Name: والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: تعلم حقن الوريد البابي لدراسة انبثاث سرطان الثدي في الكبد باستخدام نماذج الفئران المناعية. تتيح هذه التقنية استكشاف سلوك الخلايا السرطانية في الكبد بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أن يكرموا ألكسندرا كواكنبوش للمساعدة في العمليات الجراحية أثناء تصوير بروتوكول الفيديو ، وهادلي هولدن للدعم النسيجي ، وسونالي جيندال للمدخلات حول أمراض الورم والكبد أثناء تطوير الطريقة ، وبرينا كاروسو للمراجعة النقدية للمخطوطة. كانت خلايا ورم الثدي D2A1 و D2.OR هدية من الدكتورة آن تشامبرز ، وكانت خلايا الورم D2A1-GFP هدية من الدكتور جيفري جرين ، وكانت الخلايا السرطانية 4T1 هدية من الدكتور هايد فورد. تم استخدام قلب الفحص المجهري الضوئي المتقدم OHSU في مركز Jungers للتصوير. يتضمن العمل المدرج في هذه المخطوطة تمويلا من المعاهد الوطنية للصحة / NCI NRSA F31CA186524 (إلى ETG) و NIH / NCI 5R01CA169175 (إلى PS).

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه ولا يعلنون أنه لا توجد مصالح مالية متنافسة.

يسمح BALB / ج البوابة الماوس نموذج حقن الوريد دراسة الآفات السرطانية الثديية في الكبد في حالة عدم وجود التباس ورم خبيث الأعضاء المتعددة ومجموعة المختص المناعة بالكامل. بروتوكول لدينا هو النهوض العمليات الجراحية التي تم نشرها مسبقا التي تسمح بالوصول إلى الوريد البابي لحقن الخلايا السرطانية مباشرة إلى الكبد 16،55،56. واحد تقدم لدينا هي لخفض كبير في عدد الخلايا السرطانية حقن من ≥ 1 × 10 5 خلية / حقن 16،55،56 الى ≤ 10000 الخلايا السرطانية / الحقن. قمنا بتوسيع أيضا نموذجا للدراسة الانبثاث سرطان الثدي إلى الكبد. باستخدام هذا البروتوكول، واثنين من خطوط الخلايا السرطانية الثديية مع إمكانية النقيلي المعروفة تطوير الانبثاث الكبد مع الكمون أقصر من خط الخلايا السرطانية الثديية أكثر هامدة. وعلاوة على ذلك، في نقاط زمنية مبكرة، ويتم توزيع الخلايا السرطانية في جميع أنحاء لحمة الكبد كمجموعات واحدة أو صغيرة من اوربا واحدLLS بعد حقن الخلايا السرطانية. تستعد نموذج لمعالجة مسائل الكفاءة المنتشر بما في ذلك ورم الخلايا التسرب، بقاء الخلية، السكون، وانتشار - جميع الظواهر التي تساهم في تطوير المرض المنتشر الصغير المنتشر والعلني في الكبد. من المهم أن تنظر في جوانب عديدة من بروتوكول حقن الوريد البابي قبل بدء الدراسة. تقرر بعناية على خطوط الخلايا، وتركيز خلية، ومجموع عدد الخلايا، ونهاية النقاط المثيرة للاهتمام على أساس دراسات استكشافية أصغر ينصح بشدة. وعلاوة على ذلك، فإن استخدام الجنود المختصة المناعة، وخطوط الخلايا مسانج أمر في غاية الأهمية لفهم التفاعلات الخلية المضيفة للورم. وضعت حديثا &quot;متوهجة رئيس&quot; الماوس التي تعبر عن EGFP ووسيفيراز من الغدة النخامية الأمامية أداة هامة للقضاء على الردود تستضيف خارجي EGFP ووسيفيراز والبروتينات غالبا ما تستخدم لوضع علامة خطوط الثدي ورم 75 </sup&gt;. استخدام الماوس &quot;متوهجة الرأس&quot; ومسانج الموسومة سوف الخلايا السرطانية تسهيل سهولة التعرف على خلايا نشر واحدة وبؤر micrometastatic التي كتبها IHC دون القلق من الاستجابات الالتهابية إلى EGFP أو وسيفيراز. وبالمثل، واختيار استراتيجيات إدارة الألم بعناية لضمان الحد الأدنى المضادة أو تأثير المؤيدة للورم من نظام العلاج من تعاطي المخدرات ويوصى بشدة. وتشمل الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول الحفاظ على ظروف معقمة طوال العمليات الجراحية لضمان أن العدوى لا تحدث، حيث سيؤدي ذلك إلى إرباك أي نتائج. ومن المهم أيضا أن الإبرة وضعها بشكل صحيح في الوريد البابي للتأكد من أن الخلايا السرطانية يتم تسليم إلى الكبد. وسوف تمارس بروتوكول مع الأصباغ مثل الهند الحبر مساعدة في هذه المسألة. نمو الورم في موقع شق الجلد هو أفضل مؤشر على أن غير لائق إبرة التنسيب حدث. وأخيرا، فمن الأهمية بمكان أن فقدان الدم من الوريد البابي يتم التحكم بشكل كاف ويتوقف مسبق تماما لsuturiنانوغرام الحيوان. استخدام الشاش لوقف نزيف الدم يقلل كثيرا من خطر فقدان الدم غير المتحكم فيها من الوريد البابي بعد الحقن. في أيدينا، وخفض معدل وفيات الإجرائية ذات الصلة بسبب فقدان الدم من الوريد البابي حقن التالية من 30٪ إلى 2٪ من الفئران مع استخدام الشاش لوقف نزيف الدم. من المهم أن نلاحظ أن نموذج حقن الوريد البابي لا تكرار سلسلة النقيلي كاملة، ولكن يقتصر على دراسة تسرب الخلايا السرطانية، الورم التفاعلات خلية المتخصصة التالية التسرب ونمو الورم. النماذج التي تحاكي بدقة تتالي النقيلي كامل للكبد، مثلما يحدث في المرضى، وهناك حاجة ماسة. قيود إضافية من طراز حقن الوريد البابي هو أن مرتبك ذلك بسبب تأثير الجراحة على المضيف، مع التئام الجروح المعروف أن يؤثر تطور المرض 76،77. يمثل نموذج حقن الوريد البابي تحسنا على حقن الآخريننماذج لدراسة ورم خبيث في الكبد، بما في ذلك داخل القلب ونماذج داخل الطحال. على وجه التحديد، ونموذج حقن الوريد البابي يسمح لدراسة مجموعة أكبر من تطور المرض من النموذج داخل القلب، والتي غالبا ما تكون محدودة بواسطة الانبثاث مصاحبة في الأنسجة الأخرى. وعلاوة على ذلك، ليست معقدة نموذج الوريد البابي عن طريق إزالة الطحال، كما هو الحال في النموذج داخل الطحال. قد يكون نموذج حقن الوريد البابي أداة مفيدة لدراسة ورم خبيث في الكبد بشكل عام. الكبد ورم خبيث هو الموقع الأكثر شيوعا من ورم خبيث في الأورام الغدية بشكل عام، مع معدلات مرتفعة بشكل خاص في سرطان البنكرياس (85٪ من الانبثاث هي للكبد) والقولون وسرطانات الغدد الشرجية (&gt; 70٪)، وكذلك في المعدة والمريء (&gt; 30 ٪) 1. على الرغم من العفوية ومثلي نماذج ورم الأولية من سرطانات الغدد البنكرياس والقولون metastasize بسهولة أكبر إلى الكبد 78،79، قد الأقليم في الوريد البابي نموذج حقنالبريد مفيدا لفهم عملية النقيلي من هذه السرطانات كما التسليم المراقب من الخلايا السرطانية يسمح تقييمات بيوكيميائية، الجزيئية والنسيجية في أوقات محددة بعد وصوله الخلايا السرطانية. وخلاصة القول، يمثل نموذج حقن الوريد البابي تحسنا هاما على نماذج ورم خبيث في الكبد المتاحة من سرطان الثدي، ويمكن أيضا أن تكون قابلة للتطبيق في الميدان ورم خبيث في الكبد بشكل عام.

سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد الكبد هو موقع مشترك للالانبثاث سرطان الثدي، جنبا إلى جنب مع العظام والرئة 1-3. ورم خبيث في الكبد في المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي هو عامل النذير مستقل لنتائج سيئة للغاية 4،5، والبقاء على قيد الحياة وسيطة من مرضى سرطان الثدي مع نطاقات ورم خبيث في الكبد 4،8 حتي 15 شهرا 6-9. في المقابل، مرضى سرطان الثدي مع الرئة أو ورم خبيث العظام لديها معدلات البقاء على قيد الحياة وسيطة من 9 حتي 27،4 أشهر 8،9 و 16،3 حتي 56 شهرا 8،10-12، على التوالي. الانبثاث هي عملية متعددة الخطوات، ويشار إلى أن سلسلة النقيلي، والتي تبدأ مع نشر الخلايا السرطانية في الورم الرئيسي وينتهي فيات المرضى بسبب البذر وثمرة تعميم الخلايا السرطانية داخل الجهاز البعيد 13-15. وقد كشفت نماذج القوارض من ورم خبيث أن تتالي النقيلي غير فعالة بشكل ملحوظ، مع فقط 0.02 -٪ 10تعميم الخلايا السرطانية إنشاء الانبثاث العلني 16،17. وأملت واحد عنق الزجاجة الرئيسي لعدم الكفاءة المنتشر من قبل microenvironments الأنسجة فريدة في المواقع الثانوية، ودعا منافذ النقيلي 18، وتسليط الضوء على أهمية فهم ورم خبيث في مواقع محددة. مكانة المنتشر هي فريدة من نوعها لموقع تكرار، و، في جزء منه، تتميز ترسب متميزة البروتينات المصفوفة خارج الخلية 19،20، تسلل مختلف السكان الخلايا المناعية 21-23، وتوازن الأنسجة تغير بما في ذلك الإنتاج dysregulated العديد من السيتوكينات، كيموكينات، وعوامل النمو 15،18،24،25. وبالتالي، فهم من الأنسجة المتخصصة النقيلي محددة تسبق فهم كيفية استهداف المرض المنتشر. ومع ذلك، ونماذج قوية من ورم خبيث في الكبد ونقص. وعلاوة على ذلك، فإن نماذج محسنة من ورم خبيث في الكبد سيكون ضروريا لتحديد أهداف جديدة وعلاجات فعالة لمرضى سرطان الثدي وايالانبثاث الكبد عشر. أنشئت نماذج لدراسة سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد حاليا النماذج المتاحة لدراسة سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد تشمل xenografts الخلايا السرطانية البشرية في مأمن خطر الفئران. هذه النماذج عادة ما تستخدم مدروسة خطوط خلايا سرطان الثدي البشرية مثل MCF-7 و MDA-MB-231 و عاري، Rag1 - / -، أو في مأمن SCID خطر المضيفين الفئران 26-29. نماذج طعم أجنبي توفر ميزة تنطوي على خطوط الخلايا السرطانية البشرية المشتقة منها، ومع ذلك، وبالنظر إلى الارتفاع الأخير للخلايا المناعية في الانبثاث 30-32 وفي المقاومة العلاجية 33-35، ودراسة ورم خبيث في مجموعة مختصة المناعة بشكل كامل أمر بالغ الأهمية. وتشمل نماذج لدراسة سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد في المضيفين المختصة المناعة حقن مثلي من خلايا الورم مسانج (على سبيل المثال، 4T1 وخطوط الخلايا D2A1) في لوحة الدهون الثديية، مع أو بدون جراحةاستئصال الورم الرئيسي، وتقييم لاحق من ورم خبيث 36-38. وتجدر الإشارة، فإن معدل ورم خبيث في الكبد من نماذج زرع مثلي منخفضة جدا أو معدومة مقارنة بالمواقع النقيلي أخرى مثل الرئة 39،40، أو يحدث بعد إنشاء ورم خبيث في الرئة، مما يعقد دراسة الكبد محدد ورم خبيث 37،39 . إإكسبلنتس ورم من نماذج سرطان الثدي عفوية وراثيا يمكن إعادة حقن في منصات الدهون الثديية الجنود السذاجة كما الخلايا السرطانية مسانج. على سبيل المثال، أفيد مؤخرا أن الأورام عفوية من K14 لجنة المساواة العرقية ECAD و / و P53 و / الفئران F، النموذج الذي الغازية سرطان الثدي مفصص، وتطوير الأورام عند حقنه orthotopically إلى المضيفين wildtype. بعد استئصال الجراحي لهذه الأورام بمجرد وصولها إلى 15 مم 2، 18٪ من الفئران تقدمت إلى ورم خبيث في الكبد 40،41. وثمة نهج ثالث لنموذج متنفع ورم خبيث في الكبدالانبثاث عفوية في فئران معدلة وراثيا. حتى الآن، تقارير من نماذج الفئران عفوية من سرطان خبيث الثدي التي تنتشر بسهولة إلى الكبد ليست شائعة. وتشمل الاستثناءات H19-IGF2، والبروتين p53 FP / FP-MMTV لجنة المساواة العرقية الواب لجنة المساواة العرقية، وK14 لجنة المساواة العرقية ECAD و / و P53 و / و نماذج الماوس المعدلة وراثيا، حيث يتطور الانبثاث في كبد نسبة منخفضة من الفئران 38،41- 43. وهكذا، في حين تسهل نماذج الماوس المعدلة وراثيا دراسة جميع مراحل سلسلة النقيلي، وتوفير نماذج قوية وذات الصلة سريريا، فهي محدودة بسبب انخفاض معدلات ورم خبيث في الكبد 38. عدة نماذج ورم خبيث تجاوز الخطوات الأولى من سلسلة النقيلي بما في ذلك نشر الخلايا السرطانية من الورم الرئيسي ودخول الوعاء. تسمح هذه النماذج التحقيق في خطوات لاحقة من تتالي النقيلي، من التسرب إلى إنشاء الأورام في مواقع الثانوية. كثافة العملياتracardiac نموذج حقن يسلم الخلايا السرطانية في البطين الأيسر، التي توزع الخلايا السرطانية في الدورة الدموية عن طريق الشريان الأورطي. حقن داخل القلب يتطلب الموجات فوق الصوتية الموجهة التصوير من موقع الحقن أو طرائق التصوير الأخرى مثل تلألؤ بيولوجي من وسيفيراز الموسومة خلايا لتأكيد نجاح الحقن. ورم حقن الخلايا عن طريق البطين الأيسر قد يؤدي في العظام والمخ والرئة، و / أو ورم خبيث في الكبد، من بين غيرها من الأجهزة 44-48. بسبب الانبثاث الأعضاء المتعددة، تحتاج هذه الفئران في كثير من الأحيان إلى أن يتم التخلص قبل تطور ورم خبيث في الكبد العلني، يلغي القدرة على تحقيق كامل النمو المنتشر داخل الكبد. نهج بديل أن يقلل إلى حد كبير من نمو الانبثاث في مواقع متعددة هو