Name: تدفق تحليل Cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: تعلم تحديد عدد خلايا القاتل الطبيعي ومستويات تنشيطها السامة في عينات الدم البشري باستخدام تقنية التدفق الخلوي. هذه الطريقة السريعة والموثوقة تساعد الباحثين في دراسة الاستجابات المناعية بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا المشروع من قبل المنحة التنافسية لمبادرة أبحاث الزراعة والأغذية رقم 2100-68003-30395 من المعهد الوطني للأغذية والزراعة التابع لوزارة الزراعة الأمريكية.

<ol><li>Cerwenka, A., Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells%2C+viruses+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells, viruses and cancer.</a> Nat Rev Immunol. 1 (1), 41-49 (2001).</li>
<li>Nieman, D. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7883395">Exercise, infection, and immunity.</a> Int J Sports Med. 15, Suppl 3 131-141 (1994).</li>
<li>Romeo, J., Warnberg, J., Pozo, T., Marcos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+activity%2C+immunity+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nutr+Soc%22%5BJournal%5D)">Physical activity, immunity and infection.</a> Proc Nutr Soc. 69 (3), 390-399 (2010).</li>
<li>Nieman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marathon+training+and+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Marathon training and immune function.</a> Sports Med. 37 (4-5), 412-415 (2007).</li>
<li>Simpson, R. J., Kunz, H., Agha, N., Graff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+and+the+Regulation+of+Immune+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Exercise and the Regulation of Immune Functions.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 135, 355-380 (2015).</li>
<li>Walsh, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Position+statement.+Part+one%3A+Immune+function+and+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc+Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Position statement. Part one: Immune function and exercise.</a> Exerc Immunol Rev. 17, 6-63 (2011).</li>
<li>Timmons, B. W., Cieslak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+natural+killer+cell+subsets+and+acute+exercise%3A+a+brief+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc+Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human natural killer cell subsets and acute exercise: a brief review.</a> Exerc Immunol Rev. 14, 8-23 (2008).</li>
<li>Westermann, J., Pabst, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+lymphocyte+subsets+and+natural+killer+cells+in+the+human+body%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Investig%22%5BJournal%5D)">Distribution of lymphocyte subsets and natural killer cells in the human body.</a> Clin Investig. 70 (7), 539-544 (1992).</li>
<li>Boyum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+leucocytes+from+human+blood.+Further+observations.+Methylcellulose%2C+dextran%2C+and+ficoll+as+erythrocyteaggregating+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest+Suppl%22%5BJournal%5D)">Isolation of leucocytes from human blood. Further observations. Methylcellulose, dextran, and ficoll as erythrocyteaggregating agents.</a> Scand J Clin Lab Invest Suppl. 97, 31-50 (1968).</li>
<li>McMillan, R., Scott, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+labeling+with+51-Chromium.+I.+Technic+and+results+in+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukocyte labeling with 51-Chromium. I. Technic and results in normal subjects.</a> Blood. 32 (5), 738-754 (1968).</li>
<li>Berk, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+long+endurance+running+on+natural+killer+cells+in+marathoners%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">The effect of long endurance running on natural killer cells in marathoners.</a> Med Sci Sports Exerc. 22 (2), 207-212 (1990).</li>
<li>McAnulty, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blueberry+ingestion+on+natural+killer+cell+counts%2C+oxidative+stress%2C+and+inflammation+prior+to+and+after+2.5+h+of+running%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Effect of blueberry ingestion on natural killer cell counts, oxidative stress, and inflammation prior to and after 2.5 h of running.</a> Appl Physiol Nutr Metab. 36 (6), 976-984 (2011).</li>
<li>Millard, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+Exercise+Increases+Peripheral+Blood+NK+Cell+Counts+without+Immediate+Functional+Changes%2C+but+Impairs+their+Responses+to+ex+vivo+Stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Brief Exercise Increases Peripheral Blood NK Cell Counts without Immediate Functional Changes, but Impairs their Responses to ex vivo Stimulation.</a> Front Immunol. 4, 125(2013).</li>
<li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJaneway%2C+CA+%22Immunobiology%3A+The+Immune+System+in+Health+and+Disease.+5th+edn%22">Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. 5th edn</a>. , Garland Science. (2001).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الطريقة الموصوفة في هذه الدراسة يقيس بشكل مباشر على نشاط محدد من الخلايا القاتلة الطبيعية الفرد في الاستجابة للمؤثرات (في هذه الحالة بالذات، وممارسة لفترات طويلة). عادة، يتم عزل الخلايا القاتلة الطبيعية من دم واحد باستخدام تدرجات الكثافة أو الفرز الخلية باستخدام مزيج من علامات. في حين تستخدم هذه الأساليب على نطاق واسع، لديهم العديد من نقاط الضعف: أنها تستغرق وقتا طويلا، تنطوي على التلاعب متعددة، وتكون بشكل كبير الاستعمال يتوقف. ونتيجة لذلك، يتم وضع ضغوط لا داعي لها على الخلايا الق...

