دراسة الجمعية proteasome ومع المؤتلف Archaeal جسيم بروتيني وNondenaturing الصفحة: حالة لنهج موحد

يستخدم هذا البروتوكول كل من coexpression الوحيدات وحدة فرعية postlysis خلط لإجراء فحص أكثر دقة التجمع proteasome والمؤتلف.

الهدف العام من هذه التجربة هو تحليل تجميع مركب متعدد البروتينات مثل البروتيازوم ، باستخدام وحدات فرعية مؤتلفة ، ورحلان كهربائي لهلام بولي أكريلاميد غير المتمم ، أو PAGE. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال البروتيازوم مثل الأنواع الوسيطة التي تتم مواجهتها على طول مسار تجميع مركب البروتين هذا. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بالفحص السريع للتجميع من خلال طريقتين متوازيتين ، مما يسمح بالكشف عن المواد الوسيطة داخل وخارج المسار. يبدأ هذا الإجراء بالتعبير البكتيري كما هو موضح في بروتوكول النص. لإجراء التحلل البكتيري ، قم بإذابة منصة الخلية المستحثة التي تعبر عن التركيبة المطلوبة من وحدات البروتيازوم الفرعية ، على الجليد لمدة خمس دقائق. بمجرد إذابتها ، أعد تعليق البليت في 600 ميكرولتر من Lysis Buffer.احتضان التعليق عند 30