تشريح السمعية بولا بعد الولادة في الفئران: عزل العظام الأذن الوسطى وتحليل النسيجي

العام من إجراء التشريح هو عزل الفقاعات السمعية والكبسولة ، تليها العظيمات السمعية الفردية من الفئران بعد الولادة لمختلف التحليلات الكاملة والنسيجية. يمكن استخدام هذه الطريقة لمعالجة الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا الجرح ، مثل آليات التشكل الضعيف ، أو التعظم الغضروفي ، أو ضعف التمثيل الغذائي المعدني. تعتمد هذه الطريقة على معرفة متعمقة بالتفاصيل التشريحية.

بشكل عام ، قد يكافح الأفراد الجدد على الفأر كنظام بيولوجي ، لأن معرفتهم بالأذن الوسطى البشرية قد لا تكون قابلة للتطبيق على نظيره في الفأر. سيوضح الإجراء أياكو ساكاموتو ، فني في مختبري. ابدأ بوضع الفقاعات السمعية والكبسولة مع عظم الجمجمة المحيطة في طبق عينة يحتوي على درجة الحموضة المالحة المخزنة بالفوسفات 7.4 في درجة حرارة الغرفة.

تحت مجهر تشريح مجهر ، حدد عظام الجمجمة المحيطة بالكبسولة السمعية كما هو موضح هنا. استخدم مجموعة واحدة من الملقط للإمساك بالجمجمة المحيطة ، ومجموعة ثانية لسحب العظم الظوادي والقذالي. ثم استخدم الملقط لسحب العظام بين الجداريات والجدارية برفق بعيدا عن الكبسولة وإزالتها عند فكها بالكامل.

بعد ذلك ، اسحب الحرشفية بعيدا عن الفقاعات والكبسولة وقم بإزالة العظام والأنسجة الرخوة برفق. بعد ذلك ، أمسك الأذن الخارجية واقلب العينة للكشف عن الجانب الإنسي. بعد ذلك ، اقلب العينة 180 درجة ، وأمسك الكبسولة واسحب الأنسجة الرخوة المتبقية بعيدا.

القمة الظهرية مرئية الآن. في هذه الزاوية ، تظهر بوضوح الأعصاب الوجهية والدهليزية القوقعية في القناة السمعية الداخلية ، والحفرة تحت المقوسة ، والقناة نصف الدائرية الأمامية. عندما تكون القمة الظهرية مائلة نحو قاع طبق التشريح ، تظهر الفقاعات السمعية بوضوح.

إذا كان المستحضر مائلا قليلا ، فإن المطرقة مرئية داخل الفقاعة. ابدأ باستخدام الملقط لكسر القناة السمعية الخارجية فوق المطرقة والجانبية للتلم الطبلي. قم بإنشاء فاكتير ثان أمام الأول.

ثم قم بإزالة قطعة القناة السمعية الخارجية بحيث يكون الغشاء الطبلي مرئيا. بعد ذلك ، قم بإزالة جزء من الغشاء الطبلي والعظم الطبلي بالقرب من الجرايس المطرقي في كل من الجدران البطنية والخلفية. يجب الآن الكشف عن عضلة المطرقة ، والإنكس ، والركاب ، والعضلة الطبلية الموترة.

ارفع المطرقة واقطع عضلة الطبلة الموتر بالحافة المشطوفة لإبرة قياس 27. لاحظ أن المانوبريوم المطرق يلتصق بقوة بالغشاء الطبلي ، كما هو موضح في الثدييات الأخرى. خلع المطرقة من الزنبق في المفصل العظمي عن طريق كسر العملية الأمامية للكعب في goniale.

اعزل المطرقة عن الفقاعات السمعية باستخدام الملقط. قم بإزالة الجزء الأكبر من الفقاعة السمعية لفضح النقطة والصفائح. ثم استخدم الحافة المشطوفة لإبرة قياس 27 لقطع الرباط الخلفي للوصرة عند القمة القصيرة.

عزل الأنف باستخدام الملقط. اقطع الشريان الثابت بالقرب من الركاب بالحافة المشطوفة لإبرة قياس 27. قم بتدوير العينة بحيث يتم وضع النافذة المستديرة في الأسفل.

ثم أدخل إبرة الخياطة في الثقبة السدادية للركاب وارفع الدعامات. بعد إزالة الدعاوى ، يجب أن تكون فتحة النافذة البيضاوية مرئية بوضوح. استخدم إبرة قياس 27 لدفع الركاب بعيدا عن إبرة الخياطة.

لبدء تضمين الأنسجة ، استخدم المقص أولا لقطع عملية الشكل الأسلوبي في الطرف الأمامي من الفقاعة. يمكن رؤية القمة المطرقة والظهرية من خلال الجزء المقطوع. اغمر الفقاعات والكبسولة في 1-2٪ بارافورمالدهايد في PBS.

إذا كان الهواء محاصرا في الفقاعة ، فقم بإزالته باستخدام إبرة وحقنة. اترك الفقاعات والكبسولة في المثبت عند أربع درجات مئوية طوال الليل على دوار أنبوبي. في اليوم التالي ، اغسل الفقاعات والكبسولة بسرعة في PBS.

ثم اغمر على الفور في مركب سائل مدمج بالتبريد عند أربع درجات مئوية. من الشائع أن تتشكل فقاعات الهواء في مركب التضمين بالتبريد على مستوى الأذن الوسطى والخارجية. قم بإزالة فقاعة الهواء من الأذن الوسطى من خلال الشفط بإبرة.

استخدم نفس التقنية لفقاعة الهواء في الأذن الخارجية. بمجرد إزالة جميع فقاعات الهواء ، قم بتوجيه الأنسجة وفقا لنوع الأقسام التي سيتم الحصول عليها. يمكن بعد ذلك دمج الأنسجة في كتل مجمدة قبل التقسيم.

تظهر هذه الصورة تلطيخ H و E لقسم البارافين الطولي من المطرقة المنزوعة الكلس ، المشار إليها بالحرف M ، والفقاعات السمعية والكبسولة من فأر P14. يشار إلى الغشاء الطبلي بالحرف TM. تظهر هذه الصورة وضع العلامات على عظم الكالسيوم لمقطع طولي من المطرقة غير المتكلسة المجمدة، المشار إليها بالحرف M، والفقاعات السمعية للفأر P21. تكشف إشارات الكالسيوم الخضراء عن تكوين عظام جديد في المطرقة والفقاعات والكبسولة.

بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن عزل الفقاعات السمعية والكبسولة في عشر دقائق إذا تم تنفيذ الإجراء بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للتوجهات التشريحية للعظيمات السمعية والفقاعات في الماوس ، والتي تم وصفها في النص الرئيسي.