<html> الخلايا القاتلة الطبيعية تشكل عنصرا أساسيا من نظام المناعة الفطري. في حين أنها تنظم جدا، لديهم القدرة على التعرف والقضاء على الخلايا الشاذة من خلال الاتصال خلية الى خلية ودون تفعيل مسبق 1. على هذا النحو، فإنها تشكل خط سريع من الدفاع ضد الالتهابات. ممارسة، وخاصة مكثفة، وقد تبين لخفض عابر جهاز المناعة 2، 3، 4، 5. الخلايا القاتلة الطبيعية معرضة بشكل خاص لهذا الغرض 4، 6، 7، على نحو فعال خلق نافذة تعزيز حساسية للمرض. ومن هنا فإن دراسة التدخلات قبل أو أثناء أو بعد ممارسة التمرينات الرياضية بهدف الحد من تأثيرها على وظيفة الخلايا القاتلة الطبيعية هي ذات أهمية خاصة لرفاه الرياضيين بعد المسابقات. = &quot;jove_content&quot;&gt; ومع ذلك، معقد دراسة مثل هذه التدخلات من قبل العديد من العوامل: 1) الخلايا القاتلة الطبيعية هي متفرق 8، في حوالي 1٪ من مقصورة خلايا الدم البيضاء. 2) الخلايا القاتلة الطبيعية حساسة جدا للإجهاد وتعتمد على التعرض المستمر لظروف فسيولوجية لتبقى قابلة للحياة ومستقرة خلال التجريب. و3) فحوصات القياسية لتحديد NK الخلايا السمية الخلوية، مثل التدرجات Ficoll 9 والافراج عن المقايسات 10، لا يعول عليها وغير متناسقة. التنوع الكامن من العينات البشرية تفاقم فقط هذه القضايا. العينات البشرية الطازجة التي تم جمعها خلال التدخلات التنظيم إلى حد ما ويصعب الحصول، على الأقل بالمقارنة مع العينات الحيوانية أو خطوط الخلايا خلد. وهذا يقلل من فرص تكرار التجارب أو إضافة المشاركين في مجموعة الدراسة للوصول إلى عتبات ذات دلالة إحصائية. بشكل جماعي، ودعم هذه القضايا الحاجة إلى وجود بروتوكول مبسط يسمح FOص كل من الإنتاجية العالية وتحليل عالية الموثوقية من NK نشاط الخلايا التحللي في العينات البشرية. أنشأنا سير العمل الذي يقصر الوقت اللازم لتحديد وعزل الخلايا واختبار NK من الدم الكامل البشري مع تقليل التعرض لعوامل خارجية. الطريقة المثلى لاستخدام أداتين، فارز مقرها المغناطيسي خلية وتدفق التصوير الكريات، و، إلى أقصى حد T-فحص معين: نسبة E للسماح للكشف عن ارتفاعات أو انخفاضات NK الخلايا السمية الخلوية.