نموذج حقن داخل الطحال. حقن داخل الطحال يسلم الخلايا السرطانية عن طريق الوريد الطحال أن تنضم إلى الوريد المساريقي العلوي ليصبح الوريد البابي 49،50. يمكن رصد الحيوانات لoutgrowth الآفات المنتشر في الكبد لتشكيل الانبثاث في مواقع أخرى أمر نادر الحدوث، ونتيجة لذلك، يتم الحفاظ على الصحة العامة للحيوان 49،50. ومع ذلك، فمن المهم أن نلاحظ أن هذا النموذج داخل الطحال يتطلب استئصال الطحال لتجنب أورام الطحال 49،50، وهو الإجراء الذي آثار الوظيفة المناعية. على سبيل المثال، تتميز عضلة القلب إصابة نقص التروية ضخه نتيجة لتسلل مجموعات فرعية الوحيدات Ly6C + التي تنشأ من الطحال وهي المسؤولة عن أكلة والنشاط بروتين أثناء التئام الجروح بعد نقص التروية 51،52. مع استئصال الطحال، هناك انخفاض الملحوظ في أعداد الوحيدات التي تساعد في التئام الجروح 52. وعلاوة على ذلك، وقد تبين استئصال الطحال للحد من نمو الورم الرئيسي والانبثاث الرئة في نموذج سرطان غير زنزانة صغيرة في الرئة، وتحديدا من خلال تخفيض في عدد من تعميم وداخل الورم CCR2 + CD11b + Ly6C + myelo الوحيداتخلايا معرف 53. بالإضافة إلى ذلك، أدى استئصال الطحال بعد الحقن داخل الطحال خلايا سرطان القولون في انخفاض مستويات المضادة للورم الخلايا القاتلة الطبيعية في العقد الليمفاوية المساريقي وارتفاع ورم خبيث في الكبد 54. وباختصار، تشير هذه النتائج إلى أن استئصال الطحال يقوض دور الجهاز المناعي مع العواقب اللاحقة لمصير خلية النقيلي. الوريد البابي نموذج حقن الكبد الانبثاث للتحقيق في سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد في مجموعة مختصة المناعة بشكل كامل، في ظل ظروف حيث لا خطر الفئران بسبب الانبثاث الأعضاء المتعددة، وقد تم تطوير نموذج حقن الوريد البابي. وقد استخدمت نماذج حقن Intraportal سابقا لدراسة ورم خبيث في الكبد من القولون والمستقيم 55،56 وسرطان الجلد 16 خطوط الخلايا. ونحن هنا وصف تطبيق حقن intraportal لنموذج مسانج الثدي ورم خبيث الخلايا السرطانية. هذا النموذج يمكن استخدامها لدراسةفي مراحل لاحقة من تتالي النقيلي بما في ذلك سرطان الثدي تسرب الخلايا والبذر، ورم القرارات مصير الخلية بشأن وفاة / انتشار / السكون، وثمرة في الآفات العلنية. في هذا النموذج، يتم حقن مسانج خطوط الخلايا السرطانية الثديية عبر الوريد البابي من المناعة أنثى الفئران BALB / ج المختصة، وهي طريقة من شأنها أن توفر الخلايا السرطانية أولا ومباشرة إلى الكبد دون إزالة الطحال. لتطوير هذا النموذج، واستخدام أربعة خطوط الخلايا السرطانية الثديية التي تتراوح في قدرتها النقيلي من الأعلى إلى الأقل كانوا يعملون: D2.OR، D2A1، و4T1، وقد استخدمت D2A1 ذات الكلمات الدلالية مع الأخضر بروتين فلوري (D2A1-GFP) ل التحقيق في وقت مبكر وقت نقاط بعد حقن الخلايا السرطانية. 4T1 هو خط خلية المنتشر عالية مستمدة من ورم 410.4 التي نشأت عفويا في MMTV + BALB / ج الإناث الماوس 36،37 ومستطير إلى الرئتين والكبد والدماغ والعظام من الثدي وسادة دهنية الأورام الأولية 39،57،58. الخلايا السرطانية D2A1 وره أيضا مستمدة في الأصل من ورم الثدي عفوية تنشأ في BALB / ج المضيف بعد زرع الخلايا D2 العقيدات السنخية المفرطة التصنع، وأكد أن النقيلي من الورم الأساسي إلى الرئة 59،60. الخلايا السرطانية D2.OR هي خط أخت غير المنتشر إلى خط D2A1 و، على الرغم من أنها الهروب من الورم الرئيسي والتوصل إلى المواقع الثانوية، فإنها نادرا إنشاء الانبثاث بعيدة 60،61. بالإضافة إلى ذلك، فمن المهم تجنب استخدام العقاقير إدارة الألم استخداما بما في ذلك العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات (المسكنات) أثناء أو بعد العملية الجراحية. المسكنات لها النشاط المضادة للورم في بعض سرطانات الثدي 62-65، وبعض الفئات من المسكنات تزيد من خطر تسمم الكبد 66،67، يحتمل المساومة على دراسة ورم خبيث في الكبد ومكانة النقيلي الكبد. وعلاوة على ذلك، تشير الدراسات إلى أن المسكنات تؤثر تأثيرا مباشرا على المكروية الأنسجة، والحد من تحويلة الموالية للالنقيليالبروتينات مصفوفة racellular tenascin-C 68 و ييفي الكولاجين 62،65. بدلا من ذلك، استخدام أحد مشتقات المواد الأفيونية، البوبرينورفين، تم استخدامها بسبب فعاليته في إدارة الألم القوارض 69، ونظرا لعدم وجود دليل على أن المواد الأفيونية لها نشاط مضاد للورم 70. تم تحسين هذا النموذج حقن الوريد البابي لحقن كميات صغيرة من 5-10 ميكرولتر لتجنب أضرار لا داعي لها للكبد. وكان محسن نموذج أيضا لتشمل الإبر مع قطر أصغر (≥ 32 مقياس) واستخدام الشاش لوقف نزيف الدم مباشرة بعد الحقن لتقليل فقدان الدم أثناء العملية. وعلى النقيض من هذه المعلمات حقن الأمثل، ينبغي تحديد أرقام الخلية على أساس فردي، استنادا إلى إمكانية مكون للأورام من خط الخلية. ومع ذلك، ابتداء من الساعة ≤ 10000 خلية / حقن للدراسات طويلة الأجل الموصى بها. بالنسبة لنهايات أقصر (على سبيل المثال، 24 ساعة بعد الحقن) أكبر بكثير من الخلايا السرطانية (على سبيل المثال،1 × 05-01 أكتوبر × 10 6) يمكن استخدامها إذا اقتضى الأمر. وباختصار، فإن نموذج حقن الوريد البابي مفصلة هنا يمثل أداة مفيدة لدراسة الانبثاث سرطان الثدي إلى الكبد وتلتف على عدد من أوجه القصور في نماذج ورم خبيث في الكبد الأخرى. يسهل هذا النموذج دراسة تسرب الخلايا السرطانية وزرع البذور، والقرارات مصير الأولى من البقاء على قيد الحياة، وانتشار، والسكون، وثمرة المنتشر في المضيفين الفئران المختصة المناعي.

