Name: تشريح السمعية بولا بعد الولادة في الفئران: عزل العظام الأذن الوسطى وتحليل النسيجي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: تعلم تشريح السمعية بولا والكبسولة والعظام السمعية في الفئران حديثة الولادة باستخدام المجهر ثنائي العينين. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة التشكل الخلوي والتعظم الغضروفي في علم أحياء الجروح.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يشكر المؤلفون ماساكي يودا وإليز لامار على القراءة النقدية للمخطوطة ، وكازوماسا تاكينوتشي للمساعدة في علم الأنسجة ، وماري فوجيوارا للمساعدة في الفحص المجهري وماكوتو موريكاوا للمساعدة في تصوير عظيمات الأذن البشرية والفأر.

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية التي أجريت في هذه الدراسة من قبل جامعة كايو المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC - عدد موافقة: 09221) واتباع المبادئ التوجيهية المؤسسية في التجارب على الحيوانات في جامعة كيو لاستخدام الحيوانات في مجال البحوث. تم عزل العينات البشرية من جيفة التبرع بها لقسم التشريح، جامعة كيو كلية الطب، واستخدمت وفقا للوائح المؤسسية. 1. عزل السمعية بولا وكبسولة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران في وعاء يحتوي على منصة فوق المناشف الورقية غارقة في الأيزوفلورين أو سيفوفلوران حتى تتوقف تهوية الجهاز التنفسي لأكثر من دقائق ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم. كن حذرا لتجنب الاتصال المباشر من الفئران مع مناشف ورقية مبللة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق عرضي صغير في الجانب الظهري من الرقبة وسحب الجلد بعيدا نحو الرأس والذيل باستخدام كلتا اليدين لفضح الأساسي مو الرقبةالأنسجة scle. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع رأس الفئران في منطقة عنق الرحم باستخدام 14 سم مقص جراحي حادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قشر الجلد تماما نحو الأنف. قطع جميع الجلد جنبا إلى جنب مع خطم والقواطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مقص في الفم وقطع العضلات الماضغة في كلا الجانبين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الفك بعناية وإزالة اللسان والفك السفلي معا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص حاد، الجمجمة تقسيم وقاعدة الجمجمة إلى نصفين على طول الطائرة السهمي النصفي (الشكل 1A، B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط، إزالة نصفي الكرة المخية والمخيخ وجذع الدماغ. وتقع الفقاعة السمعية وكبسولة الأفقي إلى المخيخ وجذع الدماغ. لاحظ أن الفقاعة السمعية هي أبعد الجانبية للكبسولة السمعية (الشكل 1C، D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح خارج الفقاعة وكبسولة مع المحيط عظم الجمجمة (الشكل 1E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل العينة إلى صحن يحتوي مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) ودرجة الحموضة 7.4 في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Uالتانجو تشريح المجهر مجهر، واستخدام الملقط لسحب بصرف النظر العظام ومقص المحيطة لقطع الحدود خففت حول الفقاعة وكبسولة (الشكل 1F). العظام المحيطة إزالتها هي قاعدي قذالي (الحدود بطني)، خارج القذالي (-ventro الخلفي الحدود)، فوق القذال (الحدود خلفي)، الجداري، الجدارية (الحدود ظهري)، صدفي (ظهراني الأمامي الحدود)، جناحي وتدي (الحدود الأمامي)، والعظم القاعدي الوتدي (الحدود انتيرو بطني) العظام. لاحظ أن عملية إبري الشكل (SP)، الذي يدعم افتتاح الطبلي من النفير 41، يختلف عن عملية الإبري من العظم الصدغي. </li></ol> 2. عزل السمعية عظيمات: المطرقة، السندان وعظمة الركاب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المطرقة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام كل من مقص صغير وملقط، إزالة جزء من الخارجي الجانبي القناة السمعية إلى الطبلي تلم بحيث الغشاء الطبلي مرئيا (الشكل 2A، B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة جزء من الغشاء الطبلي والعظم الطبلي بالقرب من malleal الناتئ القصير (نتوء الدويري، انظر مناقشة)، سواء على بطني (منقط) والخلفي (#) الجدران (الشكل 2C). وينبغي الآن يتعرض المطرقة والموترة للطبلة العضلات (الشكل 2D، E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع المطرقة (الشكل 2F) وقطع العضلة الموترة للطبلة مع حافة مشطوف من 27 إبرة G (الشكل 2G). لاحظ أن المقبض malleal تعلق بحزم لغشاء الطبل، كما هو الحال في غيرها من الثدييات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الغشاء الطبلي بعناية من المقبض، الذي لا يزال هشا. إزالة العظم الطبلي للكشف عن عظيمات السمع الثلاث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلخل في المطرقة من سندان في مفصل عظيمي (الشكل 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل المطرقة التي كتبها كسر عملية الأمامية في goniale. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سندان وعظمة الركاب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل رانه سندان بقطع في الرباط الخلفي للسندان في الساق قصيرة (الشكل 3A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الركابي بقطع الشريان الركابي قرب الركابي مع حافة مشطوف من 27 إبرة G (الشكل 3B، C). إذا لزم الأمر، وقطع في وتر العضلة ركابي في عملية العضلات من الركابي مع الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال ابرة الخياطة (أو دبوس بمناسبة) في الثقبة المسد من الركابي ويرفع الركابي. بعد إزالة الركابي، ينبغي أن يكون فتح نافذة بيضاوية واضحة للعيان (الشكل 3D). </li></ol></li></ol> 3. تضمين من السمعية بولا وكبسولة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مبنية كتل البارافين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الفقاعة وكبسولة كما هو موضح في القسم 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهاية الأمامي من الفقاعة (عملية إبري الشكل) قبالة مع مقص، وتزج الفقاعة وكبسولة في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) في برنامج تلفزيوني في 4 درجاتC، والسماح تثبيتي للدخول في الفقاعة. إذا يصبح الهواء المحبوس في الفقاعة، إزالته مع الإبر والمحاقن. ترك الفقاعة وكبسولة في تثبيتي في 4 درجات CO / N على محور دوار أنبوب. تحذير: PFA غير سامة، ويجب أن يتم التعامل معها بعناية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اغسل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يزيل الكلس الفقاعة وكبسولة لمدة أسبوع في 4 درجات مئوية 10٪ ethylenediaminetetraacetic حامض الصوديوم الملح ثنائي الهيدرات (EDTA-2NA)، و 100 قاعدة ملي تريس، ودرجة الحموضة 7.0، في أنبوب مل 2. تغيير المخزن المؤقت كل يوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني. العينات يمكن تخزينها في 70٪ من الإيثانول في الماء عند 4 درجات مئوية. اختياريا، ونقل إلى 70٪ من الإيثانول من خلال سلسلة الكحول متدرج (30٪، 50٪، 70٪ في الماء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على معالج الأنسجة، ويذوى العينات في سلسلة متدرجة من الحلول الإيثانول (70٪، 2X 95٪، 3X 100٪، كل ح 1)، واضحة في الزيلين (4X، كل ح 1 في 40 درجة مئوية)، والتسلل العينات مع المنصهر شمع البارافين 42. اختياريا، زيلين البديل مع clearin الأنسجة التجاريز حل (مثل HISTO-واضح). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفريغ عينات من المعالج، وإزالتها من الكاسيتات الخاصة بهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الأنسجة تضمين نظام وحدة التحكم، مكان. نماذج في قوالب مليئة شمع البارافين المنصهر. انتقل إلى تضمينها (القسم 4). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مبنية بنات المجمدة (طريقة فيلم كاواموتو في) 43 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الفقاعة وكبسولة كما هو موضح في القسم 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهاية الأمامي من الفقاعة (عملية إبري الشكل) قبالة مع مقص، وتزج الفقاعة وكبسولة في تثبيتي (2٪ أو 1٪ PFA بدلا من 4٪ في برنامج تلفزيوني للحفاظ على استضداد) في 4 درجات مئوية. إذا تم المحاصرين الهواء في الفقاعة، إزالته باستخدام الإبر والمحاقن. ترك الفقاعة وكبسولة في تثبيتي في 4 درجات CO / N على محور دوار أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الفقاعة وكبسولة بسرعة في برنامج تلفزيوني وتزج فورا في السائل مركب تضمين البرد في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هام: إزالة فقاعات الهواء وجدت في منتصفوالأذن الخارجي من خلال التطلع بواسطة إبرة، وذلك بإضافة مجمع تضمين بالملقط. انتقل إلى تضمينها (القسم 4). </li></ol></li></ol> 4. توجيه العينة وتضمينها يجب أن يكون ترتيب الفقاعة كلها، وكبسولة في اتجاه معين خلال تضمين لخفض أقسام المرجوة: ملاحظة. وتستخدم الإجراءات المبينة أدناه لقسم المطرقة في مختلف التوجهات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطولي (مجاور للسهمي) باجتزاء من المطرقة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجانب الوحشي من الفقاعة أو الصماخ السمعي الخارجي عليها في البارافين الدافئة (أو مركب تضمين البرد). ضبط اتجاه بحيث الرقبة ومستعرضة الصفيحة من المطرقة موازية لأسفل الأفقي للطبق التضمين (الشكل 4A - C). لاحظ أن الغشاء الطبلي يميل بزاوية مقدارها حوالي 30 درجة إلى رأسي في الرأس الماوس (الشكل 4A، الشكل 59 في كامبن <suص&gt; 44). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باجتزاء الأفقي للالمطرقة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع قمة ظهري أفقيا في البارافين الدافئة (أو مركب تضمين البرد). ضبط اتجاه الفقاعة وكبسولة بحيث الرقبة ومستعرضة الصفيحة من المطرقة هي عمودي إلى أسفل الطبق التضمين (الشكل 4D - F). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باجتزاء الأمامي (المقاطع العرضية) من قبضة القص والطبلي غشاء 5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المقبض malleal في البارافين الدافئة (أو مركب تضمين البرد) بحيث يكون عموديا إلى أسفل الطبق تضمين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تهدئة كتلة لدرجات الحرارة المناسبة لتصلب شمع البارافين على الأنسجة تضمين نظام وحدة (بدلا من ذلك، استخدم مركب تضمين البرد في الجليد حمام جاف / الهكسان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كتلة الأنسجة عملية وقطع المقاطع باستخدام الإجراءات الروتينية. على سبيل المثال، أقسام صمة عار البارافين مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; #38؛ E)، سفرانين O (لغضروف)، أو مقاومة للطرطرات حمض الفوسفاتيز (TRAP) النشاط (لالآكلة) 3، أو عن طريق المناعية. cryosections Undecalcified هي مناسبة لوصفها العظام باستخدام fluorochromes 14، الأليزارين تلطيخ الأحمر للكالسيوم، والمناعي +42. </li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

