. هذا الإجراء السريع (5-10 دقائق) وينتهي في موت الحيوان. تأكيد عدم استجابة مع قليل أخمص قدميه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص القزحية، وجعل شق، حوالي 4 سم، في جدار البطن والصفاق، فقط تحت القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (بضعة ملليمترات طويلة) في الحجاب الحاجز ومن ثم continuالبريد شق في الحجاب الحاجز على طول القفص الصدري لفضح تجويف الجنبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع القص بعيدا والمشبك غيض من القص مع مرقئ. وضع مرقئ على الرقبة. تقليم بعناية الأنسجة الدهنية التي تربط عظمة القص إلى القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اجتياز 15 عيار التروية الإبرة من خلال البطين الأيسر في قمة القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، استخدام مقص لقطع أحد فصوص الكبد لخلق متنفسا. ملاحظة: يمكن إنشاء منفذ بديل باستخدام مقص القزحية لخلق شق إلى الأذين الأيمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي هذا الحيوان مع 25-50 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع مضخة تعمل بمعدل 2.5 مل / دقيقة. يجب أن يتم استبدال الكبد بلانش لأن الدم مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ما يقرب من خمس دقائق، وبمجرد أن السائل من الكبد واضح تماما، ووقف نضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم التخطيط المناعية أو تلطيخ العادية، يروي الحيوان مع 50 مل من امتصاص العرق(منهاج العمل، 4٪ في برنامج تلفزيوني) لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: الحذر، والأبخرة PFA سامة. وينبغي أن يتم نضح من الحيوانات مع PFA في غطاء الدخان التهوية. </li></ol> 3. عزل الدماغ ودائرة ويليس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الرأس مع زوج من مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق خط الوسط مع مقص القزحية، جنبا إلى جنب الجلد من العنق إلى الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليم قبالة الجلد لفضح الجمجمة وإزالة أي العضلات المتبقية والأنسجة الدهنية مع مقص القزحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع نهاية حادة من مقص القزحية إلى ماغنوم الثقبة على جانب واحد، وحرك لهم بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة إلى الصماخ السمعي الخارجي (المعروف أيضا باسم قناة الأذن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنتاج شق صفها في 3.1.4 على الجانب المقابل، وجعل خط الوسط وقطع على طول السطح الداخلي من العظم بين الجداري لبدء الدرز السهمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زرع القزحيةمقص في العظم الجبهي، والحق بين العينين، في الدرز السهمي ثم فتحها لتقسيم الجمجمة في البلدين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع من الدماغ، والاستيلاء على بصيلات الشم وباستخدام مقص القزحية لقطع الاتصالات العصبية على سطحه البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدماغ ووضعه في 60 ملم طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة برنامج تلفزيوني لعزل البقر. تزج تماما الدماغ في برنامج تلفزيوني. إذا تم إصلاح الدماغ مع PFA 4٪ (لباجتزاء لاحق والمناعية أو تلطيخ العادية)، ويبقيه في حمام من 4٪ PFA في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل دائرة ويليس ملاحظة: مطلوب مجهر تشريح لعزل البقر. يجب أن تبقى في الدماغ في 4 درجات مئوية في جميع أنحاء الإجراء بأكمله. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الدماغ رأسا على عقب (أي على السطح الظهري لل) لتصور البقرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط صغير للاستيلاء على الشرايين الدماغية الأمامية (ACA) في قاعدة الفص الشمي ( <strأونج&gt; لذلك، الشكل 1) وممارسة الضغط على فصلها من التواصل السفينة. استخدام نفس الإجراء لقطع الشرايين المتوسطة الدماغية (MCA) في ب (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام نهايات حادة من ملقط لرفع وإزالة الشرايين الكبرى التي تكون بقرة من القشرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارفع بداية الخلفي التواصل الشرايين (PCA) لفصلهم من الدماغ، التي تجتاح الشرايين الدماغية المتوسطة (MCA) مع ملقط. التقاط الشرايين الأمامية (ACA وMCA) وسحبها بلطف على chiasm البصرية في الاتجاه الأمامي الظهري. لمنع الفوضى من البقر، يقطع الإجراء للتعامل مع الشرايين الأخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3.2.2 و 3.2.3 للشرايين المخيخيتين والخلفية (SCA) / (PCA) (ج، الشكل 1) والشريان القاعدي (BA) (د، الشكل 1)، وسحب منهم في dorsal- الاتجاه الأمامي. وقف في نهاية الإجراء الموضح طن 3.2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البقر كامل عن طريق سحب بلطف مع ملقط. ضع بقرة في 60 ملم طبق بيتري مليئة الجليد الباردة برنامج تلفزيوني وإزالة أي أنسجة المخ تعلق المتبقية مع اثنين من ملقط، وعقد بقرة في مكان مع دبابيس صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على بقرة تحصد في -80 درجة مئوية لمعالجتها لاحقا لتنقية الحمض النووي الريبي (عوائد استخراج الحمض النووي الريبي كميات كبيرة من الحمض النووي الريبي - ما يقرب من 500 نانوغرام) أو استخراج البروتين. ملاحظة: لا يمكن الحفاظ عليه البقرة خارج الحي لمدة 24 ساعة، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز المتقدمة للماوس معزولة الشريان حاسة الشم 7. </li></ol></li></ol><img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> الشكل 1: رسم تخطيطي لعرض بطني من مخ الفأر تسليط الضوء على بقرة يتم تشكيل البقر اثنين من الشرايين السباتية الداخلية (MCA)، والتي هي مستمدة من اثنين من الشرايين الدماغية الأمامية (ACA)؛ وقاعديالشريان (BA) فروع في الخلفية (PCA) ومتفوقة (SCA) الشرايين الدماغية، واثنين من الشرايين الفقرية (VA).