<table><tbody><tr><td>1 مل حقنة مع 26 قياس إبرة</td><td>BD حقنة</td><td>309597</td><td>لحقن البوبرينورفين تحت الجلد ؛ توخي الحذر ،</td></tr><tr><td>وسادات تحضير الكحول</td> الحادة <td>فيشر Scientific</td><td>06-669-62</td><td>لتنظيف البطن قبل الشق</td></tr><tr><td>الجراحي إسفنج لجميع الأغراض ، معقم</td><td>كيندال</td><td>8044</td><td>4 "× 4" ، استخدم مغموسة في محلول ملحي معقم للحفاظ على الأمعاء الغليظة والدقيقة محمية وترطيبها أثناء جراحة</td></tr><tr><td>الدموع الاصطناعية</td><td>الرجبي</td><td>370114</td><td>زيت معدني 15٪ ، الفازلين الأبيض 83٪ ؛ يستخدم لحماية العينين أثناء الجراحة</td></tr><tr><td>بوبرينورفين هيدروكلورايد ، 0.3 مجم / مل</td><td>Mfg. بواسطة ريكيت بينكيزر</td><td>NDC-12496-0757-1</td><td>استخدم عند 0.05 - 0.1 مجم / كجم من وزن الجسم ، 1 - 2x يوميا لمدة 72 ساعة ، يحقن تحت الجلد</td></tr><tr><td>بوبيفاكائين هيدروكلورايد ، 0.5٪ (5 مجم / مل)</td> <td>Mfg. بواسطة Humira Inc</td><td>NDC-04091163-01</td><td>استخدم بنسبة 0.5٪ ، 1x مباشرة بعد الجراحة ، 10 مو ؛ ل حقن تحت الجلد في موقع الشق &nbsp ؛</td></tr><tr><td>الأجسام المضادة المضادة ل CD45</td><td>BD Pharmingen</td><td>550539</td><td>تستخدم في التألق المناعي متعدد الإرسال لاستبعاد الكريات البيض في تحديد البؤر النقيلية</td></tr><tr><td>Celox & trade ؛ شاش مرقئ سريع</td><td>Medtrade المنتجات المحدودة</td><td>FG08839011</td><td>قطع إلى 5 مم & sup2 ؛ قطع ، تستخدم لوقف تدفق الدم من الوريد البابي مع الضغط بعد الحقن</td></tr><tr><td>إزالة الشعر</td><td></td><td></td> الكيميائية <td>استخدام لإزالة الشعر من منطقة الجراحة ؛ موردين متعددين</td></tr><tr><td>الكلورهيكسيدين ، 2٪ محلول</td><td>Vet One</td><td>1CHL008</td><td>توخي الحذر ، لا تحصل على الكلورهيكسيدين في الأغشية المخاطية أو آذان الفأر</td></tr><tr><td>الأجسام المضادة للجسم المضاد CK18</td><td>Abcam</td><td>ab53118</td><td>استخدم في التألق المناعي متعدد الإرسال لتحديد البؤر النقيلية</td></tr><tr><td>أدوات تطبيق القطن ذات الرؤوس ، معقم</td><td>فيشر Scientific</td><td>23-400-114</td><td>6 "عمود خشبي 2 قطعة / مغلف</td></tr><tr><td>DMEM ، قاعدة</td> وسائط <td>ثقافة الخلية عالية</td> الجلوكوز <td>HyClone SH30243.01</td><td>للاستخدام مع خطوط خلايا الورم الثديي D2A1 و D2.OR و 4T1</td></tr><tr><td>معقم</td><td></td><td></td> <td>حبة زجاجية جافةاستخدم بين العمليات الجراحية لتعقيم أدوات الفولاذ المقاوم للصدأ ، وتوخي الحذر ، والساخن للغاية ؛ موردين متعددين</td></tr><tr><td>الإيثانول ، محلول</td><td></td><td></td> 70٪ <td>استخدم الحذر القابل للاشتعال ؛ استخدم لتنظيف المنطقة الجراحية حسب الحاجة ؛ موردين متعددين</td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني</td><td>HyClone</td><td>SH30071.03</td><td>مادة مضافة لوسائط زراعة الخلايا للاستخدام مع خطوط خلايا الورم الثديي D2A1 و D2.OR و 4T1 ، استخدم بنسبة 10٪ في شاش الجلوكوز العالي DMEM</td></tr><tr><td>، معقم</td><td>كيندال</td><td>2146</td><td>2 "× 2" ، استخدم مغموسة في محلول الكلورهيكسيدين 2٪ لتنظيف البطن قبل الشق الجراحي</td></tr><tr><td>المضاد للأجسام المضادة للبروتين الفلوري الأخضر</td><td>مختبرات ناقلات</td><td>BA0702</td><td>استخدم لصبغة GFP الموسومة D2A1 أو خطوط خلايا ورم الثدي الأخرى</td></tr><tr><td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td> <td>Gibco</td><td>25030-081</td> مادة <td>مضافة لوسائط زراعة الخلايا للاستخدام مع خطوط خلايا ورم الثدي D2A1 و D2.OR و 4T1 ، استخدم عند 2 ملي مولار (1x) في وسادة تسخين الجلوكوز العالية DMEM</td></tr><tr><td>، × 2 - 3</td><td></td><td></td><td>تستخدم للحفاظ على حرارة الجسم أثناء الجراحة والتعافي ؛ موردين متعددين</td></tr> مقياس <tr><td>الدم</td><td>Hausser Scientific</td><td>1483</td><td>للاستخدام في زراعة الخلايا لحساب الخلايا</td></tr><tr><td>ملقط</td><td></td><td></td> مرقئ <td>الفولاذ المقاوم للصدأ ؛ موردين متعددين</td></tr><tr><td>مضاد للجسم المضاد للهيبار-1</td><td>داكو</td><td>M7158</td><td>استخدام في التألق المناعي متعدد الإرسال لاستبعاد خلايا الكبد في تحديد البؤر النقيلية</td></tr><tr><td>حقنة الأنسولين ، 0.3 مل ، 29 مقياس</td><td>BD & nbsp ؛ &nbsp;</td><td>324702</td><td>لحقن بوبيفاكائين في موقع الخياطة ؛ توخي الحذر ، حاد</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal</td><td>NDC-66794-017-25</td><td>يدار بنسبة 2.5٪</td></tr> <tr><td>Isoflurane Vaporizer</td><td>VetEquip</td><td>911103</td><td>توخي الحذر ، تبخر غازات التخدير مصدر</td></tr><tr><td>الضوء</td><td></td><td></td><td>استخدم لتصور المجال الجراحي ؛ موردين</td></tr><tr><td>متعددين فورمالين محايد مخزن ، 10٪</td> <td>Anatech المحدوده.</td><td>135</td><td>توخي الحذر ، السامة ؛ استخدم كمثبت للأنسجة لنقاط نهاية النقائل وتقييم العبء النقيلي بواسطة الأنسجة</td></tr><tr><td>Opal & trade ؛ 4 ألوان مجموعة</td><td>fIHC PerkinElmer، Inc.</td><td>NEL794001KT</td><td>استخدم للتألق المناعي متعدد الإرسال من Heppar-1 / CD45 / CK18 للكشف عن النقائل في كبد الفئران</td></tr><tr><td>مقص</td><td></td><td></td> التشغيل <td>الفولاذ المقاوم للصدأ ؛ توخي الحذر ، حاد ؛ العديد من الموردين</td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين ، 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td> مادة <td>مضافة لوسائط ثقافة الخلايا للاستخدام مع خطوط الخلايا السرطانية الثديية D2A1 و D2.OR و 4T1 ، استخدم عند 1x في محلول ملحي عالي الجلوكوز</td></tr><tr><td>المتعاقد مع الفوسفات DMEM</td><td></td><td></td><td>استخدام في 1x لتعليق الخلايا السرطانية قبل الحقن, العديد من الموردين</td></tr><tr><td>حقنة إبرة قابلة للإزالة, 25 & مو; ل, نموذج 1702</td><td>هاميلتون</td><td>7654-01</td><td>لحقن الوريد البوابة; توخي الحذر, paricularly أثناء العمل مع الإبر المحملة بخلايا الورم, حادة عند إرفاق الإبرة</td></tr><tr><td>مقبض</td><td></td><td></td> مشرط <td>الفولاذ المقاوم للصدأ; العديد من الموردين</td></tr><tr><td>شفرة مشرط, #15</td><td></td><td></td><td>الكربون الصلب, معقم, حجم 15; الموردين المتعددة</td></tr><tr><td>المحور الصغيرة الإبر القابلة للإزالة, 32-قياس</td><td>هاميلتون</td><td>7803-04</td><td>لحقن الوريد البابي ، 1 "الطول ، نمط النقطة 4 ، 12 درجة ؛ يمكن أيضا استخدام الإبر القابلة لإعادة الاستخدام بزاوية 33 إلى 34 ؛ توخي الحذر ، بشكل جزئي أثناء العمل مع الإبر المحملة بالخلايا السرطانية ،</td></tr><tr><td>هيبوكلوريت</td><td></td><td></td> الصوديوم الحاد <td>توخي الحذر ، المسببة للتآكل ؛ استخدم بنسبة 10٪ لتطهير مساحة العمل والأسطح ، الموردين المتعددين</td></tr><tr><td>معقم محلول ملحي</td><td>فيشر العلمي</td><td>BP358-212</td><td>0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم ؛ بدلا من ذلك ، يمكن أن تكون قفازات جراحية مصفاة محلية الصنع ومعقمة</td></tr><tr>، <td>موردين</td><td></td> متعددين معقمة <td></td><td></td></tr><tr><td>الغرز ، معقمة &nbsp ؛</td><td>Ethicon</td><td>J310H</td><td>4-0 27 "فيكريل مطلي ث / 22 مم 1 / 2c إبرة إيثوايلي تفتق ؛ توخي الحذر ، حاد</td></tr><tr><td>أعلى الطاولة المحمولة آلة التخدير</td><td>VetEquip</td><td></td><td>901801 استخدام مع مبخر الأيزوفلوران لتخدير الماوس</td></tr><tr><td>ملقط</td><td></td><td></td> خلع الملابس <td>الإبهام الفولاذ المقاوم للصدأ ، مسنن ، ضعيف ؛ موردين متعددين</td></tr><tr><td>ستائر منشفة ، معقمة & nbsp ؛</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>18 × 26 بوصة ، لتغطية وسادة التدفئة وتوفير مساحة عمل معقمة أثناء الجراحة</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Life Technologies</td><td>T10282</td><td>للاستخدام في زراعة الخلايا لتقييم الجدوى ، استخدم 1: 1 مع الخلايا في 1x PBS</td></tr><tr><td>Trypsin / EDTA ، 0.05٪ (1x)</td> <td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>استخدم في زراعة الخلايا لفصل الخلايا السرطانية عن ألواح زراعة الأنسجة</td></tr></tbody></table>