<table><tbody><tr><td>K-562 الخلايا الليمفاوية</td><td>ATCC</td><td>CCL-243</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Media</td><td>ATCC</td><td>30-2005</td><td>نسبة عالية من الجلوكوز ، مع L-Glutamine ، مع HEPES ،</td></tr><tr><td>Alpha Minimum Essential Medium</td> المعقم <td>ATCC</td><td>CRL-2407</td><td>بدون ريبونوكليوسيدات وديوكسي ريبونوكليوسيدات ولكن مع 2 ملي مولار L-glutamine و 1.5 جم / لتر بيكربونات الصوديوم</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution 0.4٪</td><td>Amresco</td><td>K940-100ML</td><td>حل</td></tr><tr><td>تلطيخ بروبريديوم يوديد</td> لزراعة الأنسجة <td>BD Pharmingen</td><td>51-66211E</td><td></td></tr><tr><td>Vybranto DiO حل وضع العلامات</td><td>على الخلايا Vybranto</td><td>V-22886</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Pro Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-545</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS تشغيل العازلة</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-221</td><td></td></tr><tr><td>عازلة الغسيل autoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-987</td><td></td></tr><tr><td>أعمدة autoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-021-101</td><td></td></tr><tr><td>الدم الكامل CD56 MicroBeads ، البشرية</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-875</td><td></td></tr><tr><td>ImageStream X Mark II مقياس التدفق الخلوي</td><td>للتصوير EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Speedbeads</td><td>Amnis Corporation</td><td>400030</td><td></td></tr><tr><td>0.4-0.7٪ هيبوكلوريت (معقم)</td> <td>VWR</td><td>JT9416-1</td><td></td></tr><tr><td>كولتر كلينز</td><td>بيكمان</td><td>كولتر 8546929</td><td></td></tr><tr><td>70٪ إيزوبروبانول (مزيل الفقاعات ) EMD</td> <td>Millipore</td><td>1.3704</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (سائل غمد) EMD</td> <td>Millipore</td><td>BSS-1006-B (1X)</td> <td>خال من الكالسيوم أو المغنيسيوم</td></tr><tr><td>برنامج INSPIRE</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>الإصدار Mark II ، سبتمبر 2013</td></tr><tr><td>برامج تطبيقات الأفكار</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>الإصدار 6.1 ، يوليو 2014</td></tr></tbody></table>

تدفق تحليل cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

NK الخلية السمسة هو مقياس يستخدم على نطاق واسع لتحديد تأثير التدخل الخارجي على وظيفة الخلايا القاتلة الطبيعية. ومع ذلك، فإن دقة واستنساخ هذا الاختبار يمكن اعتبار غير مستقر، سواء بسبب أخطاء المستخدم أو بسبب حساسية الخلايا القاتلة الطبيعية للتلاعب التجريبية. للقضاء على هذه القضايا، تم إنشاء سير العمل الذي يقلل منها إلى أدنى حد ويرد هنا. ولتوضيح ذلك، حصلنا على عينات من الدم، في نقاط زمنية مختلفة، من العدائين (ن = 4) التي قدمت لنوبة شديدة من ممارسة الرياضة. أولا، الخلايا القاتلة الطبيعية ويتم تحديد وقت واحد وعزل من خلال وضع علامات CD56 والفرز على أساس المغناطيسي، مباشرة من الدم الكامل ومن اقل من واحد ملليلتر. تتم إزالة الخلايا القاتلة الطبيعية فرزها في أي كاشف أو متوجا الأجسام المضادة. ويمكن عدها من أجل إقامة دقيق NK عدد خلايا في كل ملليلتر من الدم. ثانيا، الخلايا القاتلة الطبيعية فرزها (المستجيبات الخلايا أو E) يمكن أن تكون مختلطة مع 3،3&#39;-Diotadecyloxacarbocyanine البركلورات (ديو) الموسومة خلايا K562 (الخلايا المستهدفة أو تي) في ل1-فحص الأمثل: 5 T: نسبة E، وتحليلها باستخدام التصوير تدفق الكريات التي تسمح لتصور كل حدث والقضاء على أي إيجابية كاذبة أو السلبيات كاذبة (مثل الحلل أو خلايا المستجيب). ويمكن الانتهاء من هذا العمل في حوالي 4 ساعات، ويسمح للحصول على نتائج مستقرة جدا حتى عند التعامل مع العينات البشرية. عندما تكون متاحة، يمكن للفرق البحثية اختبار عدة تدخلات التجريبية في المواد البشرية، ومقارنة القياسات عبر عدة نقاط وقت دون التأثير على سلامة البيانات و.

تحديد عدد الخلايا القاتلة الطبيعية وقد تم قياس تأثير تشغيل ثقيلا على عدد الخلايا القاتلة الطبيعية في الدم الكامل، وذلك باستخدام بروتوكول ممارسة موضح في الشكل (2). تم سحب عينات من الدم قبل ممارسة، وعلى الفور بعد ممارسة الرياضة، و 1.5 ساعة بعد التمرين، وأخيرا 24 و 48 ساعة بعد التعادل الدم الأولي. وقد تم قياس تركيز الخلايا القاتلة الطبيعية لكل مليلتر من الدم الكامل لكل عداء (الشكل 3A) وفي المتوسط (الشكل 3...

