اثنين من التقنيات لخلق الفئران قصور الدريقات: استئصال جارات الدرق عن طريق GFP الغدد والخناق-السمية بوساطة الغدة الدرقية تذرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذجين من الفئران لقصور الدريقات المكتسب سهل الاستخدام ، وإنتاج نمط ظاهري مستقر ، وترك وظيفة الغدة الدرقية سليمة. الميزة الرئيسية لهذين النموذجين هي أنهما يتيحان الإزالة الدقيقة للغدد الجار درقية في الفئران ، إما عن طريق الجراحة الموجهة بالفلورة ، أو عن طريق التعبير الخاص ب PTH لمستقبل سم الخناق ، مما يسمح باستهداف الخلايا وتدميرها بشكل انتقائي دون التدخل في الغدة الدرقية المجاورة. نأمل أن تتمكن نماذج الفئران لدينا من الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال قصور الدريقات.

على سبيل المثال ، هل يمكن أن تساعد العلاجات التناظرية PTH في الحفاظ على مستويات الكالسيوم الطبيعية في الدم دون زيادة إفراز الكالسيوم البولي؟ يمكن أيضا استخدام هذه النماذج لدراسة الأسئلة السريرية الأخرى في قصور الدريقات. على سبيل المثال ، هل تتأثر قوة العظام بقصور الدريقات وهل تتغير مع العلاج؟

يصعب الإجابة على مثل هذه الأسئلة في المرضى ، ولكن يمكن استخدام نماذج الفئران هذه لمعالجتها. ابدأ بتخدير الفئران البالغة من العمر ثمانية إلى 10 أسابيع ، مع التعبير عن GFP على وجه التحديد في الغدة الجار درقية وفقا لبروتوكول معتمد. ضع في وضع ضعيف وتأكد من عمق مناسب للتخدير من خلال عدم وجود انسحاب انسحاب أو انعكاس قرصة إصبع القدم أو أي وسيلة أخرى.

قم بتمديد منطقة الرقبة البطنية واستعد للجراحة عن طريق حلق الفراء. قم بتطهير الجلد المحلوق باستخدام وسادة مطهرة من اليود بوفيدون ، ثم قم بإعداد موقع الشق باستخدام مقشر جراحي وشطف كحولي وفقا للبروتوكول المعتمد الخاص بك. بعد ذلك ، قم بتغطية بستائر جراحية معقمة لتقليل تلوث موقع الجراحة.

بعد قطع شق طولي بطول 2 سم بمشرط جراحي ، استخدم ملقطا منحنيا ومسننا لتشريح اللفافة ، وادفع الغدد اللعابية إلى الجانب. ثم أثناء عرض موقع الجراحة من خلال مجهر التشريح ، استخدم أطراف الملقط الحاد لقطع وفصل عضلات القصبة الهوائية وفضح القصبة الهوائية. حدد الفصين الأيمن والأيسر من الغدة الدرقية الواقعة بجوار القصبة الهوائية.

ثم قم بتبديل مصدر الضوء إلى ضوء الفلورسنت وتصور الغدد الجار درقية الفلورية الخضراء. عادة ما تحتوي القوارض على غدتين جار درقتين فقط. إذا لم تتمكن من تحديد الغدد الجار درقية بجوار الغدة الدرقية على كل جانب ، فيجب الاشتباه في الغدد الجار درقية الموجودة خارج الرحم ، ويجب إجراء بحث دقيق عنهما على طول القصبة الهوائية.

بعد ذلك ، استخدم الملقط والمقص الجراحي لإزالة الغدد الجار درقية الخضراء بعناية وتحقق بعناية على طول القصبة الهوائية للتأكد من إزالة جميع الأنسجة الخضراء. استخدم شاشا معقما للإرقاء. أغلق عضلات القصبة الهوائية بخيوط متقطعة.

