كولون-26 سرطان الفأر نموذجا لدراسة سرطان دنف الحاملة للورم

تتمثل الأهداف العامة لهذا البروتوكول في تنفيذ نموذج القولون 26 في الجسم الحي في قصر قابل للتكرار ، والتحقيق بشكل صحيح في هزال العضلات التدريجي وضعفه الذي يحدث بالاقتران مع نمو الورم. يمكن أن يساعد هذا النموذج في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال دنف السرطان حول فقدان العضلات الناجم عن الورم ، وضعف العضلات ، وزيادة تقويض العضلات ، ومستويات السيتوكين المفرطة في الالتهاب. الميزة الرئيسية لهذا النموذج التجريبي هي أن التغيير يتوافق مع النمط الظاهري المؤقت، يمكن أن يبدأ بسهولة في قصر يعتمد على الوقت مع زيادة شدة الهزال.

سيظهر هذه الإجراءات رافائيل باريتو ، فني من مختبري ، وجوزيف روبرت ، طالب دكتوراه من مجموعة تيريزا زيمر. لزرع أورام C 26 ، استخدم حقنة أنسولين معقمة ملليمتر واحد ، ومجهزة بإبرة قياس 26 لحقن بسرعة مرة واحدة في 10 إلى الخلايا السادسة تحت الجلد وبين الكتف في منصات الدهون للأفراد والبالغين والقرص المضغوط اثنين من الفئران الواحدة. أعد إلى قفصها بعد حقن الورم مع المراقبة.

فحص الفئران وتسجيل أوزان أجسامها يوميا. عندما يصل فقدان وزن الجسم في مضيف الورم ، مقابل الضابطة ، إلى خمسة أو 10 أو 15٪ مقارنة بأوزان الجسم الأولية ، اسحب نقطة إلى نقطة خمسة ملليلتر من الدم عن طريق ثقب القلب ، ونقل عينات الدم الفردية إلى أنابيب EDTA فارغة سعة 18 ملليغرام من البوتاسيوم. ضع الأنابيب على الجليد حتى يتم جمع الدم بالكامل.

ثم ، قم بالطرد المركزي للعينات ، وجمع البلازما والمصل في نهاية الطرد المركزي. لتجنب المزيد من التلوث ، رش 70٪ من الإيثانول على الجسم بالكامل. ثم ضع على سرير تشريح في وضع الاستلقاء ، وقم بإرفاق أحد الأطراف الخلفية بمشبك سحاحة مرتفع لتمديد الطرف عموديا.

باستخدام ملقط دومون ، أمسك الجلد السطحي للطرف الخلفي واستخدم مقصا دقيقا منحنيا لإزالة الجلد واللفافة برفق ، مما يؤدي إلى تعريض بطون العضلات الأساسية للطرف السفلي. تحديد العضلة المعدية على الطرف السفلي الخلفي من خلال أصلها في اللقمة الجانبية والإنسية على عظم الفخذ الخلفي ، وإدخالها في العقبي ، قارورة الوتر العقبي. استخدم الملقط للإمساك بالطرف البعيد من المعدة وسحب بطن العضلات نحو أصلها.

بعد ذلك ، استخدم المقص لقطع العضلة في أصلها ، في أقرب وقت ممكن من عظم الفخذ ونقل العضلة إلى طبق موزن مسبقا. قم بوزن الطبق على الفور ، وانقل العضلة إلى أنبوب تبريد مسمى مسبقا. بعد ذلك ، حدد العضلة الأمامية للظنبوب من أصلها في السطح الأمامي الجانبي للظنبوب وإدخالها في الكتابة المسمارية الإنسية عبر الوتر البعيد.

بعد ذلك ، أمسك القدم من الأصابع بإصبع السبابة والإبهام ، وأدخل طرف ملقط دومون مباشرة تحت الوتر البعيد السطحي للظنبوب. حرك الملقط بحيث يمكن استخدام الجانب الحاد لفصل بطن عضلة الظنبوب عن النسيج الضام الأساسي ، واستخدم المقص المنحني الدقيق لقطع الوتر البعيد. ثم قم بقطع العضلات في الأصل ، في أقرب وقت ممكن من الساق.

عندما يتم جمع كل العضلات ، اغمر النصف السفلي من دورق بلاستيكي سعة 50 مليلتر يحتوي على الأيزوبنتان في النيتروجين السائل. عندما يصبح الأيزوبنتان لزجا قليلا ، مع بطانة صفائحية بيضاء صلبة مرئية داخل الدورق ، اسكب بضع قطرات من وسط التضمين على ظرف بعد ذلك ، التقط عضلة من الوتر ، ووضع نهاية العضلة الجديدة بعناية أعلى وسط التضمين.