يصف هذا العمل سير عمل متقدما لتحديد دقيق وسريع لعدد خلايا NK (القاتل الطبيعي) وسمية الخلايا الطبيعية في عينات الدم البشري.

تدفق تحليل Cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

الهدف العام من هذه التجربة هو تحديد عدد الخلايا القاتلة الطبيعية ومستويات التنشيط السامة للخلايا في عينة دم بشرية كاملة بطريقة سريعة وموثوقة ومستقرة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة في المجالات المناعية ، مثل ، ما هي آثار التدخلات الخارجية على النشاط الحيوي للخلايا القاتلة الطبيعية؟ الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سريعة ودقيقة ، مع الاستمرار في تقديم نتائج قابلة للتكرار عبر التجارب.لعزل الخلايا القاتلة الطبيعية من الدم البشري الكامل ، ضع أولا أنابيب 15 ملليلتر تحمل علامة عينة الدم الكامل والكسر السالب والكسر الموجب في المواضع المناسبة في رف أنبوب فاصل الخلية. عند تحميل جميع الأنابيب ، أدخل رف الفاصل على جهاز أخذ العينات الصغير لوضع العلامات التلقائي ، وحدد الكاشف في القائمة ، لتمييز الموضع الذي سيتم وضع القارورة فيه على الرف. حدد قراءة الكاشف لتنشيط قارئ التعليمات البرمجية ثنائية الأبعاد وحمل قارورة الكاشف المناسبة أمام قارئ التعليمات البرمجية ثنائية الأبعاد بزاوية 0.5 إلى 2.5 سم من غطاء قارئ التعليمات البرمجية.ضع قارورة القراءة في موضع رف الفاصل المناسب. بعد ذلك ، ضمن علامة التبويب الفصل ، قم بتمييز المواضع المطلوبة. ثم افتح القائمة الفرعية التسمية وحدد برنامج التسمية التلقائية.قم بتعيين ميكروبيدات كاشف فصل الخلية إلى مواضع الرف 1 و 2 و 3 و 4. وحدد برنامج Posselwb separaton. حدد برنامج شطف الغسيل.أدخل 1500 ميكرولتر لحجم العينة ضمن القائمة الفرعية مستوى الصوت، واضغط على Enter. ثم انقر فوق تشغيل لبدء فصل الخلية. انقر فوق موافق للتأكد من توفر مخزن مؤقت كاف لمعالجة جميع العينات.لتحضير عينة فحص السمية الخلوية ، قم أولا بتسمية أنابيب 1.5 ملليلتر لكل عينة و / أو مشارك حسب الاقتضاء ، وقم بإخراج النسبة المطلوبة من الخلايا القاتلة الطبيعية وخلايا K562 المسماة DIO في كل أنبوب. اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، وقم بإزالة المادة الطافية بعناية دون إزعاج حبيبات الخلية. بعد ذلك ، أعد تعليق خليط الخلية في 500 ميكرولتر من وسط الخلية القاتلة الطبيعية غير المكتمل ، وقم بتسمية الخلايا الموجودة في كل أنبوب ب 5 ميكرولتر من يوديد البروبيديوم.اجمع الخلايا عن طريق طرد مركزي آخر ، واحتضان ثقافة الإعدام عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. في نهاية الحضانة ، قم بالطرد المركزي للخلايا في نفس ظروف الطرد المركزي ، وأعد تعليق الحبيبات في 25 ميكرولترا من وسط زراعة الخلايا القاتلة الطبيعية الطازجة غير المكتملة. لتحليل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي ، انقر أولا فوق زر بدء التشغيل في برنامج مقياس التدفق الخلوي للتصوير لتنظيف النظام.بعد ذلك ، انقر فوق زر المخطط المبعثر لإنشاء أربع مخططات مبعثرة ، وقم بتحميل أنبوب التحكم الإيجابي المزدوج. باستخدام عينة التحكم الإيجابية المزدوجة ، حدد الكثافة المطلوبة لليزر 405 مللي واط ، بحيث لا يتم تحميل الكاشف بشكل زائد ، واضبط جهاز التصوير للحصول على العدد المناسب من عدد الخلايا. سيتطلب ضبط ليزر 405 مللي واط بكثافة مناسبة للكشف عن كل من DIO و PI خبرة في كل من الأصباغ ونطاق الكشف عن مقياس التدفق الخلوي.بعد انتهاء الحصول على عينة التحكم الإيجابية المزدوجة ، قم بتحميل عينة التحكم في DIO فقط ، وحدد هدف 40X ، وقم بإيقاف تشغيل ليزر 642 مللي واط وقناة Brightfield. قم بتربية العدد المناسب من الخلايا وكرر عملية الاستحواذ على عينة يوديد البروبيديوم فقط. عند تشغيل جميع عينات التحكم، قم بتشغيل الليزر 405 مللي واط وقناة Brightfield، وأعد تشغيلها، وانقر فوق تعيين الكثافة.بعد ذلك، ضمن علامة التبويب "الحصول على الملفات"، أدخل اسم ملف مخصصا، وحدد مجلدا لحفظ ملفات البيانات. بعد ذلك ، أدخل عدد الخلايا التي تريد الحصول عليها. قم بتحميل أنبوب العينة التجريبي الأول وانقر فوق الزر Acquire.عند تشغيل جميع العينات، افتح تطبيق برنامج تحليل مقياس التدفق الخلوي للتصوير، وافتح ملف RIF تجريبي واحد. ضمن علامة تبويب التعويض، حدد إنشاء مصفوفة جديدة. سيطالب البرنامج باختيار ملفات اللون الفردي ، ودمجها لإنشاء ملف مصفوفة ليتم تحديده لتطبيق تعويض القناة.استخدم الدالة Building Blocks لإعداد المخططات النقطية المناسبة. ثم انقر فوق وظيفة الإحصائيات للوصول إلى أرقام الخلايا في كل بوابة. في هذه التجربة التمثيلية ، تم سحب عينات الدم كما هو موضح وتم قياس تركيز الخلايا القاتلة الطبيعية لكل مليلتر من الدم الكامل لكل عداء ، وفي المتوسط لكل نقطة زمنية.قدم ثلاثة من كل أربعة عدائين زيادة طفيفة مماثلة في عدد الخلايا القاتلة الطبيعية بعد التمرين. يليه مباشرة انخفاض حاد ، قبل العودة ببطء إلى طبيعته ، بعد 24 إلى 48 ساعة من نهاية الحدث. في المتوسط ، انخفض عدد الخلايا القاتلة الطبيعية بعد 1.5 ساعة من التمرين ، لكنه عاد إلى المستويات القريبة من المستويات الطبيعية بعد 24 ساعة.بعد حساب عدد الخلايا ، تم تحليل النشاط السام للخلايا للخلايا القاتلة الطبيعية على الفور كما هو موضح للتو ، مع انخفاض متوسط في السمية الخلوية للخلايا القاتلة الطبيعية على الفور ، وبعد 1.5 ساعة من إنهاء حدث التمرين ، زاد ذلك بشكل ملحوظ بمقدار 24 ساعة بعد التمرين. ظلت السمية الخلوية NK مرتفعة مقارنة بمستويات ما قبل التمرين ، وإن كان ذلك بشكل غير ملحوظ. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في حوالي أربع ساعات عند إجراؤها بشكل صحيح.بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الحصول على عدد الخلايا القاتلة الطبيعية والنشاط السام للخلايا من عينات الدم البشري ووصفها بطريقة مائية قابلة للتكرار.