هنا، فإننا نقدم وسيلة مفيدة لعزل الفقاعة السمعية وكبسولة في الفئران بعد الولادة. قبل P12، أنسجة هشة ويمكن أن تصبح التالفة أثناء العزلة. بعد P12، الفقاعة السمعية وكبسولة يمكن عزلها عن الأنسجة المحيطة بها. تشريح الفقاعة من الرأس قبل باجتزاء ديها العديد من المزايا. أولا، التجويف ما بعد الولادة ونمو الفقاعة السمعية تحدث معظم بنشاط من P6 فصاعدا وهي كاملة من قبل P14 50. يتم استبدال الأنسجة الوسيطة بين الغشاء الطبلي وجدار القوقعة عن طريق الجو من خلال عملية التجويف. الهواء الناجم عن ذلك في تجويف الأذن الوسطى يمكن أن تعوق الاتصال بين الأنسجة والسوائل أثناء التثبيت، وزوال الكلس والتضمين. فمن الأسهل لإزالة الهواء من الفقاعة السمعية معزولة بقطع النهاية (عملية إبري الشكل) الأمامية بدلا من محاولة القيام بذلك في الفقاعة unisolated. ثانيا، توجه المطرقة (والغشاء الطبلي) ليس الرأسيفي الرأس. ولذلك فمن الأسهل إلى قسم المطرقة في الطائرات المطلوب عن طريق دمج الفقاعة السمعية معزولة وكبسولة في اتجاه معين. مرة واحدة معزولة، الفقاعة السمعية وكبسولات مفيدة للعديد من التحليلات. على سبيل المثال، يمكن أن ارتفاع قرار الأشعة السينية الصغرى CT كشف العظام المجهرية التشكل مثل الشعيرات الدموية المكونة للعظم في المطرقة 14. وstereofluorescence تشريح المجهر هو أداة قوية لتصور الهياكل في تقييم الفئران مراسل معربا عن البروتينات الفلورية في الوسط أو الداخلية الأذن 33. بالإضافة إلى ذلك، مختلف في الجسم الحي أو خارج الجسم الحي مضان طرق وضع العلامات وكله جبل كشف المناعي يمكن الاضطلاع بها. ضوء ورقة مضان المجهر مفيد أيضا لتحليل ثلاثي الأبعاد-51. وإن لم يكن هو موضح هنا، والهياكل التشريحية المختلفة المرتبطة الفقاعة السمعية وكبسولة مثل الأعصاب الطرفية، والأوعية الدموية، والغشاء الطبلي في الأذن الوسطى كما يمكن تقييمها باستخدام هذا البروتوكول. لاحظ أن باجتزاء البارافين يتطلب زوال الكلس للأنسجة العظام قبل التضمين، وبالتالي لا يسمح تحليل تمعدن. على النقيض من ذلك، فإن طريقة فيلم كاواموتو 43 المستخدمة في إعداد أقسام المجمدة يمكن أن يؤديها من دون زوال الكلس ومناسبة للدراسات تمعدن استخدام في تقنيات العظام وضع العلامات الجسم الحي أو تلطيخ خاص مثل الصبغ الأحمر تلطيخ. ينبغي أن يكون الأمثل ظروف البرد باجتزاء .. وفقا القائم على أساس السن الماوس. على سبيل المثال، ينصح درجة حرارة أقل باردة داخل الغرفة ناظم البرد لعينات الماوس القديمة للحد من الأضرار التي لحقت أقسام. وفي الماوس، المصطلح الصحيح للنتوء بارز شبه كروية من المطرقة هو &quot;نتوء الدويري&quot;. ومع ذلك، فإن مصطلح &quot;خنصر الناتئ&quot; وقد استخدم على نطاق واسع للإشارة إلى نتوء الدويري لمزيد من اللعقدين من الزمن، وخاصة بين الماوس علماء البيولوجيا التطورية 16،20،22-25. &quot;الناتئ القصير&quot; يشير أصلا إلى عملية الجانبية (الناتئ الوحشية)، والذي يختلف من نتوء الدويري. في البشر، وهي عملية تشبه الجانبية إسقاط مخروطي طفيف تشكل الخط العام للمرفق إلى غشاء الطبل، وتمتد من قبضة القص (لم أر في الشكل 6B، عرض وسطي). في الفئران، وعملية الجانبية هي أيضا إسقاط المقبض في الطرف المقابل لبجرة 48. في الجزء الرخو من الغشاء الطبلي فوق عملية الجانبية للالمطرقة. نتوء دائري ليست واضحة في المطرقة الإنسان.