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

سرطان الثدي هو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان بين النساء في جميع أنحاء العالم. وتشارك الانبثاث في كبد تصل إلى أكثر من 30٪ من الحالات مع الانبثاث سرطان الثدي، ويؤدي إلى نتائج سيئة مع معدلات البقاء على قيد الحياة وسيطة من 4.8 - 15 شهرا. نماذج القوارض الحالية الانبثاث سرطان الثدي، بما في ذلك طعم أجنبي خلية الورم الرئيسي ونماذج ورم عفوية، نادرا ما metastasize إلى الكبد. داخل القلب ونماذج حقن داخل الطحال لا يؤدي في الانبثاث الكبد، ولكن هذه النماذج يمكن أن تتغير نتيجة ما يصاحب ذلك الموقع الثانوي ورم خبيث، أو حصانة للخطر بسبب إزالة الطحال لتجنب نمو الورم في موقع الحقن. لمعالجة الحاجة إلى تحسين نماذج ورم خبيث في الكبد، وهو الوريد البابي الفئران طريقة الحقن من شأنها أن توفر الخلايا السرطانية أولا وبشكل مباشر لوضعت الكبد. هذا النموذج يسلم الخلايا السرطانية في الكبد بدون مضاعفات الانبثاث المتزامنة في الأجهزة أو إزالة الطحال أخرى. الأراضي الفلسطينية المحتلةتوظف imized بروتوكول الوريد البابي حقن كميات صغيرة من 5-10 ميكرولتر، ≥ 32 الإبر قياس، والشاش مرقئ في موقع الحقن للسيطرة على فقدان الدم. النهج البوابة حقن الوريد في BALB / ج إناث الفئران باستخدام ثلاثة خطوط ورم الثدي مسانج متفاوتة تم اختبار إمكانية النقيلي. خلايا عالية النقيلي 4T1، خلايا D2A1 المعتدلة النقيلي، والخلايا D2.OR المنخفضة للالنقيلي. تركيزات ≤ النتائج 10000 خلية / حقن في كمون ~ 20 - 40 يوما لتطوير الانبثاث الكبد مع ارتفاع النقيلي 4T1 وD2A1 خطوط، و&gt; 55 يوما للخط D2.OR أقل عدوانية. ويمثل هذا النموذج أداة هامة لدراسة سرطان الثدي ورم خبيث في الكبد، ويمكن أن تنطبق على أنواع أخرى من السرطان أن metastasize في كثير من الأحيان إلى الكبد بما في ذلك القولون والمستقيم وسرطانات الغدد البنكرياس.