flow-cytometric-analysis-natural-killer-cell-lytic-activity-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يوضح هذا الفيديو النشاط اللايتي للخلايا القاتلة الطبيعية ضد الخلايا المستهدفة الملطخة بالفلورسنت. تتيح هذه الطريقة قياس السمية الخلوية التي تسببها الخلايا القاتلة الطبيعية عن طريق تلطيخ الخلايا الميتة واستخدام مقياس التدفق الخلوي لتحديد الخلايا المستهدفة الحية والميتة.

تحضير عينة فحص السمية الخلوية بوساطة الخلايا القاتلة الطبيعية لتحليل قياس التدفق الخلوي

يوضح هذا الفيديو إجراء اختبار إطلاق نازعة هيدروجين اللاكتات لتحديد السمية الخلوية للخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ضد الخلايا السرطانية المستهدفة. يحدد الاختبار إطلاق إنزيم نازعة هيدروجين اللاكتات السيتوبلازمي من الخلايا السرطانية عن طريق قياس امتصاص المنتج ذو اللون الأحمر المتكون.

اختبار في المختبر لتقييم السمية الخلوية للخلايا القاتلة الطبيعية ضد الخلايا السرطانية

يصف هذا البروتوكول مقايسة السمية الخلوية الحساسة القائمة على الخلية. من خلال تعداد الانخفاض في تواتر الخلايا التائية CD4 + المستهدفة الحية في وجود عدد متزايد من الخلايا التائية المستجيبة CD8 + ، يسمح هذا الاختبار بالتقييم المباشر للنشاط المحلل للخلايا CD8 + T الخاصة بالمستضد.