وعظيمات السمع الثلاث في الأذن الوسطى، وهي المطرقة، السندان، والركابي، تشكل سلسلة السمعية الثدييات محددة التي تنقل الصوت من الغشاء الطبلي إلى الأذن الداخلية، أو القوقعة 1،2. السمع وظيفة يمكن تقييمها في الفئران عن طريق قياس سمعي جذع الاستجابة (ABR) عتبات 3-6، واهتزاز المطرقة وراء يمكن رصدها باستخدام الليزر دوبلر Vibrometry (LDV) 7 الغشاء الطبلي. من خلال الجمع بين ABR، LDV، والقياسات تشويه المنتج Otoacoustic الانبعاثات (DPOAE)، وفقدان السمع التوصيلي يمكن أن يكون هناك تمييز من ضعف الحسي 8. هناك حاجة إلى نماذج حيوانية من الظروف الأذن، نظرا لأهمية السمع وصحة الأذن إلى رفاه المرضى من جميع الأعمار. على سبيل المثال التهاب الأذن الوسطى هو التهاب الأذن شائعة جدا ينظر في الرضع والأطفال الإنسان، والحادة، التهاب الأذن الوسطى الحاد ويمكن أن يحدث مضاعفاته إذا كان كونديلم يتم علاجه نشوئها مع مضادات الجراثيم المناسبة 9. قد تكون نماذج الماوس من التهاب الأذن الوسطى مفيدا في فهم المرضية وفي تطوير علاجات 10،11. العظيمات الفئران، التي تتشكل (باستثناء الجزء goniale من المطرقة) التي تعظم غضروفي 12،13، هي ذات أهمية كبيرة لدراسة استقلاب العظام والتشكل. أولا، صغر حجمها يسمح تحليل عالية الدقة للعظام مع السمحاق سليمة باستخدام الأشعة السينية أو المجهري مضان 14. ثانيا، الشاذة استقلاب العظام، مثل المفرط أو نقص ارتشاف العظام، أو تفاعلات ضعاف بين الخلايا العظمية 15، يمكن تحليلها كمساهم محتمل لفقدان السمع 3،4،7. وذكر الثالث، غير طبيعي التشكل عظيمات في الفئران عدة جينات ناقصة، مثل الحيوانات التي تفتقر إلى Hoxa2 16-19، 20-22 الجينة Msx1، Prrx1 23، Goosecoid(GSC) 24،25، Bapx1 13، Tshz1 26، Dusp6 (Mkp3) 27، رأس (وتد) 28، Fgfr1 29، وهرمون الغدة الدرقية مستقبلات (Thra، Thrb) 5، Bcl2 30 وغيرها 1،31، أو في الفئران overexpressing Hoxa2 32. وأخيرا، على الرغم من صغر حجمها، والهياكل المرتبطة عظيمات مثل العضلات والمفاصل 33 34،35 يمكن الوصول إليها. العظيمات الماوس هي أصغر من عظيمات الإنسان، ولكن من الجدير بالذكر أن الأذن الوسطى الماوس ليست نسخة مصغرة من نظيرتها الإنسان. على سبيل المثال، في الفئران، الشريان الركابي، الذي يمر من خلال حلقة من الركابي، استمر طوال حياته 36، في حين أنه في البشر، يختفي الشريان الركابي الجنينية أثناء الحمل. وبالإضافة إلى ذلك، فإن مورفولوجية المطرقة الماوس يختلف من عشرالبريد العظم البشري (أنظر الشكل 6). في الفئران، الفقاعة السمعية (طبلي) يرفق تجويف الأذن الوسطى مليئة بالهواء، في حين أنه في البشر، وخلايا الخشاء الهواء يتكون من العظام التربيقي في العظم الصدغي ويوجد في عظيمات بدلا من الفقاعة 37. في كلا النوعين، وكبسولة السمعية (الكبسولة، التي التيه العظمي) يرفق القوقعة والقنوات الهلالية في الأذن الداخلية. وقد استعرضت علم الأحياء التطوري المقارن والأذن الوسطى على نطاق واسع 38-40. بروتوكول الواردة أدناه أولا يصف كيفية تشريح خارج الفقاعة السمعية وكبسولة، والتي تتكون أساسا من الأذن الوسطى والأذن الداخلية، على التوالي. يوضح هذا البروتوكول أيضا كيفية عزل المطرقة، السندان والركابي من الفقاعة السمعية. وأخيرا، فإنه يظهر كيفية توجيه الفقاعة السمعية وكبسولة لتضمين استعدادا لباجتزاء الأنسجة من عظيمات السمع.