<ol><li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li>
<li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li>
<li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li>
<li>Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li>
<li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+amyloid+angiopathy%3A+emerging+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li>
<li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+atherosclerotic+stroke%3A+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li>
<li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Neurosurg+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li>
<li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+murine+intracranial+aneurysm+model%3A+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurointerv+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li>
<li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy%3A+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li>
<li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li>
<li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li>
<li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stanimirovic%2C+Hamel%2C+%26+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li>
<li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li>
<li>Hübscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

نحن هنا وصف بروتوكول استنساخه لعزل دائرة ويليس. الاضطرابات الدماغية الأكثر شيوعا التي تنطوي على بقرة هي vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات، وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة، والتي تؤثر على جدران الأوعية الشريانية. عوامل الخطر معروفة جيدا، ولكن المرضية الجزيئية هذه الاضطرابات الدماغية تزال غير مفهومة تماما وعلامات بيولوجية محددة للتنبؤ حدوثها تفتقر. وهناك اهتمام كبير في طرق لعزل البقرة من الفئران المعدلة وراثيا لربط الملاحظات العيانية مع ا...

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية)، المعروف أيضا باسم دائرة ويليس (البقرة)، حلقة من Willisor ويليس المضلع) وصفت لأول مرة من قبل توماس ويليس في 1664. وهو مفاغرة الدورة الدموية الموجودة في جميع أنحاء التصالبة البصرية وتحت المهاد التي يمكن أن تعتبر محورا مركزيا توريد الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. يدخل الدم هذا الهيكل عن طريق الشريان السباتي الداخلي والشرايين الفقرية ويتدفق من دائرة عن طريق الوسط الداخلي والشرايين المخية الخلفية. وقد تركت كل من هذه الشرايين والحق الفروع على جانبي الدائرة. وقاعدي، وظيفة التواصل، والتواصل الشرايين كاملة دائرة الأمامي (الشكل 1 والشكل 2). تم تصغير خطر تدفق الدم وضعف في أي من الشرايين تدفق من دمج الدم دخول دائرة من الشريان السباتي والشرايين الدماغية، مما يضمن أن يتم توفير كمية كافية من الدم إلى بالمطر. ويقدم هيكل أيضا الطريق الرئيسي لتدفق ضمانات الدم في أمراض انسداد حاد في الشريان السباتي الداخلي. عدة أنواع من الاضطرابات الدماغية لديهم أصلهم في البقرة. الأكثر شيوعا هي الدماغي اعتلال وعائي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. 