نموذج حقن الوريد البابي، والتي يتم تسليمها الخلايا السرطانية مباشرة إلى الكبد عن طريق عملية جراحية، ويسمح لحقن الخلايا السرطانية في الوريد البابي. في ظل ظروف مطهر، في الماوس تخدير، يتم شق جراحي ل~ 1 بوصة على الجانب الأيسر للفأرة بين الوسيط والسهمي الطائرات، بدأت للتو فوق مستوي رابع الأربية حلمة الغدة الثديية وتنتهي فقط تحت الأضلاع . يتم سحب الأمعاء الكبيرة والصغيرة بلطف من خلال شق لتقديم التصور من الوريد البابي (الشكل 1A). تحديد التشريحي الدقيق لالوريد البابي ونجاح الحقن داخل البوابة ويمكن التأكد من خلال ممارسة بروتوكول حقن مع الهند الحبر أو صبغة مشابهة. وحقن الصحيح عبر الوريد البابي يؤدي إلى الحبر يجري تسليمها فورا وعلى وجه التحديد إلى الكبد، ولن يؤدي في الهند الحبر انتشر في الرئة (فيقوإعادة 1B). وعلاوة على ذلك، وذلك باستخدام الماوس D2A1 الخلايا السرطانية الثديية ذات الكلمات الدلالية مع GFP، تشتت الخلايا السرطانية في جميع أنحاء الكبد هو واضح في تسعين دقيقة بعد الحقن، مؤكدا بوابة تسليم حقن الوريد إلى الكبد (الشكل 1C). في أعلى التكبير يصبح من الواضح أن في 90 دقيقة بعد الحقن، تم العثور على الخلايا السرطانية داخل الجيوب، وكذلك داخل لحمة الكبد على مقربة من الثلاثيات بوابة، حيث يدخل الدم البابي للكبد (الشكل 1C). وتشير هذه البيانات إلى أن نشط تسرب الخلايا السرطانية قد تحدث في 90 دقيقة بعد ورم حقن الخلايا. مجتمعة، وتؤكد هذه البيانات أن النموذج حقن الوريد البابي يسلم حجم الحقن مباشرة إلى الكبد، مع الحبر أو ورم خلايا متناثرة في جميع أنحاء الكبد وجود وسائل نقل ملموس من حجم الحقن إلى الرئة. لتقييم متانة الوريد البابي نموذج الحقن، وثلاثة separأكلت تم اختبار مسانج الماوس الثدي خطوط الخلايا السرطانية في إناث البالغات الفئران BALB / ج. تم اختيارهم بناء هذه السطور ورم الثدي على سلوك يتسم في نماذج منصة الدهون الثديية وتشمل خط عدوانية للغاية والنقيلي 4T1 الخلية، وأقل عدوانية خط D2A1 النقيلي، وانخفاض خط D2.OR / غير المنتشر 37،61،73 (74 عاما). تم اختبار 2000 و 10،000 الخلايا في الحقن مع عدم وجود فروق ملحوظة في وقت لنمو الانبثاث العلني مع هذه التركيزات خلية منخفضة. لهذه الدراسات تم استخدام علامات بديلة من ورم خبيث مثل عدم وجود الاستمالة، وشحوب، وفقدان الوزن لتبرير التشريح، والذي تم بمقتضاه أكدت وجود أو عدم وجود نقائل الكبد عن طريق تقييم البصرية الكبد وغيرها من الأجهزة لتأكيد التسليم داخل البوابة . وتؤكد هذه البيانات تقارير سابقة أن خطوط الخلايا 4T1 وD2A1 تمثل خطوط ورم الثدي أكثر عدوانية، كما لوحظ أقصر ورم خبيث معدلات البقاء على قيد الحياة الحرة بالمقارنة مع الفئران التي حقنتمع خط D2.OR أقل عدوانية (الشكل 2A). الفئران حقنها بخلايا 4T1 أو D2A1 الورم المتقدمة ورم خبيث في الكبد العلني التي كتبها ~ 30 - 40 أيام بعد الحقن، وبعض ضعت ورم خبيث في أقرب وقت 18 أيام بعد الحقن (الشكل 2A)، في حين الماوس واحد فقط حقنها بخلايا D2.OR زيارتها المتقدمة ورم خبيث في الكبد العلني في نهاية الدراسة، والتي كانت 60-65 يوما بعد ورم حقن الخلايا. وأكد الانبثاث في وقت لاحق من قبل باجتزاء من خلال الكبد في 250 ميكرون المستويات وتحليل الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) المقاطع الملون (الشكل 2B-D). بالإضافة إلى الكشف عن الآفات النقيلي العلنية في الكبد الماوس، يمكن أيضا أن تستخدم نموذج الوريد البابي لدراسة الأحداث السابقة في تتالي النقيلي بما في ذلك الكشف عن خلايا واحدة / مجموعات الخلايا التالية التسرب، وتشكيل الآفات الصغيرة النقيلي. تم استخدام تعدد الإرسال المناعي تلطيخللكشف عن 4T1، D2A1، وD2.OR الخلايا السرطانية الثديية في الكبد عندما كانت موجودة كما الخلايا واحد أو الآفات الصغيرة المنتشر، كما H &amp; E غير كافية لتأكيد وجود الآفات الصغيرة. ويبين الشكل 3A على BALB / ج الماوس الكبد التمثيلي مع بؤر micrometastatic المفترض من خلايا الورم D2A1 التي هي ايجابية للCK18 قرنين الظهارية، سلبية للCD45 علامة عموم المناعي، والسلبية للعلامة الكبدية Heppar-1. خلايا الكبد أيضا وصمة عار إيجابية لCK18، مما يستلزم استخدام Heppar-1 في هذا الفريق تلطيخ. واحد ملاحظة هامة هي أن ظهارة القناة الصفراوية والسلف خلايا الكبد وصمة عار إيجابية لCK18، الأمر الذي يتطلب تمييز دقيق بين الخلايا السرطانية والقناة الصفراوية، وخاصة عند تقييم المناطق حول الأوعية البابية (الشكل 3A). كبديل لتعدد المناعي لتحديد خلايا نشر واحدة وبؤر micrometastatic هو الاستفادة مسانج خطوط ورم الثدي الكلمات الدلالية مع تعزيز الفلورية الخضراءبروتين (EGFP) و / أو وسيفيراز وأداء IHC للعلامة (الشكل 1C). ويرجع ذلك إلى المناعية للEGFP، وسيفيراز، والبروتينات الأخرى، لا بد من استخدام نماذج الماوس التي tolerized لهذه البروتينات، مثل المناعة المختصة "متوهجة رئيس" الماوس الرواية التي تعبر عن EGFP ووسيفيراز في الغدة النخامية الأمامية 75. لتحديد الآفات macrometastatic خطوط مسانج لازال مثل خط D2A1 الورم، والمناعي تعدد الإرسال CK18 / Heppar-1 / CD45 مثالية (الشكل 3B). <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54903/54903fig1.jpg"> الشكل 1: الوريد البابي حقن يسلم الخلايا السرطانية مباشرة إلى الكبد. أ) البوابة حقن الوريد. يتم إجراء شق بين الوسيط والطائرات السهمي اليسرى من فوق الطائرة من الرابعة الأربية حلمة الغدة الثديية وتنتهي أسفل ري ب القفص. ب) BALB / ج الكبد مع حقن برنامج تلفزيوني (يسار). بعد الهند حقن الحبر عبر الوريد البابي، والكبد (وسط) ولكن ليس في الرئة (يمين) يستغرق الحبر. C) التمثيلية الصور قسم رقيقة من D2A1 الماوس الخلايا السرطانية الثديية ذات الكلمات الدلالية مع GFP في BALB / ج الماوس الكبد في 90 دقيقة بعد الحقن من 1 × 10 6 الخلايا السرطانية عن طريق الوريد البابي. والأكباد الفورمالين ثابتة، البارافين جزءا لا يتجزأ، مقطوع، وملطخة الأجسام المضادة لمكافحة GFP للكشف عن الخلايا السرطانية. وتظهر اللوحة العلوية البني زنازين مظلمة الملون ورم (السهام) المنتشرة في جميع أنحاء الكبد، النجمة يدل تلطيخ الكبدية غير محددة حول الأوردة المركزية؛ شريط مقياس = 300 ميكرون. لوحات السفلي تظهر الصور ممثل الخلايا السرطانية في 90 دقيقة بعد الحقن لا يزال يرتبط بشكل وثيق مع الأوعية الدموية. شريط النطاق = 50 ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> الطبقة = "jove_content" FO: المحافظة على together.within الصفحات = "1"&gt; <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54903/54903fig2.jpg"> الشكل 2: ثمرة من الماوس الثدي خطوط ورم الخلايا في الكبد بعد الوريد البابي حقن. أ) منحنى كابلان ماير تظهر معدلات البقاء على قيد الحياة خالية من ورم خبيث في الفئران حقن مع 2،000-10،000 خلايا 4T1، D2A1، أو D2.OR الماوس الثدي السرطانية. تم حقن الفئران بخلايا الورم ومراقبة بحثا عن علامات على ورم خبيث بما في ذلك عدم وجود الاستمالة، عيون شاحبة، وتغيرات الوزن. وأكد ورم خبيث في وقت التشريح وH &amp; E على أقسام النسيجية للكبد. N = 2 4T1 2000 الخلايا. 2 4T1 10،000 الخلايا. N = 2 D2A1 2000 الخلايا. 3 D2A1 10،000 الخلايا. N = 3 D2.OR 2000 الخلايا. 3 D2.OR 10،000 الخلايا. ممثل H &amp; E صور B) 4T1 الآفات في 21 أيام بعد الحقن من 10000 الخلايا، C) الآفات D2A1 في 26 أيام بعد الحقن من 10،000 الخلايا السرطانية، وD) الآفات D2.OR في59 أيام بعد الحقن من 10،000 خلايا. الحانات النطاق = 75 ميكرون. ولوحظت إصابات مشابهة عندما تم حقن الخلايا 2000 4T1 أو D2A1 الورم. تم الكشف عن أي آفات مع 2000 خلايا D2.OR. كان لا يوجد دليل على ورم خبيث في أجهزة أخرى أو في موقع شق جراحي واضح في أي الماوس على هذه الدراسات. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54903/54903fig3.jpg"> الرقم 3: الكشف عن خلايا واحدة والنقيلي الآفات في كبد الفأر باستخدام المتعددة المناعي. أ) المناعي متعدد الممثل الخلايا D2A1 ورم في BALB / ج الماوس الكبد في 90 دقيقة بعد الحقن باستخدام نموذج حقن الوريد البابي. وقد تم تلوين باستخدام مجموعة متعددة. من اليسار إلى اليمين يظهر دابي. CD45 بمناسبة الكريات البيض. Heppar-1 لمارك خلايا الكبد. وCK18 بمناسبة الخلايا السرطانية، خلايا الكبد، وظهارة القناة الصفراوية. وتظهر الصورة المدمجة مجموعة المفترضة للCK18 + Heppar-1 - الخلايا السرطانية D2A1 المرتبطة بشكل وثيق مع ثالوث المدخل - CD45. السهم = خلايا الورم D2A1، النجمة = القناة الصفراوية ظهارة. شريط النطاق = 25 ميكرون. ب) D2A1 علنية آفة المتنقل تمثيلية باستخدام نفس لوحة تلطيخ كما هو الحال في خلايا الورم A. هي CK18 + في حين خلايا الكبد المجاورة هي CK18 + Heppar-1 +. شريط النطاق = 25 ميكرون. تم القبض على الصور على المجهر مع 20 × 0.8، 40 × 1.3، و60 × 1.4 الأهداف وكاميرا CCD، وذلك باستخدام برنامج المجهر. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