<table><tbody><tr><td><قوية >أدوات / معدات < / قوية ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>منشفة ورقية</td> يمكن شراء <td>703347</td><td>من</td><td>بائعين آخرين</td></tr><tr><td>جرة زجاجية</td><td>مختلفة</td><td></td> يمكن <td>شراؤها من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>مقص جراحي 14 سم</td><td>أدوات العلوم الدقيقة (FST)</td><td>يمكن شراء 91400-14</td><td>من بائعين</td></tr><tr><td>آخرين مقص دقيق للغاية - أدوات</td><td>العلوم الدقيقة (FST.)</td><td>14084-08</td><td>يمكن شراؤها من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>ملقط ناعم بزاوية 45&deg; < / ب ></td> <td>أدوات العلوم الدقيقة (FST)</td><td>11063-07</td><td>يمكن شراؤها من بائعين آخرين تشريح</td></tr><tr><td>المجهر</td><td>نيكون</td><td>SMZ800N</td><td>للتشريح الروتيني</td></tr> تشريح <tr><td>المجهر</td><td>نيكون</td><td>SMZ18</td><td>للأفلام&nbsp;</td></tr><tr><td>حقن إبرة 27 جم</td><td>terumo</td><td>nn-2719S</td><td></td></tr><tr><td>حقنة (1 مل)</td> <td>TERUMO</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>دبوس وسم</td><td>أنبوب دوار مختلف</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RT-50</td><td>TAITEC</td><td>0000165-000</td><td>يمكن شراؤها من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>http://www.leicabiosystems.com/histology-equipment/cryostats/details/product/leica-cm3050-s/</td></tr> <tr><td>TC-65 شفرة التنغستن</td><td>Leica</td><td>14021626379</td><td>لطريقة Kawamoto الصلبة</td></tr><tr><td>حاويات غير القابل للصدأ</td><td>Leica</td><td></td><td>لطريقة Kawamoto الثابتة</td></tr><tr><td>نوع Cryofilm IIC</td><td>Leica</td><td></td><td>لطريقة Kawamoto</td></tr><tr><td>القوية Silane المغلفة الشريحة (New Silane II)</td> <td>Muto </td> يمكن <td>شراء 511617</td> Pure Chemicals <td>من بائعين آخرين يمكن</td></tr><tr>شراء<td>غطاء زجاج</td><td>Matsunami</td><td></td><td>من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>يمكن شراء معالج المناديل</td><td>Sakura Finetek</td><td>VIP-5</td><td>من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>نظام وحدة التحكم في تضمين الأنسجة</td><td>Sakura Finetek</td><td>Tissue-Tek TEC 5 & nbsp ؛</td><td>يمكن شراؤها من بائعين آخرين</td></tr>يمكن <tr><td>شراء ميكروتوم منزلق للبارافين</td><td>ياماتو كوهكي الصناعي</td><td>REM-710</td><td>من بائعين آخرين</td></tr><tr><td>Path Blade + pro للأنسجة الصلبة</td><td>Matsunami</td><td>PB3503C</td><td>لقسم البارافين</td></tr><tr><td>Micro-CT</td><td>RIGAKU</td><td>R_mCT2</td><td>مجهر</td></tr><tr><td>http://www.rigaku.com/en مضان</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td></td></tr><tr><td>Name< / قوي> </td><td>Company</td><td> Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Recodes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Maruishi pharmaceutical Co. Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>wako</td><td>191-01665</td><td>for PBS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>wako</td><td>285-14</td><td>for PBS</td></tr><tr><td>Na2HPO4 12H2O</td><td>wako</td><td>196-02835</td><td>ل PBS</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>wako</td><td>287-21</td><td>ل PBS</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA، EM Grade)</td><td>TAAB</td><td>P001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-2Na</td><td>wako</td><td>15111-45</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1503-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Super Cryoembedding متوسط</td><td>Leica</td><td></td><td>لطريقة Kawamoto الصلبة</td></tr> الثلج <tr><td>الجاف</td><td>مختلف</td><td></td><td>لطريقة Kawamoto الصلبة</td></tr><tr><td>Hexane</td><td>wako</td><td>080-03423</td><td>لطريقة Kawamoto الثابتة</td></tr> Super <tr><td>Cryomouting متوسط النوع R2</td><td>Leica</td><td></td><td>لطريقة Kawamoto الثابتة</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Sakura Finetek</td><td>781001A0107</td><td></td></tr><tr><td>Histo-Clear</td><td>NDS</td><td>HS-200</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>DOJINDO</td><td>340-00433</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin &nbsp ؛</td><td>واكو</td><td>131-09665</td><td></td></tr><tr><td>إيوسين</td><td>واكو</td><td>051-06515</td><td></td></tr></tbody></table>

تشريح السمعية بولا بعد الولادة في الفئران: عزل العظام الأذن الوسطى وتحليل النسيجي

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

في معظم الثدييات، عظيمات السمع في الأذن الوسطى، بما في ذلك المطرقة، السندان والركابي، هي أصغر العظام. في الفئران، وهو هيكل عظمي يسمى الفقاعة السمعية منازل للعظيمات، في حين أن كبسولة السمعية يرفق الأذن الداخلية، وهي القوقعة والقنوات الهلالية. العظيمات الفئران ضرورية لسماع وبالتالي من مصلحة كبيرة للباحثين في مجال طب الأذن والحنجرة، ولكن من عملية التمثيل الغذائي، والتنمية، وتطور وذات أهمية كبيرة لغيرها من المجالات. تغيير استقلاب العظام يمكن أن تؤثر على وظيفة السمع في فئران بالغة، ومختلف الفئران الجينات نقص تظهر التغيرات في التشكل من عظيمات السمع في الرحم. على الرغم من عظيمات السمع الفئران هي صغيرة، والتلاعب بهم ممكنا إذا كان أحد يفهم ميولهم التشريحية وهيكل 3D. هنا، نحن تصف كيفية تشريح الفقاعة السمعية وكبسولة من الفئران بعد الولادة ثم عزل عظيمات الفردية عن طريق إزالة جزء من الفقاعة. نحن أيضا مناقشة كيفية مالسرير الفقاعة وكبسولة في اتجاهات مختلفة لتوليد البارافين أو أقسام المجمدة مناسبة لإعداد المقاطع الطولية الأفقية أو الجبهي من المطرقة. وأخيرا، فإننا تعداد الاختلافات التشريحية بين الفأر والإنسان عظيمات السمع. أن هذه الأساليب يكون مفيدا في تحليل الجوانب المرضية والتنموية والتطورية للعظيمات السمع والأذن الوسطى في الفئران.