مقايسة قياس التدفق الخلوي القائم على الخلايا لقياس النشاط السام للخلايا

وصفت وهناك طريقة بسيطة وموثوق بها هنا لتحليل مجموعة من وظائف الخلايا القاتلة الطبيعية مثل تحبب، خلوى والإنتاج chemokine ضمن مختلف مجموعات فرعية الخلايا القاتلة الطبيعية.

الفحص التدفق الخلوي استنادا لمراقبة وظائف الخلايا القاتلة الطبيعية

ويرد هنا تدفق الخلوي طريقة لتحديد الكمية نشاط السامة للخلايا من الخلايا القاتلة الطبيعية البشرية.

تحليل القائم على الخلوي سيتوتوكسيسيتي تدفق لتقييم نشاط الخلايا البشرية ناغورني-كاراباخ

التهرب من القاتل الطبيعي (NK) القضاء على الخلايا بوساطة الخلايا السرطانية مهم لبدء السرطان والتقدم. هنا، نقدم بروتوكولين غير قائمين على النشاط الإشعاعي لتقييم السمية الخلوية بوساطة NK تجاه خلايا الورم الكبدي. بالإضافة إلى ذلك، يتم تقديم بروتوكول ثالث لتحليل ترحيل خلية NK.

قياس السمية الخلوية بوساطة الخلية القاتلة الطبيعية والهجرة في سياق خلايا الورم الكبدي

ويرد هنا وصف بروتوكول لدراسة الأحداث التي تحركها FcγRIIIa من قبل الأجسام المضادة العلاجية في الخلايا القاتلة الطبيعية البشرية. تسمح منصة التحفيز الاصطناعي هذه باستجواب وظائف التأثير المصبي مثل إزالة التجريح ، وإنتاج chemokine / cytokine ، ومسارات الإشارات بوساطة أجزاء FcγRIIIa و Fc من الأجسام المضادة المشاركة في الربط.

تقييم أحداث الخلايا القاتلة الطبيعية البشرية مدفوعة بمشاركة FcγRIIIa في وجود أجسام مضادة علاجية

في هذه الورقة، نحن وصف طريقة لقياس تحلل التحلل والتنفس الميتوكوندريا في الإنسان الرئيسي القاتل الطبيعي (NK) الخلايا المعزولة من الدم المحيطي، في بقية أو بعد تنشيط الناجمة عن IL15. يمكن تمديد البروتوكول الموصوف بسهولة إلى خلايا NK البشرية الأولية التي يتم تنشيطها بواسطة السيتوكينات الأخرى أو المحفزات القابلة للذوبان.

تحليل استقلاب الخلايا القاتلة الطبيعية البشرية

يصف هذا البروتوكول طريقة خالية من الملصقات للتحليل السريع لخلية واحدة لعدد الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ونشاطها باستخدام تقنية تصوير الظل الخالية من العدسة. تحدد هذه الطريقة التغيرات المورفولوجية في خلايا NK الفردية عن طريق التحليل المحوسب لأنماط حيودها.

منصة تصوير خالية من العدسات قابلة للنشر الميداني لتحليل سريع خال من الملصقات لتنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية

يوفر هذا البروتوكول سير عمل موحد في المختبر لقياس متسق للسمية الخلوية الطبيعية التي تعتمد على مستقبلات المستضدات الكيميرية والمعتمدة على الأجسام المضادة لخلايا القاتل الطبيعية البشرية باستخدام تصوير الخلايا الحية وقياس تدفق الخلية.

قياس سمية الخلايا غير السرطانية التي تعزز بواسطة مستقبلات المستضدات الكيميرية والأجسام المضادة العلاجية باستخدام تصوير الخلايا الحية وقياس خلوية التدفق

تعلم تحديد عدد خلايا القاتل الطبيعي ومستويات تنشيطها السامة في عينات الدم البشري باستخدام تقنية التدفق الخلوي. هذه الطريقة السريعة والموثوقة تساعد الباحثين في دراسة الاستجابات المناعية بدقة عالية.

تدفق تحليل Cytometric من القاتل الطبيعي خلية التحللي آخر في الدم الجامع البشري

استكشف المزيد من الفيديوهات