أغلق شق الجلد بخيوط هالستيد. ضع ما بعد الجراحة في قفص منفصل على وسادة تسخين لاستعادة درجة حرارة الجسم. بمجرد أن يستيقظ الفأر ، ضع طعام الحبيبات والماء مع بعض طعام الجيلاتين على أرضية القفص.

بعد فترة مراقبة ما بعد الجراحة لمدة ساعتين ، أعد الفأر إلى منشأة. بعد ثلاثة أيام من استئصال الغدة الجار درقية ، قم بتحليل 10 ميكرولترات من دم الذيل بحثا عن الكالسيوم المتأين باستخدام محلل مثل نظام غازات الدم ومحلل الكالسيوم ودرجة الحموضة. إذا نجح استئصال الغدة الجار درقية ، فسيكون الكالسيوم المتأين في الدم مساويا أو أقل من ناقص انحرافين معياريين لانحراف الفئران الضابطة التي يتم تشغيلها بشكل زائف.

ابدأ بتحضير محلول توكسين الخناق عن طريق تخفيف مسحوق توكسين الخناق بمحلول ملحي معقم بتركيز 0.5 ميكروغرام لكل ملليلتر. تصفية معقمة الحل و alloquot. حقن خمسة ميكروغرامات لكل كيلوغرام من وزن الجسم من سم الخناق في الفئران البالغة من العمر ثمانية إلى 10 أسابيع ، معبرا عن مستقبلات سموم الدفتيريا على وجه التحديد في الغدة الجار درقية.

بعد ثلاثة أيام من الحقنة الثانية من سم الخناق ، قم بتحليل 10 ميكرولترات من دم الذيل بحثا عن الكالسيوم المتأين ، كما كان من قبل. فيما يلي صور تمثيلية للمواقع المختلفة للغدد الجار درقية في الفئران التي تعبر عن GFP على وجه التحديد في الغدة الجار درقية. كان لدى الفئران غدتان أو ثلاث غدد جاردرية خضراء.

تقع معظم الغدد الجار درقية بالقرب من الحدود العلوية أو بالقرب من الحدود السفلية للغدة الدرقية. في حالات نادرة ، كانت بعض الغدد الجار درقية موجودة خارج المباكي. تتمثل إحدى مزايا نموذج الفأر الخاص بنا في بقاء الغدة الدرقية سليمة.

يوضح هذا الشكل مستويات TSH في الفئران GFP-PTX بعد ثلاثة أشهر من استئصال الغدة الجار درقية. يوضح هذا الشكل قياسات T4. تظهر الفئران GFP-PTX تركيزات TSH وتركيزات T4 التي لم تكن مختلفة عن الفئران الضابطة.

توضح هذه الصورة مستويات الكالسيوم في الدم ومستويات PTH في الفئران GFP-PTX. توضح هذه الصورة مستويات الكالسيوم في الدم ومستويات PTH في الفئران المحقونة بسم الدفتيريا. أظهرت كل من الفئران GFP-PTX والفئران المحقونة PTHcre-iDTR نقص كالسيوم الدم مستقرا وانخفضت مستويات PTH على مدى فترة مراقبة مدتها ثلاثة أشهر.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء استئصال الغدة الجار درقية الموجه ب GFP في حوالي 20 دقيقة للإجراء بأكمله. لا تستغرق حقنة واحدة من توكسين الخناق أكثر من دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد هذا الإجراء ، تصاب هذه الفئران بقصور الدريقات ويمكن استخدامها كنموذج للمرض قبل السريري.

يمكن معالجة أسئلة مثل فعالية نظائر هرمون PTH المختلفة في علاج قصور الدريقات. لا تنس أن سم الخناق خطير ، وأن العمال يجب أن يخضعوا لتطعيمات سموم الخناق المعتادة. يجب دائما ارتداء معدات الحماية الشخصية مثل الأقنعة والقفازات أثناء تنفيذ هذه الإجراءات.