ويعرض هذا البروتوكول وسيلة لعزل عظيمات من الفقاعة الماوس السمعية. أولا، يتم تشريح الفقاعة وكبسولة من كقطعة واحدة من الجمجمة (الشكل 1). ثم يتم استخدام الفقاعة تشريح لإعداد المطرقة (الشكل 2) وسندان والركابي (الشكل 3). معالم الفقاعة السمعية وكبسولة هي عملية إبري الشكل في نهاية الأمامي من الفقاعة، وقمة ظهري، قناة الهلالية الأمامية، والحفرة قرب المقوس (الشكل 1F). Microcomputed التصوير المقطعي (CT) والتصوير يكشف عظيمات في الفقاعة السمعية فضلا عن التوجهات الأمثل لباجتزاء الطولي والأفقي تلك العظيمات (الشكل 4). لباجتزاء البارافين الطولي للالمطرقة، وdecalcified الفقاعة وكبسولة في EDTA عند 4 درجة مئوية لمدة أسبوع واحد، جزءا لا يتجزأ من السلطة الفلسطينيةكتلة RAFFIN في التوجه هو مبين في الشكل (4) A - C، مقطوع في 4 ميكرون، ثم ملطخة باستخدام H &amp; E. والمطرقة تعلق على الغشاء الطبلي في الفقاعة السمعية وكشفت التحجر غضروفي المستمر في P14 (الشكل 5A). لتصور تشكيل العظام الجديدة، calcein (30 ميكروغرام / غرام من وزن الجسم) تم حقن peritoneally إلى الماوس P20، وعزلت الفقاعة وكبسولة بعد 24 ساعة عند P21. وكان جزءا لا يتجزأ من العينة دون زوال الكلس المجمدة ثم cryosectioned في 6 ميكرون باستخدام الفيلم لاصقة على أساس طريقة كاواموتو 43. بعد تلطيخ النووي مع دابي (4، 6 diamidino-2-phenylindole)، وقد لوحظ قسم تحت المجهر مضان. إشارات Calcein (الأخضر) كشفت تكوين عظام جديدة في المطرقة (م)، الفقاعة وكبسولة (الشكل 5B). لباجتزاء الأفقي للالمطرقة، وجزءا لا يتجزأ من الفقاعة السمعية معزولة عن ماوس البالغ من العمر 5 أسابيع المجمدة دون زوال الكلس (لالتوجه انظر الشكل 4D - F)، cryosectioned في 6 ميكرون باستخدام طريقة كاواموتو، وملطخة باستخدام H &amp; E. يظهر باجتزاء الأفقي للخنصر malleal الناتئ (ام. بي) أيضا القوقعة (الشكل 5C). وجهة نظر وسطي من عظيمات السمع الصحيحة معزولة عن ماوس P31 يظهر المظاهر التقليدية للالمطرقة الماوس، وهما &quot;مزلق-النورس يشبه الجناح&quot; (أو الفارسي 45 مثل السيف) المقبض، وهو الناتئ القصير بارز (نتوء الدويري انظر مناقشة)، والصفيحة مستعرضة (الشكل 6). لاحظ أن عملية الأمامي (الناتئ الأمامي) وقد اصيب بكسر في إجراء تشريح حول goniale وفصلت من الحلقة طبلي (ectotympanic). يسلك هذه عينة تمثيلية المفصل السنداني المطرقي سليمة بين المطرقة والسندان، في حين خلع المفصل السنداني الركابي. الإدراج الوترية في malleal والعمليات العضلات ركابي هي اكتشاف (الشكل 6A، العلامات النجمية). الشكل 6B يقارن الماوس وعظيمات السمع الإنسان في نفس التكبير. الاختلافات بين الأنواع، وغيرها من حجم، وتشمل ما يلي. المقبض malleal هي الجناح تشبه في الفئران ولكن مثل النادي في البشر. الزاوية بين محور التشريحية (أو محور الدوران، والخط من خلال عملية الأمامية من المطرقة وعملية قصيرة من سندان) والمقبض هو أصغر بكثير في الفئران وهما مواز تقريبا، في مقابل ما يقرب من عمودي في البشر 6،46-48. في عظيمات الإنسان، دراسات vibrometric تكشف أن المشترك-incudo الكعبية هو المحمول بدلا من الثابت وظيفيا 49. والمطرقة الماوس المعارض واسعة، ورقيقة، ومسطحة مستعرضة الصفيحة يست واضحة في البشر 47. في الفئران، الأمامي الناتئ الصمامات العظام غشائي، وهي goniale وطبلة الأذنج عصابة، بينما في البشر يتم تقليل الأمامي الناتئ إلى الشوكة صغيرة من العظام 41. والركابي من الفئران والبشر يختلف أيضا: في الفئران والساق الأمامية منحني والساق الخلفية هو أكثر مباشرة في حين أنه في البشر، والساق الأمامي هو أكثر مباشرة من الساق الخلفية. ومن الجدير بالذكر أن رئيس المطرقة بالنسبة لحجم الجسم وتوسيع نطاق واسع في أنواع مثل الخلد الذهبي، مما يدل على التباين الكبير في العلاقات المغايرة النسبية من &quot;أصغر&quot; عظام 48. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig1.jpg" /> الشكل 1. تشريح السمعية بولا وكبسولة. (أ) جمجمة الفأر P31 ينقسم إلى اليمين واليسار نصفين. A، الأمامي. P، الخلفي. L، غادر. R، أليس كذلك. (ب) سطح الإنسي من النصف الأيمن من رئيس البشرة شطر. CX، القشرة الدماغية. البنك التجاري، المخيخ. إفطار، المخnstem. D، الظهرية. V، بطني. (ج) إزالة الدماغ مع ملقط. (D) عرض الإنسي من الكبسولة السمعية في الجمجمة الصحيحة. قمة الظهرية (السهام) تقع بين الحفرة المتوسطة الجمجمة (ألف قدم مكعب) والخلفي الحفرة القحفية (الحزب الشيوعي الفرنسي) وتفصل ظهراني الأمامية والأسطح ventro الخلفي من الكبسولة السمعية. شريط الحجم، 2 مم. (E) التكبير العالي للالفقاعة السمعية وكبسولة (عرض وسطي). شارك، القوقعة. سابعا، العصب الوجهي. ثامنا، الدهليزي القوقعي العصبية. AC، الأمامي (متفوق) القناة الهلالية. SF، الحفرة تحت المقوسية، الذي يضم النديفة المخيخ. شريط الحجم، 1 مم. (F) صورة مجهرية من الفقاعة السمعية معزولة وكبسولة (عرض وسطي). يرة سورية، وعملية إبري الشكل. شريط الحجم، 1 مم. (A - E)، P31 الماوس. (F)، P33 الماوس. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig2.jpg" /> الشكل 2. تشريح المطرقة. (أ) عرض بطناني من الفقاعة السمعية المناسبة وكبسولة. والطبلي تلم (ST، السهم متقطع) هو موقع الحجز على الغشاء الطبلي. الوحشي العظام إلى ST هو جزء من الأذن الخارجية، والإنسي العظام إلى ST يشكل أرضية تجويف الأذن الوسطى. A، الأمامي. P، الخلفي. D، الظهرية. V، بطني. (ب) عرض بعد إزالة القناة السمعية الخارجية للكشف عن غشاء الطبل (TM) بما فيها الجزء الرخو (الجبهة الوطنية) والجزء الموتر (حزب العمال). (ج) إزالة أجزاء من العظم الطبلي (الخطوط المنقطة و#) بالقرب من malleal الناتئ القصير (ام. بي). م، المطرقة، ملي، المقبض malleal. السهم، فقاعة الهواء في تجويف الأذن الوسطى ينظر من خلال الغشاء الطبلي. (D) المطرقة مكشوف. وأشار رئيس المطرقة. منقطخط يشير إلى السطح المفصلي للسندان. (E) وتر العضلة الموترة للطبلة (تي تي) تعلق على المطرقة. يتم سحبها (F) وموترة الطبلة عندما يتم رفع المطرقة. * عملية العضلات. يتم قطع (G) الموترة للطبلة باستخدام إبرة. (H) ثلاثة عظيمات السمع بعد إزالة الغشاء الطبلي. هو خلع مفصل-incudo الكعبية. م، المطرقة، أنا، سندان، الصورة، الركابي، الذهاب، goniale (تنصهر في المطرقة وطبلي حلقة، TR). جميع الحانات الحجم، 0.5 مم. (A، H)، P33 الماوس. (B - G)، P31 الماوس. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig3.jpg" /> الشكل 3. تشريح سندان وعظمة الركاب. (A) سندان والركابي بعد إزالة المطرقة. الشريان الركابي (SA) يمر عبر الركابي (ق). خط منقط يشير إلى السطح المفصلي للسندان. لاحظ أن الساق قصيرة (ICB، الساق القصيرة) لسندان (ط) هو ثابت من الرباط الخلفي (لا يظهر). النجمة، عملية العضلات من الركابي. (ب) الركابي بعد إزالة سندان. يستخدم طرف إبرة لقطع الشريان الركابي (SA). السهم، واتجاه تدفق الدم. خط منقط يشير سطح مفصلي للالركابي. إزالة (C) الشريان الركابي من الركابي. X يشير إلى نهاية قطع الشريان الركابي (SA). (D) نافذة بيضاوية (آه، النافذة البيضوية أو الدهليز fenestra) مرئيا بعد إزالة الركابي. RW، نافذة مستديرة (مستديرة fenestra أو قوقعة fenestra). أشرطة النطاق، 0.5 مم. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا</a>الشكل. <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig4.jpg" /> الشكل 4. توجيه السمعية بولا وكبسولة خلال تضمينها لالطولي (مجاور للسهمي، A - C) وأفقي (D - E) باجتزاء من المطرقة. (A - C) والرقبة ومستعرضة الصفيحة من المطرقة وضعت بالتوازي مع الجزء السفلي من تضمين الطبق. (أ) الجانب الشخصي: الصغرى CT الصورة لتظهر التضمين من المطرقة الحق في الفقاعة (pseudocolored الأزرق). وpseudocolored والمطرقة والسندان الأخضر. خط متقطع، المطلوب الطائرة القطع. خط الصلبة، أسفل تضمين الطبق. م، المطرقة، النصال، الظهرية قمة. M، سطي. L، الأفقي، D، الظهرية. V، بطني. (ب) أعلى عرض: مايكرو-CT الصورة. لاحظ أن نهاية الأمامي من (عملية إبري الشكل) الفقاعة تمت إزالة. ط، سندان. (C) أعلى عرض: صورة مجهرية (التي اتخذت معمرشح اللون). AC، الأمامي (متفوق) القناة الهلالية. سادس، الحفرة تحت المقوسية. يرة سورية، وعملية إبري الشكل. A، الأمامي. P، الخلفي. D، الظهرية. V، بطني. (D - F) وخنصر اليد الناتئ من المطرقة يتم وضع عمودي على الجزء السفلي من تضمين الطبق. (D) منظر جانبي: مايكرو-CT الصورة لتظهر التضمين من المطرقة الصحيحة. خط متقطع، المطلوب الطائرة القطع. خط الصلبة، أسفل تضمين الطبق. (E) أعلى عرض: مايكرو-CT الصورة. ملي، المقبض malleal. (F) أعلى عرض: صورة مجهرية (التي اتخذت مع مرشح اللون). الحانات الحجم، 1 مم. تم الحصول عليها صور مايكرو-CT في قرار فوكسل من 5 ميكرون، كما هو موضح سابقا 7. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig5.jpg" /> Figure 5. علم الأنسجة. (أ) H &amp; E تلطيخ. المقطع الطولي (مجاور للسهمي) من المطرقة جزءا لا يتجزأ من البارافين الصحيحة (م) في الفقاعة السمعية (الخط المنقط) في P14. TM، الغشاء الطبلي. (ب) Calcein العظام وصفها. المقطع الطولي للالمجمدة، المطرقة اليسرى undecalcified (م) في الفقاعة السمعية في P21. مباين، دابي. (C) H &amp; E تلطيخ. القسم الأفقي للخنصر اليد المجمدة، undecalcified ترك malleal الناتئ (ام. بي) في الفقاعة السمعية وكبسولة (الماوس البالغ من العمر 5 أسابيع). شارك، القوقعة. الحانات الحجم، 1 مم. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (6)" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig6.jpg" /> الشكل 6. الإنسي منظر السمعية العظيمات. (A) عظيمات السمع رايت P31 الماوس. A، الأمامي. P، الخلفي. D، الظهرية. V، بطني. شريط الحجم، 1 مم. المطرقة الرأس (كابوت للمطرقة، رؤيس المطرقة)؛ العنق (عنق المطرقة)؛ الصفيحة (الصفيحة مستعرضة)؛ ملي (المقبض المطرقة)؛ النجمة السوداء (عملية العضلات من المطرقة)؛ MPA (الناتئ الأمامي، الناتئ الناحلة)؛ MPB (الناتئ القصير)؛ هيئة سندان (كوربوس سندان)؛ ICB (الساق القصيرة، الساق قصيرة، عملية قصيرة)؛ ICL (الساق الطويلة، الساق الطويل، عملية طويلة)؛ IPL (الناتئ العدسي، عملية عدسي، سيلفيان نتوء)؛ رئيس الركابي (رأس الركاب)؛ النجمة البيضاء (عملية العضلات من الركابي)؛ هيئة السلع التموينية (الساق الأمامية، الساق الأمامية)؛ اللجنة الدائمة (الساق الخلفي، الخلفي الساق)؛ قاعدة (للركاب الأساس، الصفيحة القدمية)؛ قوات العمليات الخاصة (الثقبة المسد، الثقبة بين السويقات). (ب) عظيمات السمع حق أنثى الإنسان البالغ من العمر 76 عاما (بالإذن من قسم التشريح، كيو كلية الطب بجامعة). وعظيمات من الماوس P31 (أسفل اليمين) يتم تصوير في نفس التكبير الذي استعمل لعظيمات الإنسان. المنحنياتوتشير السهام إد الزاوية بين محور التشريحية والمقبض (الخطوط المنقطة). شريط الحجم، 2 مم. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

