3D الجامع القلب تحليل الأنسجة عضلة القلب

الراوي}الهدف العام من هذا البروتوكول هو تسهيل طريقة منظمة وقابلة للتكرار لمعالجة أنسجة القلب الكاملة ثلاثية الأبعاد والتي يمكن استخدامها لتقييم دقة استهداف الحقن داخل القلب في المنطقة الحدودية للاحتشاء. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال طب القلب التجديدي ، مثل تطوير الممارسة وتحسين تقنيات الحقن. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر طريقة موحدة وقابلة للتكرار لمعالجة أنسجة القلب الكاملة ثلاثية الأبعاد.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو تطوير العلاجات التجديدية للقلب والتحقق من دقة الحقن لتقنيات التوصيل الطبيعية. الهدف من هذا العلاج بالخلايا الجذعية القلبية هو حقن الخلايا في المنطقة الحدودية للاحتشاء لتحفيز تكوين الأوعية الدموية المحلية وحماية خلايا عضلة القلب. يتطلب التقاط القلب في المرحلة الانبساطي النهائي الممارسة والصبر.

يعد العرض المرئي لهذه الخطوات أمرا بالغ الأهمية. ابدأ بفصل التامور عن القلب المحقون بالميكروبياض ، مع الحفاظ على الأذينين والبطينين سليمين. عندما تتم إزالة كل الأنسجة ، استخدم مقص Klinkenberg لتشريح الشريان الأورطي الصاعد على بعد حوالي سنتيمتر واحد فوق الصمام الأبهري ، وقطع الأوردة السفلية والرئوية على بعد حوالي سنتيمتر واحد من الأذين.

بعد تثبيت قمة القلب في قاع حاوية التضمين البلاستيكية لمنع التعويم ، ضع 2-0 خيوط من خلال الجزء المتبقي من الشريان الأورطي إلى حواف الحاوية ، وقم بتثبيت القلب. احرص على أن يكون القلب في المنتصف ولا يلمس جدران الحاوية. عندما يتم تأمين العضو في نهاية الانبساطي مثل الهندسة ، استخدم مشابك البعوض لإمساك الوريد الجفي السفلي واستخدم حقنة سعة 50 مليلتر لحقن أجار طازج من 50 إلى 60 درجة مئوية في الأذين الأيمن عبر الوريد السحري العلوي حتى يمتلئ كل من الأذين الأيمن والبطين بالكامل.

للحصول على قلب مدمج يشبه الهندسة الانبساطي النهائي قدر الإمكان ، قم بتثبيت قمة البطين الأيسر في قاع الحاوية واملأ البطين الأيمن بالأجار أثناء تثبيت الأوردة الرئوية. بعد ذلك ، ضع مشبك البعوض على الأوردة الرئوية وقم بتمرير حقنة جديدة مملوءة بسعة 50 مليلتر من الأجار برفق في الاتجاه الرجعي عبر الصمامات الأبهري. حقن المحلول ببطء في البطين الأيسر حتى يمتلئ البطين والأذين الأيسر تماما، مع تثبيت الشريان الأورطي بمجرد ملء البطين الأيسر.

الآن ، اسكب الأجار المتبقي في الحاوية حتى يتم تغطية القلب بالكامل وضع أنبوبين بلاستيكيين صلبين داخل حاوية التضمين ليكونوا بمثابة هياكل مرجعية أثناء تسجيل الصورة. ثم ضع القلب عند درجتين إلى سبع درجات مئوية لمدة أربع ساعات على الأقل لتصلب الأجار. بعد التصوير بالرنين المغناطيسي ، اقلب الحاوية رأسا على عقب واترك الهواء بين الأجار وجوانب الحاوية لإزالة محلول الأجار الصلب والقلب من الحاوية.

قم بإزالة القضبان البلاستيكية. ثم استخدم قطاعة اللحم لتقسيم كتلة الأجار والقلب إلى شرائح بحجم خمسة ملليمترات من القمة إلى قاعدة القلب ، مع القطع بالتوازي مع الجزء السفلي من كتلة الأجار للحفاظ على زوايا الشرائح كما هو في صور الرنين المغناطيسي المكتسبة. عندما يتم الحصول على جميع الشرائح ، قم بتلطيخ عينات الأنسجة في TTC.

بعد 15 دقيقة ، قم بتصوير الشرائح على كلا الجانبين بزاوية عمودية ، ثم اشطف الأقسام بعناية في محلول ملحي بنسبة 0.9٪. لتصوير العينات بواسطة الفحص المجهري الفلوري ، حدد تصوير الوضع الفلوري على الماسح الضوئي للوضع المتغير واضبط حجم البكسل على 100 × 100 ميكرون. وبالنسبة لفدرة المرشاح الأولى، اختر مرشاح تمرير النطاق الذي يتداخل مع الطول الموجي للبث لمضان الخرزة في القناة الأولى، ثم إلى مرشاح تمرير النطاق لفدرة المرشاح الثانية خارج الطول الموجي للإرسال في القناة الثانية.

بعد ذلك ، حدد كتلة المرشح المناسبة ، واضبط أنبوب المضاعف الضوئي على الجهد المناسب ، وليزر الإثارة على الطول الموجي للإثارة الأقرب إلى الميكروبيدات المحقونة. بعد الحصول على جميع الصور ، في برنامج المعالجة اللاحقة المناسب ، قم بتقسيم حدود عضلة القلب والبطين الأيسر الداخلي والنخابي في صور الرنين المغناطيسي متبوعة بتجزئة مماثلة لعضلة القلب ومواقع الحقن في الصور الفلورية. ثم قم باستيفاء المقاطع المسجلة للصورة خطيا من جانبي الشرائح لإعادة بناء سمك العينة الأصلي وإنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد للبيانات.

مع تأمين القلب في نهاية الانبساطي مثل الهندسة كما هو موضح للتو ، في هذه التجربة التمثيلية ، نجح الأجار في التمسك أنسجة القلب مما مكن من تقطيع الأنسجة في الزوايا المرغوبة بسماكة شريحة متساوية. في كل من الصور الفلورية ثنائية الأبعاد والرنين المغناطيسي ، تكون مواقع الندبة والحقن مميزة بشكل واضح. توفر الأنسجة الملطخة TTC وصور الرنين المغناطيسي المعزز للجادولينيوم المتأخر تحكما في تقييم الندبة في التصوير الفلوري.

يتيح التصوير بعد المعالجة إعادة بناء الهندسة ثلاثية الأبعاد للقلب خارج الجسم الحي بناء على التجزئة والصور الفلورية ، مما يسمح بتقييم دقة الحقن ثلاثي الأبعاد. في هذه الدراسة ، تمت حماية ترسبات الحقن والمنطقة الحدودية للاحتشاء على جدار الشغاف ، وتم قياس المسافات بين الإسقاطات على سطح الشغاف. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل التقييم الجراحي أو القياس الكمي لحجم الاحتشاء أو التحقق من صحة طرق التصوير ثلاثية الأبعاد الأخرى.

لقد استخدمنا هذه التقنية لتقييم دقة الحقن في المنطقة الحدودية للاحتشاء. أجري هذا البحث لتحسين العلاج التجديدي للقلب لفشل القلب. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير القلب ، وكيفية تضمين أنسجة القلب ومعالجتها ، وكيفية إجراء التصوير الفلوري لعينات أنسجة القلب.