تم تطوير إجراء جراحي لتوصيل خلايا ورم الثدي إلى كبد الفئران عن طريق حقن الوريد البابي. يسمح هذا النموذج بالتحقيق في المراحل المتأخرة من ورم خبيث في الكبد في مضيف مؤهل مناعي بالكامل ، بما في ذلك تسرب الخلايا السرطانية ، والبذر ، والبقاء ، والنمو النقيلي في الكبد.

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو توصيل الخلايا السرطانية مباشرة إلى كبد الفئران من أجل النمذجة التجريبية لورم خبيث الكبد لسرطان الثدي. يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة المراحل اللاحقة من الشلال النقيلي في كبد الفئران. بما في ذلك تسرب خلايا سرطان الثدي ، والبذر ، والموت ، والانتشار ، وقرارات السكون ، بالإضافة إلى النمو.الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تنقل الخلايا السرطانية مباشرة إلى الكبد دون إزالة الطحال أو ورم خبيث متعدد الأعضاء المصاحب. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، حيث يتطلب حقن الوريد البابي تلاعبا دقيقا يعتمد على المراقبة التشريحية المباشرة. ستساعدني في هذا الإجراء ألكسندرا كواكنبوش ، طالبة دراسات عليا في مختبر بيبرشادين.قبل البدء في الإجراء ، امسح جميع أسطح منطقة الجراحة باستخدام مبيض بنسبة 10٪. قبل ساعة واحدة من الحقن ، عالج الفئران الإناث التي تتراوح أعمارها بين ثمانية إلى 15 أسبوعا ب 100 ميكرولتر من التسكين تحت الجلد للتحكم في الألم. ضع مرهما على عيون.بعد ذلك ، ضع الفئران في وضع ضعيف وتأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم. بعد ذلك ، قم بتطهير المناطق الجراحية والمناطق المحيطة بها من ، بما في ذلك الذيل ، بثلاث مناديل معقمة مبللة بالشاش بنسبة 2٪ كلورهيكسيدين بالتناوب ، ومناديل كحولية جاهزة. بعد آخر مسح للكلورهيكسيدين ، استخدم مشرطا معقما لعمل شق بطول بوصة واحدة في الجلد بين المستوى المتوسط والسهمي على الجانب الأيسر من الفأر ، بدءا من الأضلاع مباشرة وينتهي فوق حلمة الغدة الثديية الأربية الرابعة ، متبوعا بشق مماثل بطول بوصة واحدة عبر الصفاق.الآن قم بسحب الخلايا السرطانية لأعلى ولأسفل عدة مرات لإعادة تعليق محلول الخلية ، وقم بتحميل حقنة إبرة قابلة للإزالة سعة 25 ميكرولتر ، مزودة بإبرة قياس 32 ، مع 10 ميكرولتر من الخلايا. اضغط على المكبس حتى تصبح الخلايا على طرف الإبرة ، ويكون المكبس بالحجم المناسب للحقن. امسح الجزء الخارجي من الإبرة المحملة بضمادة كحولية معقمة لإزالة أي خلايا سرطانية خارجية، مع الحرص على تجنب الوخز بالإبر.بعد ذلك ، أمسك الجلد والبطانة البريتونية للجانب المتوسط من الشق بالملقط ، استخدم قطعة قطن معقمة لتحريك الأمعاء الغليظة والدقيقة بعناية إلى شاش معقم ، مبلل بمحلول ملحي معقم. قم بتغطية الأعضاء الداخلية في الشاش المنقوع بالمحلول الملحي للحفاظ على الرطوبة الداخلية والعقم. عندما يكون الوريد البابي مرئيا ، اطلب من مساعد إبعاد الأمعاء برفق عن الطريق لكشف الوريد البابي بقطعة قطن معقمة وإدخال الإبرة من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات في الوريد البابي ، حوالي 10 ملليمترات تحت الكبد ، بزاوية أقل من 5 درجات ، الجانب المائل لأعلى.حقن الحجم الكامل للخلايا السرطانية ببطء ، مما يسمح للدم بالتدفق عبر رأس الإبرة لعدة ثوان لتجنب ارتجاع الخلايا السرطانية خارج الوريد. نظرا لأن التصور الصحيح والوصول والحقن في الوريد البابي أمر ضروري ، خذ الوقت الكافي للتأكد من أن وضع الوريد البابي ، فيما يتعلق بالإبرة ، مرض قبل محاولة الحقن. عندما يتم حقن جميع الخلايا ، قم بإزالة الإبرة مع الضغط اللطيف في نفس الوقت على الوريد باستخدام قضيب معقم برأس قطني.ثم استخدم قضيبا جديدا من القطن المعقم لحمل قطعة مربعة من 0.5 إلى سنتيمتر مربع واحد من الشاش المرقئ فوق موقع الحقن. بعد خمس دقائق ، ارفع الشاش بحذر لتقييم إغلاق الوريد. عندما يتوقف تدفق الدم تماما ، قم بإزالة الشاش وأعد الأمعاء إلى تجويف البطن.باستخدام نمط خياطة بسيط مستمر أو متقطع ، أغلق البطانة البريتونية باستخدام خياطة الفيكريل المعقمة ذات الأربعة صفر وتفتقها. بعد إغلاق الجلد بنفس الطريقة ، قم بحقن 100 ميكرولتر من التخدير الموضعي على طول موقع الشق ، متبوعا بتوصيل 0.5 مل من محلول ملحي معقم تحت الجلد. يمكن تأكيد التحديد التشريحي الدقيق للوريد البابي والحقن الناجح داخل البوابة من خلال ممارسة بروتوكول الحقن بحبر الهند أو صبغة مماثلة.مع الحقن الصحيح عبر الوريد البابي ، مما يؤدي إلى توصيل الحبر على الفور وتحديدا إلى الكبد دون أن ينتشر إلى الرئة. باستخدام خلايا ورم ذاكرة الفئران الموسومة ب GFP ، يظهر تشتت الخلايا السرطانية في جميع أنحاء الكبد بعد 90 دقيقة من الحقن ، مما يؤكد نجاح توصيل الوريد البابي إلى الكبد. تم العثور على الخلايا السرطانية داخل الجيوب الأنفية وكذلك داخل حمة الكبد على مقربة من ثلاثيات البوابة ، حيث يدخل دم الوريد البابي إلى الكبد ، مما يشير إلى أن تسرب الخلايا السرطانية النشط يحدث في هذا الوقت.كما يتضح من منحنيات البقاء على قيد الحياة هذه ، فإن نقل الوريد البابي بالتبني لخطوط الخلايا السرطانية الثديية العدوانية يؤدي إلى معدلات بقاء أقصر خالية من النقائل مقارنة بالفئران التي تم حقنها بخط خلايا سرطانية أقل عدوانية. يمكن تأكيد النقائل من هذه عن طريق التقسيم عبر الكبد في مستويات 250 ميكرون وتحليل H&E اللاحق للعينات. علاوة على ذلك ، يعد تحليل التألق المناعي مفيدا لتحليلات الآفات النقيلية الدقيقة والكلية للخطوط التركيبية غير الموسومة مثل خط الورم D2A1 ، والتي تكون سلبية CD45 ، و Heppar-1 سلبية ، و CK18 إيجابية كما هو موضح في هذه الصور التمثيلية.بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 12-14 دقيقة لكل فأرة ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تأخذ الوقت اللازم لتصور الوريد البابي والوصول إليه بشكل صحيح قبل محاولة الحقن. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل التصوير داخل الحيوية بعد حقن الخلايا السرطانية للإجابة على أسئلة إضافية حول كيفية تفاعل الخلايا السرطانية مع بيئة lubramicro.مع تطورها ، تسمح هذه التقنية للباحثين في مجال ورم خبيث باستكشاف المراحل اللاحقة من الشلال النقيلي لأنواع السرطان المختلفة في الفئران. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لمكان إجراء الشق الجراحي ، وكيفية تحريك الأعضاء الداخلية برفق للوصول إلى الوريد البابي ، وكيفية إجراء الحقن داخل البوابة. لا تنس أن العمل مع المحاقن المحملة بالخلايا السرطانية يمكن أن يكون خطيرا ، ويجب اتخاذ الاحتياطات اللازمة لتجنب وخز الإبر أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