نقدم بروتوكولا لعزل الفقاعات السمعية والكبسولة وعظيمات الفئران بعد الولادة للتحليل الكامل والنسيجي.

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

الهدف العام من إجراء التشريح هو عزل الفقاعات السمعية والكبسولة ، تليها العظيمات السمعية الفردية من الفئران بعد الولادة لمختلف التحليلات الكاملة والنسيجية. يمكن استخدام هذه الطريقة لمعالجة الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا الجرح ، مثل آليات التشكل الضعيف ، أو التعظم الغضروفي ، أو ضعف التمثيل الغذائي المعدني. تعتمد هذه الطريقة على معرفة متعمقة بالتفاصيل التشريحية.بشكل عام ، قد يكافح الأفراد الجدد على الفأر كنظام بيولوجي ، لأن معرفتهم بالأذن الوسطى البشرية قد لا تكون قابلة للتطبيق على نظيره في الفأر. سيوضح الإجراء أياكو ساكاموتو ، فني في مختبري. ابدأ بوضع الفقاعات السمعية والكبسولة مع عظم الجمجمة المحيطة في طبق عينة يحتوي على درجة الحموضة المالحة المخزنة بالفوسفات 7.4 في درجة حرارة الغرفة.تحت مجهر تشريح مجهر ، حدد عظام الجمجمة المحيطة بالكبسولة السمعية كما هو موضح هنا. استخدم مجموعة واحدة من الملقط للإمساك بالجمجمة المحيطة ، ومجموعة ثانية لسحب العظم الظوادي والقذالي. ثم استخدم الملقط لسحب العظام بين الجداريات والجدارية برفق بعيدا عن الكبسولة وإزالتها عند فكها بالكامل.بعد ذلك ، اسحب الحرشفية بعيدا عن الفقاعات والكبسولة وقم بإزالة العظام والأنسجة الرخوة برفق. بعد ذلك ، أمسك الأذن الخارجية واقلب العينة للكشف عن الجانب الإنسي. بعد ذلك ، اقلب العينة 180 درجة ، وأمسك الكبسولة واسحب الأنسجة الرخوة المتبقية بعيدا.القمة الظهرية مرئية الآن. في هذه الزاوية ، تظهر بوضوح الأعصاب الوجهية والدهليزية القوقعية في القناة السمعية الداخلية ، والحفرة تحت المقوسة ، والقناة نصف الدائرية الأمامية. عندما تكون القمة الظهرية مائلة نحو قاع طبق التشريح ، تظهر الفقاعات السمعية بوضوح.إذا كان المستحضر مائلا قليلا ، فإن المطرقة مرئية داخل الفقاعة. ابدأ باستخدام الملقط لكسر القناة السمعية الخارجية فوق المطرقة والجانبية للتلم الطبلي. قم بإنشاء فاكتير ثان أمام الأول.ثم قم بإزالة قطعة القناة السمعية الخارجية بحيث يكون الغشاء الطبلي مرئيا. بعد ذلك ، قم بإزالة جزء من الغشاء الطبلي والعظم الطبلي بالقرب من الجرايس المطرقي في كل من الجدران البطنية والخلفية. يجب الآن الكشف عن عضلة المطرقة ، والإنكس ، والركاب ، والعضلة الطبلية الموترة.ارفع المطرقة واقطع عضلة الطبلة الموتر بالحافة المشطوفة لإبرة قياس 27. لاحظ أن المانوبريوم المطرق يلتصق بقوة بالغشاء الطبلي ، كما هو موضح في الثدييات الأخرى. خلع المطرقة من الزنبق في المفصل العظمي عن طريق كسر العملية الأمامية للكعب في goniale.اعزل المطرقة عن الفقاعات السمعية باستخدام الملقط. قم بإزالة الجزء الأكبر من الفقاعة السمعية لفضح النقطة والصفائح. ثم استخدم الحافة المشطوفة لإبرة قياس 27 لقطع الرباط الخلفي للوصرة عند القمة القصيرة.عزل الأنف باستخدام الملقط. اقطع الشريان الثابت بالقرب من الركاب بالحافة المشطوفة لإبرة قياس 27. قم بتدوير العينة بحيث يتم وضع النافذة المستديرة في الأسفل.ثم أدخل إبرة الخياطة في الثقبة السدادية للركاب وارفع الدعامات. بعد إزالة الدعاوى ، يجب أن تكون فتحة النافذة البيضاوية مرئية بوضوح. استخدم إبرة قياس 27 لدفع الركاب بعيدا عن إبرة الخياطة.لبدء تضمين الأنسجة ، استخدم المقص أولا لقطع عملية الشكل الأسلوبي في الطرف الأمامي من الفقاعة. يمكن رؤية القمة المطرقة والظهرية من خلال الجزء المقطوع. اغمر الفقاعات والكبسولة في 1-2٪ بارافورمالدهايد في PBS.إذا كان الهواء محاصرا في الفقاعة ، فقم بإزالته باستخدام إبرة وحقنة. اترك الفقاعات والكبسولة في المثبت عند أربع درجات مئوية طوال الليل على دوار أنبوبي. في اليوم التالي ، اغسل الفقاعات والكبسولة بسرعة في PBS.ثم اغمر على الفور في مركب سائل مدمج بالتبريد عند أربع درجات مئوية. من الشائع أن تتشكل فقاعات الهواء في مركب التضمين بالتبريد على مستوى الأذن الوسطى والخارجية. قم بإزالة فقاعة الهواء من الأذن الوسطى من خلال الشفط بإبرة.استخدم نفس التقنية لفقاعة الهواء في الأذن الخارجية. بمجرد إزالة جميع فقاعات الهواء ، قم بتوجيه الأنسجة وفقا لنوع الأقسام التي سيتم الحصول عليها. يمكن بعد ذلك دمج الأنسجة في كتل مجمدة قبل التقسيم.تظهر هذه الصورة تلطيخ H و E لقسم البارافين الطولي من المطرقة المنزوعة الكلس ، المشار إليها بالحرف M ، والفقاعات السمعية والكبسولة من فأر P14. يشار إلى الغشاء الطبلي بالحرف TM. تظهر هذه الصورة وضع العلامات على عظم الكالسيوم لمقطع طولي من المطرقة غير المتكلسة المجمدة، المشار إليها بالحرف M، والفقاعات السمعية للفأر P21. تكشف إشارات الكالسيوم الخضراء عن تكوين عظام جديد في المطرقة والفقاعات والكبسولة.بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن عزل الفقاعات السمعية والكبسولة في عشر دقائق إذا تم تنفيذ الإجراء بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للتوجهات التشريحية للعظيمات السمعية والفقاعات في الماوس ، والتي تم وصفها في النص الرئيسي.

