قياس التقدمي العصبية الإعاقة في نموذج الفأر من مرض التصلب العصبي المتعدد

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم الضعف العصبي التدريجي في الفئران المصابة بأمراض مزيلة للميالين المزمنة. نحقق ذلك من خلال تقديم توصيات لمعايير الاختبار المناسبة لدراسة الإعاقة العصبية طويلة الأمد في نموذج فيروس ثيلرز للتصلب المتعدد التدريجي ، باستخدام اختبار روتارود. يوفر هذا الإجراء خط أساس لتقييم أهمية نموذج الفأر لإزالة الميالين التدريجي وفائدته لاختبار العلاجات التي تهدف إلى علاج الحالة العصبية التقدمية مثل التصلب المتعدد.

تتمثل ميزة هذا الاختبار المحسن على نظام التسجيل المرئي التقليدي في أنه يولد متغيرا موضوعيا لتحديد التأثير طويل المدى للعلاجات والإجراءات التجريبية على الوظائف الحركية. ستظهر هذا الإجراء دارلين رويس ، فنية من مختبر المناعة العصبية في دارتموث. من أجل تقييم تنسيق التوازن الأساسي والتحكم الحركي ، ابدأ بروتوكول التكيف قبل خمسة أيام من الإصابة ب TMEV عن طريق السماح للفئران بالتأقلم أولا مع غرفة الاختبار لمدة 30 دقيقة على الأقل.

أثناء تأقلم الفئران ، قم بضبط Rotarod مسبقا بمعلمات تدريب DPI تحت الصفر الخمسة. ثم التقط فأرا من الذيل وضعه على القضيب المواجه بعيدا عن المشغل. إذا سقط الفأر أو قفز ، ضعه مرة أخرى في مساره على Rotarod حتى تصبح جميع الفئران في موضعها.

بعد تحميل جميع الفئران الأربعة ، اضغط على زر Enter لبدء التجربة. تأكد من أن المؤقتات تبدأ تلقائيا، وراقب الدورات في الدقيقة المعروضة لكل حارة. بعد ذلك ، عندما يسقط كل من القضيب ، سجل سرعة القضيب في وقت السقوط ، وكذلك المدة الزمنية التي بقي فيها على القضيب.

بعد سقوط كل الفئران ، استخدم منديلا لإزالة أي بولي براز وبول من القضيب لأن وجود البول والمواد البرازية قد يؤثر على قدرة الفئران على الإمساك بالقضيب بشكل صحيح. بعد ثلاث دقائق من الراحة ، امنح الفئران تجربة ثانية ثم تجربة ثالثة يكون فيها الحد الأقصى للوقت لكل تجربة واحدة 240 ثانية. قم بإدارة ما مجموعه ثلاث تجارب خلال كل يوم اختبار.

أخيرا ، أعد الفئران إلى قفص منزلها. في الأيام سالبة أربعة ، وسالب ثلاثة ، وسالب اثنين ، وسالب واحد PI ، قم بضبط Rotarod مسبقا بمعلمات بروتوكول التدريب المناسبة وكرر تجربة Rotarod. ابدأ بنقل الأقفاص التي تحتوي على فئران SJL من أربعة إلى ستة أسابيع من الرف إلى مساحة عمل مريحة.

استخدم لكمات الأذن لتمييز الفئران للسماح بالتقييم الفردي للأمراض السريرية والنسيجية. بعد ذلك ، اسحب 30 ميكرولترا من مخزون TMEV المصاب في PBS في إبرة حقنة الأنسولين قياس 29. تحضير آلة غاز التخدير من خلال التأكد من وجود كميات كافية من الأكسجين والأيزوفلوران طوال مدة العملية.

ضع في غرفة الحث وأغلق الجزء العلوي. بعد بضع دقائق ، أخرج من الغرفة ، واختبر الماوس عن طريق الضغط على وسادة القدم لضمان التخدير الكافي. بعد ذلك ، قم بتنظيف موقع الحقن بكحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪ وحقن 30 ميكرولترا من مخزون TMEV المصاب في نصف الكرة الدماغي الأيمن عن طريق الحقن اليدوي.

أخيرا ، أعد الماوس إلى قفص الاحتجاز الخاص به بمجرد أن يصبح في حالة تأهب وحركة كاملة. في اليوم السابع بعد الإصابة ، قم بتعيين Rotarod مسبقا بالمعلمات التجريبية المناسبة ، وكرر تمرين تدريب Rotarod الكامل مع معلمات البروتوكول التجريبي المناسبة. بعد التجربة الثالثة في كل يوم ، قم بوزن كل فأر وقم بتدوين وزن الجسم في ورقة البيانات.

اختبر الفئران مرتين في الأسبوع للأسابيع الستة التالية بنفس الطريقة. بعد ستة أسابيع ، اختبر الفئران مرة واحدة في الأسبوع بنفس البروتوكول التجريبي لمدة 150 يوما تجريبيا في المتوسط. بعد ذلك ، قم بتحليل البيانات الأولية ، والتعبير عنها كمؤشر وظيفي عصبي ، أو NFI.

لتحديد قيمة NFI الفردية، احسب عتبة الأداء الأساسية لكل فأرة كمتوسط لجميع أوقات التشغيل من 15 إلى 45 يوما بعد الإصابة. من أجل السماح بتقييم الأداء الحركي نتيجة إزالة الميالين التدريجي واستبعاد أي عجز مساهم بسبب التهاب الدماغ المبكر. بعد ذلك، احسب قيمة NFI كمتوسط لأحدث ثلاثة متوسط أوقات تشغيل مقسومة على عتبة الأداء الأساسية للماوس.

أخيرا ، احسب NFI المعدل بقسمة قيمة NFI على متوسط قيمة NFI التي حصلت عليها المجموعة المعالجة الوهمية في ذلك اليوم المحدد. يوضح هذا الشكل أن الفئران المصابة ب TMEV تظهر عجزا عصبيا متزايدا بشكل كبير بمرور الوقت عند مقارنتها بالفئران الضابطة. أثرت العدوى المزمنة بسلالتين مختلفتين من TMEV سلبا على أوقات تشغيل الفئران.

كلتا المجموعتين من الفئران المصابة ب TMEV لديها قيم NFI أقل بكثير من تلك الموجودة في الفئران الوهمية. علاوة على ذلك ، لم يكن هناك فرق مقارنة تطور الإعاقة في الفئران المصابة بسلالة BeAn ، وتلك المصابة بسلالة DA في جميع النقاط الزمنية. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق التسجيل البصري التقليدية ، مثل اختبار الانعكاس الصحيح ، من أجل تقييم الصحة العامة للفئران بسرعة.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال التصلب المتعدد والأمراض التنكسية العصبية لاختبار فعالية العلاجات والتدخلات الأخرى في تأخير الإعاقة التدريجية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم الإعاقة التقدمية طويلة المدى في الفئران. هذا الإجراء ليس مفيدا فقط في الكشف عن الإعاقة العصبية التدريجية في نموذج فيروس ثيلر ، ولكنه مفيد أيضا في الكشف عن الضعف في نماذج الفئران الأخرى للأمراض التنكسية العصبية.