1، 2، 3 وهذه الاضطرابات قد يؤدي إلى نقص انسياب الدم بسبب توسع الأوعية، وداخل المخ و / أو تحت العنكبوتية نزيف ترجمة في نهاية المطاف إلى السكتات الدماغية الإقفارية أو النزفية أو ، في أحسن الأحوال، نوبة نقص تروية عابرة. جعلت التطورات الحديثة في إجراءات التشخيص، بما في ذلك تصوير الأعصاب، وربما جنبا إلى جنب مع القسطرة، من الممكن تشخيص هذه الأمراض الدماغية الكبرى سريريا، دون الحاجة لخزعة الدماغ. ومع ذلك، علاجات فعالة ومحددة (الدوائية أو اللف) تفتقر حاليا، وبالتالي هناك حاجة لتعريف جديدأهداف جزيئية. وتحديد الأهداف عقار جديد للوقاية من هذه الأمراض في البشر تتطلب النماذج الحيوانية وسبل عزل الدماغية، الأوعية الدموية بما في ذلك بقرة. وينبغي لهذه النماذج أن يقدم دليلا على والقرائن إلى تغييرات محددة، بما في ذلك التغيرات الالتهابية، والتي تحدث في جدران الأوعية الكبيرة في النماذج الحيوانية من تمدد الأوعية الدموية في الشريان داخل الجمجمة، الجهاز المركزي للمحاسبات أو تصلب الشرايين داخل الجمجمة. 4، 5، 6 قمنا بتأسيس طريقة لعزل الماوس بقرة لتسهيل الدراسات من التهاب الأوعية في مرض الزهايمر (AD) والأمراض ذات الصلة، مثل الجهاز المركزي للمحاسبات. وقد تم تطوير هذه الطريقة لعزل البقرة الماوس لتقييم التعبير الجيني الدماغية التهابات أثناء تطور المرض. جنبا إلى جنب مع الكشف عن ترسب اميلويد بيتا داخل جدران السحايا الرقيقة وحنوني الشرايين، يمكن لهذا الأسلوب يجعل من الاسهل لردعمنجم العلاقة المحتملة بين التعبير الجيني التهاب في جدار الأوعية الدموية الدماغية، وتراكم Aβ الببتيد. شبكة الأوعية الدموية في الدماغ، بما في ذلك السحايا الرقيقة وحنوني في الفضاء تحت العنكبوتية، هو امتداد للشرايين الكبيرة تشكيل دائرة ويليس. ويمكن استخدام الأسلوب هو موضح هنا لعزل بقرة من أي سلالة الماوس ويمكن استخدامها لجميع أنواع الفرز (على سبيل المثال، التعبير الجيني، وإنتاج البروتين والتعديلات البروتين posttranslational) على السفن الكبيرة من الفأرة الدماغية، الأوعية الدموية.

<table><tbody><tr><td>دولبيكو s الفوسفات المخزنة المالحة</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont # 55 ملقط</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>مقص القزحية الناعمة المتصلبة &nbsp ؛</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>مقص - مستقيم / حاد / حاد &nbsp; &nbsp; 16.5 سم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>ملقط دومون #7b &nbsp;</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>مجهر التكبير المجسم</td><td>نيكون</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Surface 60 مم طبق ثقافة</td><td>Corning</td> <td># 3295</td><td></td></tr><tr><td>مضخة تمعجية - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant & eacute ؛ Animale</td><td>FR / V / 2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية) أو دائرة ويليس (البقرة) هي مفاغرة الدورة الدموية المحيطة التصالبة البصرية وتحت المهاد التي تزود الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. وقد تورط في العديد من الاضطرابات الدماغية، بما في ذلك اعتلال وعائي دماغي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. تتطلب دراسات الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه الأمراض لتحديد أهداف عقار جديد للوقاية من النماذج الحيوانية. قد يكون بعض من هذه النماذج المعدلة وراثيا، في حين أن آخرين سوف تشمل عزل الدماغية، الأوعية الدموية، بما في ذلك طريقة CoW.The الموصوفة هنا هي مناسبة لعزل بقرة في أي سلالة الماوس ولديه إمكانات كبيرة لفحص (التعبير عن الجينات، وإنتاج البروتين، التعديلات البروتين posttranslational، تحليل secretome، الخ) دراسات على السفن الكبيرة من cerebro- الماوسالأوعية الدموية. ويمكن أن تستخدم أيضا لدراسات المجراة سابقا، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز وضعت للمعزولة الشرايين الماوس حاسة الشم.