dissection-auditory-bulla-postnatal-mice-isolation-middle-ear-bones

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

توجد طرق مختلفة لإدخال العوامل السامة للأذن إلى قوقعة النماذج الحيوانية. يتم تقديم بروتوكول جراحي لتوصيل العوامل السامة للأذن إلى مكانة النافذة المستديرة. الإجراء موثوق به ، ويخلق آفات مستهدفة داخل القوقعة الصناعية ، ويتجنب الضرر الميكانيكي للبنية الدقيقة. يمكن فحص الإصلاح الذاتي / التجديد الذاتي للقوقعة الصناعية.

النهج ماوس جولة نافذة للالسامة وكيل التسليم: A السريع وتقنيات موثوقة لإحداث قوقعة تحلل الخلية

تؤثر الأهداب الأولية على مسارات الإشارات المختلفة. تعتبر قوقعة الثدييات مثالية لفحص إشارات قطبية الخلية المستوية (PCP). يؤثر الخلل الوظيفي الأهدبي على نمو القوقعة ، والزخرفة الخلوية واتجاه خلايا الشعر ، وقراءات PCP. هدفنا هو تحليل إشارات PCP في قوقعة الفأر عن طريق تحليل النمط الظاهري والكيمياء المناعية والفحص المجهري الإلكتروني الماسح.

تقييم مستو خلية-التقاطب الظواهر في Ciliopathy ماوس المسخ القوقعة

نقدم طريقة لعزل الجهاز الكبار كورتي كما ثلاث لفات سليمة قوقعة (قمة، والمتوسطة، وقاعدة). علينا أيضا أن يبرهن على وجود إجراءات المناعية مع الأجسام المضادة الموسومة fluorescently. معا هذه التقنيات تتيح دراسة خلايا الشعر والخلايا الداعمة، وأنواع الخلايا الأخرى الموجودة في القوقعة.

جبل كله تشريح والمناعي من الكبار ماوس القوقعة

تم وصف نهجين للجراحة المجهرية لتوصيل الدواء الموضعي إلى الأذن الداخلية هنا ومقارنتين من حيث التأثير على معلمات السمع والبنية الخلوية للقوقعة والتعبير عن علامات الالتهاب.

دراسة مقارنة بين المخدرات طرق التسليم المستهدفة إلى الأذن ماوس الداخلية: Bullostomy مقابل بطريق غشاء الطبل حقن

والهدف من هذا البروتوكول إظهار وسيلة فعالة ديسيلولاريزي وديكالسيفي كوكليا الماوس للاستخدام السقالات لتطبيقات هندسة الأنسجة.

بروتوكول ديسيلولاريزينج كوكليا الماوس لهندسة الأنسجة الإذن الداخلية

نماذج حيوانية لزرع cochlear يمكن النهوض بمعرفة الأسس التكنولوجية لعلاج فقدان السمع الحسي الدائمة مع التحفيز الكهربائي. تقدم هذه الدراسة بروتوكول جراحية يصم الأذان الحادة وزرع cochlear صفيف القطب في الفئران، فضلا عن التقييم الوظيفي مع استجابة جذع الدماغ السمعية.

جراحة زرع cochlear وتسجيلات استجابة جذع الدماغ السمعية أثارت كهربائياً في الفئران C57BL/6

تصف هذه المخطوطة بروتوكولًا تجريبيًا لتقييم الخصائص المورفولوجية والحالة الوظيفية لمناصات المشبك الشريطية في الفئران العادية. النموذج الحالي هو أيضا مناسبة للنماذج التي تسببها الضوضاء والمرتبطة بالعمر cochlear متشابك المشبك. كما تتم مناقشة النتائج النسبية لدراسات الماوس السابقة.

التقييم المورفولوجي والوظيفي لمناصات الشريط في مناطق تردد محددة من القوقعة الماوس

تقدم هذه المقالة طريقه تعديل سطح القوقعة التي تتطلب الكلس واستخدام لاصقه الخلية والانسجه للالتزام قطع من ظهاره قوقعة الراس إلى 10 مم زلة غطاء الجولة لمناعي في قوقعة الماوس الكبار.

اعداد سطح القوقعة في فاره الكبار

السطور الوعائية أمر حيوي لتوليد إمكانات القوقعة الداخلية. هنا ، نقدم تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ لتسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة.

تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ من أجل تسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة

نقدم هنا بروتوكولا مفصلا لعزل وزراعة خلايا شعيرات القوقعة الأولية من الفئران. في البداية ، تم تشريح عضو كورتي من قوقعة الفئران حديثي الولادة (الذين تتراوح أعمارهم بين 3-5 أيام) تحت المجهر. بعد ذلك ، تم هضم الخلايا إنزيميا في تعليق خلية واحدة وتحديدها باستخدام التألق المناعي بعد عدة أيام في الثقافة.

عزل وزراعة خلايا شعر القوقعة الأولية من الفئران حديثي الولادة

هنا، نقدم بروتوكولا لعزل وتنقية وزراعة الخلايا الهامشية الأولية من الشريط الوعائي للفأر، ولوضع نماذج مختبرية للإجهاد التأكسدي وشيخوخة الخلايا لدراسة اضطرابات الجدار الجانبي للقوقعة.

عزل وزراعة الخلايا الهامشية الأولية في الستريا فاسكولاريس من الفئران حديثة الولادة

تعلم تشريح السمعية بولا والكبسولة والعظام السمعية في الفئران حديثة الولادة باستخدام المجهر ثنائي العينين. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة التشكل الخلوي والتعظم الغضروفي في علم أحياء الجروح.

تشريح السمعية بولا بعد الولادة في الفئران: عزل العظام الأذن الوسطى وتحليل النسيجي

استكشف المزيد من الفيديوهات