أمسكها عموديا ، بالنسبة إلى الفلين. بعد ذلك ، مع الحفاظ على العضلات عمودية ، اغمس الظرف والعضلات المرفقة في حمام الأيزوبنتان لمدة سبع إلى 15 ثانية حتى يتم تجميد الأنسجة تماما. ستظهر العينة المجمدة جيدا باللون الأبيض الطباشيري.

بعد ذلك ، ضع العضلة في أنبوب عينة للتخزين الفوري عند سالب 80 درجة مئوية. للحفاظ على الحمض النووي الريبي والبنية الأنزيمية وعينات الظنبوب ، يلزم تجميد الأنسجة العضلية في أسرع وقت ممكن بعد استخراجها. لتقسيم الأنسجة العضلية المجمدة ، اضبط أولا درجة حرارة عمل غرفة Cryostat الداخلية على سالب 23 درجة مئوية.

اسمح للعينة سالبة 80 درجة مئوية بالتأقلم مع درجة حرارة العمل لبضع ساعات. بعد ذلك ، احصل على أقسام متعددة بسمك ثمانية ميكرون من العينة في منطقة البطن الوسطى من العضلات ، عموديا على محور التثبيت. جمع الأقسام على شرائح زجاجية بدرجة حرارة الغرفة أثناء قطعها.

احتفظ بالعينات داخل غرفة Cryostat حتى يتم جمع جميع الأقسام. بعد ذلك ، قم بتخزين العينات عند سالب 80 درجة مئوية حتى مزيد من التحليل. تظهر حركية نمو الورم C 26 مرحلة تأخر في الأيام السبعة إلى الثمانية الأولى بعد الحقن ، تليها نمو الخلايا الأسي لمدة أربعة إلى خمسة أيام.

حيث تصل كتلة الورم في النهاية إلى ما يقرب من 10٪ من وزن جسم. تبدو الفئران الحاملة للورم ضائعة وتظهر فروا أشعثا في نهاية الفترة التجريبية. مع انخفاض بنسبة 20 إلى 30٪ في وزن العضلات والهيكل العظمي.

ينخفض وزن عضلة القلب بشكل كبير. على الرغم من أنه بدرجة أقل مقارنة بالعضلات الأخرى. ومن المثير للاهتمام ، أن تضخم الكبد والورم الطحال يتم اكتشافهما بشكل عام في مضيفي الورم.

في حين أن كتلة الدهون ، على غرار كتلة العضلات والهيكل العظمي ، مستنفدة بشدة. يتوافق فقدان وزن العضلات الهيكلية أيضا مع انخفاض حجم ألياف العضلات ويتناسب معه. كما لوحظ من خلال التقييم المورفومتري المناعي للمناطق المقطعية للألياف العضلية.

على وجه الخصوص ، يوضح تحليل توزيع التردد تحولا نحو ألياف أصغر حجما في الفئران الحاملة C 26. مما يشير إلى أن العضلة بأكملها تخضع للضمور في وجود ورم C 26. يمكن أيضا ملاحظة نتائج مماثلة من خلال تحليل HNE.

على الرغم من أن حجم التغيير في منطقة المقطع العرضي للعضلات المرتبطة بنمو السرطان يختلف قليلا. يسمح الاستخدام السليم لنموذج C 26 بالتحقيق في الدنف المشتق من الورم. يشبه النموذج إلى حد كبير مرضا بشريا يظهر انخفاضا عاما في الكتلة بالإضافة إلى ضمور ألياف العضلات والالتهاب وفرط التقويض.

عند إجراء هذه التجربة ، يمكن تعديل سلالة ستة من الفئران ، ومصدر وعدد الخلايا السرطانية ، وموقع الزرع. يمكن أن تؤدي هذه التعديلات إلى اختلافات في النتائج المتوقعة. على الرغم من بعض القيود المعروفة ، مثل بيئة النمو غير الفسيولوجية ، والاعتماد على IL ستة عمل ، والاستخدام الضروري للفئران CD two F one أو Valve C ، فقد ساهم نموذج C 26 بشكل كبير في فهم الآليات الجزيئية للدنف الناجم عن السرطان.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تكرار نموذج دنف السرطان C 26 لدراسة هزال العضلات التدريجي والضعف الذي يحدث عادة ، بالتزامن مع تطور الورم. اعلم أن العمل مع نموذج C 26 يتطلب الإلمام بتقنيات التعامل المناسبة مع. يجب دائما استخدام أفضل الممارسات لتنفيذ هذا البروتوكول بأكبر قدر ممكن من الإنسانية.