<html> قتل الماوس perfused برنامج تلفزيوني ويتم عزل البقر كما هو موضح في الفقرة 3.2 من البروتوكول. عند إجراء تشريح بشكل صحيح، يجب أن البقرة يخرج في قطعة واحدة، وينبغي أن تكون شفافة بعض الشيء نظرا لعدم وجود الدم المتبقي في الأوعية الدموية. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> الشكل 2: البقرة ...

نصف هنا بروتوكولا قابلا للتكرار لعزل دائرة الفأر في ويليس.

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

الهدف العام من إجراء التشريح هذا هو عزل دائرة ويليس في الفئران لتسهيل دراسة الأوعية الدموية الكبيرة في الأوعية الدموية الدماغية للفأر. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في دراسة التعبير الجيني للأوعية الدموية الدماغية في مختلف الأمراض التي تؤثر على الأوعية الدماغية، مثل مرض الزهايمر ومرض اعتلال الأوعية الدموية الدماغية النشواني. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية في إمكانية عزل الأوعية الكبيرة بسرعة وسهولة دون تغيير بنية الوعاء الدموي.ابدأ باستخدام مقصات إيريس (Iris scissors) لإحداث شق بطول أربعة سنتيمتر في جدار البطن والبريتون لفأر تحت تخدير قاتل، وذلك أسفل القفص الصدري مباشرةً. بعد ذلك، قم بإحداث شق بطول بضع مليمترات في الحجاب الحاجز، مع مواصلة الشق على طول القفص الصدري بالكامل للكشف عن التجويف الجنبي. ارفع عظمة القص وثبّت طرفها باستخدام ملقط مرقئ (hemostat)، مع إراحة الملقط على الرقبة.ثم قم بتقليم النسيج الدهني الذي يربط عظمة القص بالقلب بعناية. والآن، مرر إبرة تروية عيار 15 من خلال البطين الأيسر إلى قمة القلب، واستخدم المقص لقطع أحد فصوص الكبد لإنشاء مخرج لسائل التروية. قم بتروية الحيوان بـ 25 إلى 50 milliliters من PBS بمعدل ضخ 2.5 milliliters لكل دقيقة لمدة عشر دقائق تقريباً.يجب أن يشحب لون الكبد مع استبدال الدم بـ PBS. عندما يصبح السائل الخارج من الكبد صافياً تماماً، يتم إيقاف عملية التروية. لعزل الدماغ، استخدم مقصات إيريس (Iris) لإجراء شق في الخط المتوسط على طول الجلد من الرقبة إلى الأنف.قم بقص الجلد باستخدام مقصات آيريس (Iris) للكشف عن الجمجمة وإزالة أي أنسجة عضلية أو دهنية متبقية. بعد ذلك، ضع طرف مقصات آيريس في أحد جانبي الثقبة العظمى، ومرر الطرف بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة وصولاً إلى القناة السمعية الخارجية. قم بإجراء شق مماثل على الجانب الآخر من الثقبة العظمى، متبوعاً بقطع في خط المنتصف على طول السطح الداخلي للعظم بين الجدارين وصولاً إلى بداية الدرز السهمي.اغرس مقصات "Iris" المغلقة في العظم الجبهي بين العينين عند الدرز السهمي، ثم افتح الشفرات لشق الجمجمة إلى نصفين. وباستخدام الملاقط، أمسك البصيلات الشمية واستخدم مقصات "Iris" لقطع الاتصالات العصبية على السطح البطني للدماغ. بعد ذلك، اغمر الدماغ في طبق بتري بقطر 60 millimeter يحتوي على PBS مبرد بالثلج.