a-portal-vein-injection-model-to-study-liver-metastasis-breast

Research

JoVE Journal

Cancer Research

أبحاث السرطان

توضح هذه المقالة إجراء لتحريض مثلي bioluminescent أورام الكبد في الفئران ، وتحليل لاحقة من نمو الورم محصورا في الكبد باستخدام يعيش التلألؤ الجسم كله التصوير.

فأري الورم الكبدي Bioluminescent النموذجي

يصف هذا الفيديو إجراء جراحيا لتوصيل خلايا ورم الثدي إلى كبد الفئران عن طريق حقن الوريد البابي. يسمح هذا النموذج بالتحقيق في المراحل المتأخرة من ورم خبيث في الكبد.

حقن الوريد البابي: طريقة لدراسة ورم خبيث سرطاني في الكبد

يصف هذا الفيديو تقنية حقن الخلايا السرطانية المصنفة باستخدام حقن وريد الذيل في نموذج الفأر. نراقب أيضا سرطان الثدي ، وتكوين ورم خبيث ، ونموه باستخدام تصوير الحية في الوقت الفعلي.

حقن وريد الذيل: طريقة لإدارة الخلايا السرطانية للدراسات النقيلية في نموذج الفأر

A، نموذج الفئران قبل السريرية الانبثاث الكبدي تنفيذ عبر تقنية الحقن hemispleen.

وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي

تعتمد قدرة المستنسخة النقيلية على استعمار المواقع البعيدة على قدرتها على الانتشار و / أو قدرتها على البقاء في البيئة المكروية المضيفة دون انتشار كبير. هنا ، نقدم نموذجا حيوانيا يسمح بالتصور الكمي لكلا النوعين من استعمار الكبد عن طريق المستنسخة النقيلية.

المتقدم نموذج حيواني من القولون والمستقيم ورم خبيث في الكبد: تقنيات التصوير وخصائص النقيلي النسخ

نحن نصف بالتفصيل نموذج ورم سرطان القولون والمستقيم (CRLM) تأثير إعادة إقفاريالكبد (I/R) في نمو الورم والانبثاث. هذا النموذج يمكن أن تساعد على فهم أفضل للآليات الكامنة وراء الجراحة الناجمة عن تعزيز نمو الكبد النقيلي.

نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب

هذا العمل المسبقة بروتوكول متقدم لتقييم دقيق تحميل الورم عن طريق الكشف عن البروتين الفلوري الأخضر وإشارات الإضاءة الحيوية، فضلا عن التكامل بين تقنية الكشف الجزيئي الكمي.

دراسة ثلاثية سلبية سرطان الثدي باستخدام نموذج سرطان الثدي Orthotopic

غالبا ما يستخدم الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في أبحاث الانبثاث ، ولكن عبء الورم النقيلي قد يكون من الصعب تحليله. هنا، ونحن نظهر نموذج حقن ذيل الوريد من الانبثاث وتشمل نهجا جديدا لتحليل عبء ورم الرئة النقيلي الناتجة.

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

نحن نصف نموذج فأر xenograft لورم خبيث في الدماغ لسرطان الثدي الناتج عن حقن الوريد الخلفي لخط خلايا سرطان الثدي الالتهابي المضخم HER2 داخليا.

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

حقن الوريد البابي من سرطان القولون والمستقيم (CRC) العضوية يولد ورم خبيث الكبد الغنية بالسدى. يمثل نموذج الفأر هذا من الانبثاث الكبدي CRC أداة مفيدة لدراسة تفاعلات الورم والسدى وتطوير علاجات جديدة موجهة للسدى مثل العلاجات الجينية المرتبطة بالفيروسات الغدية.

حقن الوريد البابي لسرطان القولون والمستقيم العضوي لدراسة سدى ورم خبيث في الكبد

تصف المخطوطة منهجية لإنشاء ومراقبة النمو الطولي للورم الخبيث الرئوي التلقائي من أورام الثدي المحقونة تقويم العظام ، والتي يمكن التدخل في جميع مراحل الشلال النقيلي.

في الجسم الحي تصوير لقياس ورم خبيث في الرئة التلقائي لخلايا ورم الثدي المحقونة تقويم العظام

تعلم حقن الوريد البابي لدراسة انبثاث سرطان الثدي في الكبد باستخدام نماذج الفئران المناعية. تتيح هذه التقنية استكشاف سلوك الخلايا السرطانية في الكبد بدقة.

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

استكشف المزيد من الفيديوهات