لعزل دائرة ويليس، انقل الطبق إلى حزمة ثلجية تحت مجهر تشريحي وقم بقلب الدماغ على سطحه الظهري لرؤية دائرة ويليس. استخدم ملقطاً صغيراً للإمساك بالشرايين الدماغية الأمامية عند قاعدة الفصوص الشمية، واضغط لفصل الشرايين عن استمرارية الأوعية الدموية. اقطع الشرايين الدماغية الوسطى بنفس الطريقة.ثم استخدم الأطراف الحادة للملقط للإمساك بالشرايين الدماغية الوسطى ورفع بداية الشرايين الموصلة الخلفية، مما يؤدي إلى فصل كلتا المجموعتين من الشرايين عن الدماغ. بعد ذلك، ارفع الشرايين الأمامية، واسحبها برفق فوق التصالب البصري في اتجاه ظهري أمامي. قم بإزالة الشرايين المخيخية العلوية والخلفية بنفس الطريقة، يليه إزاحة الشريان القاعدي.أخيرًا، استخدم الملقط لنقل دائرة ويليس بأكملها برفق إلى طبق بتري سعة 60 مليمتر يحتوي على PBS مبرد بالثلج، وثبّت الأوعية في مكانها باستخدام دبابيس صغيرة، مع استخدام ملقطين لإزالة أي أنسجة دماغية متبقية بعناية. يجب أن تخرج دائرة ويليس كقطعة واحدة، ويجب أن تكون شفافة قليلاً بسبب خلو الأوعية الدموية من الدم المتبقي. يجب أن تعبر دائرة ويليس النظيفة تحديدًا عن مؤشرات خلايا العضلات الملساء الوعائية، مثل Smooth Muscle Actin وSmooth Muscle-Myosin Heavy Chain وSmoothelin.وفي المقابل، يجب أن تكون المؤشرات العصبية، مثل بروتين سكري oligodendrocytic المياليني، أو البروتين 2 المرتبط بالأنيبيبات الدقيقة، بالكاد قابلة للكشف في دائرة ويليس. علاوة على ذلك، فإن تعبير المؤشر البطاني، E-Selectin، في الأنسجة العصبية خارج دائرة ويليس، مشابه جداً لذلك الذي تم الحصول عليه في عينات دائرة ويليس، وهو ما قد يعكس وجود شبكة شعيرات دموية دماغية. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إتمامها في غضون ساعتين إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر أن الأوعية الدموية الدماغية للفأر دقيقة للغاية وسهلة الكسر. لذا، يجب إجراء عملية التشريح بعناية فائقة ودون تسرع، لضمان استخراج البنية الكاملة كقطعة واحدة. وبعد تطويرها، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأمراض العصبية الالتهابية لاستكشاف اضطرابات الأوعية الدموية الدماغية في نماذج الفئران المصابة بمرض Alzheimer والأمراض المرتبطة به مثل اعتلال الأوعية الدموية الأميلويدي الدماغي.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل دائرة ويليس من الفأر.

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

يوضح هذا الفيديو إجراء عزل الخلايا المناعية عن ضفائر المشيمية للفأر. يستخدم هذا الإجراء في أبحاث المناعة العصبية لفهم كيفية تأثير الخلايا المناعية في الضفائر المشيمية على صحة الدماغ والأمراض العصبية المختلفة.

عزل الخلايا المناعية من الضفائر المشيمية للفأر

ونحن نقدم طريقة جراحية للحث التجريبية نقص التروية / ضخه (I / R) إصابة لمحاكاة احتشاء عضلة القلب (MI) في نماذج الماوس التي تسمح لمزيد من الوضوح في تحديد المواقع للربط على الشريان الأمامي الأيسر تنازلي (LAD) لزيادة التكاثر من التجارب MI في الفئران.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

يلعب الالتهاب دورا مركزيا في التسبب في السكتة الدماغية الإقفارية. تشير الأدلة المتزايدة إلى أنه يعمل كسيف ذو حدين يؤدي إلى تفاقم إصابة الدماغ المبكرة ، ولكنه يساهم أيضا في الإصلاح لاحقا. يصف هذا البروتوكول عزل الخلايا المناعية عن الدماغ الإقفاري والتنميط الظاهري الخلوي للتدفق اللاحق.

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

والغرض من هذا البروتوكول هو للتدليل على تقنيات العزل وثقافة الخلايا الأولية الفئران الأوعية الدموية العضلات الملساء (VSMCs) من الدورة التاجية. مرة واحدة وقد تم عزل VSMCs، ويمكن استخدامها في العديد من تقنيات زراعة القياسية.

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

ويرد وصف لإجراء صنع الاستعدادات وجهه من الشريان السباتي الماوس والشريان الأبهر. هذه الاستعدادات، عندما ملطخة إمونوفلورزنتلي مع الأجسام المضادة محددة، تمكننا من دراسة توطين البروتينات وتحديد أنواع الخلايا داخل جدار الأوعية الدموية بأكمله من قبل المجهر متحد البؤر.

في إعداد الوجه من ماوس سفن الدم

نقدم هنا، بروتوكولا لعزل خلايا الكبد الماوس الأساسي صحية ووظيفية. وقدمت إرشادات للكشف عن البروتين الوليدة كبدي من الركازة التوسيم غير المشعة للمساعدة في فهم الآليات الأساسية تخليق البروتين في سياق التوازن الطاقة الأيض في الكبد.

عزل خلايا الكبد الماوس الأساسي لتحليل توليف البروتين الوليدة بأسلوب العلامات غير مشعة L-أزيدوهوموالانيني

يقدم هنا بروتوكول لعزل وتضخيم البكتيريا اللاهوائية الهوائية والكلية الملتحمة الماوس الملتحمة باستخدام مسحة عين فريدة من نوعها وخطوة إثراء قائمة على الثقافة مع تحديد لاحق من خلال الأساليب القائمة على الميكروبيولوجية وقياس الطيف الكتلي MALDI-TOF.

عزل الملتحمة والهوية في الفئران

المعيار الذهبي في أمراض القلب للتجارب الوظيفية الخلوية والجزيئية هي خلايا عضلة القلب. توضح هذه المقالة التكيفات مع تقنية غير Langendorff لعزل خلايا عضلة القلب في الفئران.

طريقة بسيطة وفعالة لعزل خلايا عضلة القلب في الفئران باستمرار

هنا نوجز ونوضح بروتوكولا لعزل الخلايا البطانية الجيبية الأولية لكبد الفأر (LSEC). يعتمد البروتوكول على تروية كولاجيناز الكبد ، وتنقية الخلايا غير المتنية عن طريق الطرد المركزي منخفض السرعة ، واختيار الخرزة المغناطيسية CD146. نحن أيضا النمط الظاهري ونوصيف هذه LSECs المعزولة باستخدام قياس التدفق الخلوي والمجهر الإلكتروني الماسح.

عزل وتوصيف الخلايا البطانية الجيبية الأولية للكبد الفأر

تصف هذه الورقة طريقة للعزل المغناطيسي القائم على الخرزة للخلايا البطانية للفأر من الشعيرات الدموية اللمفاوية الجلدية. يمكن استخدام الخلايا البطانية اللمفاوية المعزولة في التجارب المختبرية وتحليل التعبير البروتيني.

عزل الخلايا البطانية اللمفاوية الجلدية للفأرين

تعلم عزل دائرة ويليس في الفئران لدراسة الأوعية الدموية الدماغية دون تغيير بنية الأوعية. هذه الطريقة تساعد الباحثين على فهم التعبير الجيني المرتبط بأمراض الأوعية الدماغية.

بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس

استكشف المزيد من الفيديوهات