Name: والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: اكتشف طريقة غير جراحية لإنتاج أورام المثانة غير الغازية في فئران C57BL/6J. تتيح هذه التقنية مراقبة نمو الورم بسهولة لتقييم العلاجات داخل المثانة في أبحاث سرطان المثانة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم تمويل هذا العمل من خلال منحة من المجلس الوطني للبحوث الطبية في سنغافورة (NMRC / CIRG / 1335/2012) الممنوحة للبروفيسور كيسافان إيسوفاراناثان.

<ol><li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
<li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li>
<li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181(2013).</li>
<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+cancer%3A+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3(2016).</li>
<li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
<li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li>
<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الخطوات الأكثر أهمية في البروتوكول هي 1) الحفاظ بنجاح tumorigenicity من خط الخلية. 2) ضمان إفراز دعم البرامج والإدارة للقياس قبل زرع الخلايا السرطانية في الفئران. 3) توليد تعليق خلية واحدة لزرع ذلك للحد من التباين في حجم الورم. و4) غرس الخلايا بمعدل بطيء لمنع المثاني الحالبي، الجزر، مما أدى إلى زرع الخلايا السرطانية في الكلى. بعد مرور فترة طويلة في المختبر، يمكن خلايا MB49 / MB49-PSA تفقد tumorigenicity،...

والهدف من هذه الطريقة هو توليد أورام المثانة مثلي الفئران ورصد الأورام مزروع بأكبر قدر ممكن، حتى لا يعتقد أن الفئران دون زرع الورم قد تم علاجه في تحليل نقطة النهاية. وعموما، فإن طريقة أظهرت سوف يقلل من الحاجة لأعداد كبيرة من الفئران لتحليل تجريبي وضمان المزيد من الدقة في تحديد النتائج العلاجية. تطوير نموذج مثلي لسرطان مهمة، كما زرع خلايا الورم تحت الجلد لا ألخص البيئة من المرض السريري أو تمكين وضع استراتيجيات علاجية. بنية المثانة يسمح للتقطير من علاجات سرطان المثانة مباشرة في المثانة مع تأثيرات جهازية الحد الأدنى. وبالتالي، نماذج حيوانية أن ألخص هذه البيئة، مثل نموذج مثلي، هي مهمة لتقييم علاجات جديدة. وdependen الاستنتاجات المستخلصة من أي انشاء التجريبيةر على القيود المفروضة على النموذج. وقد تم تطوير العديد من التقنيات لإنتاج أورام المثانة مثلي في الفئران. هذه تعتمد على إتلاف طبقة جلايكان المثانة، مما يتيح الخلايا السرطانية ليكون مزروع. وتشمل التقنيات المستخدمة كهربي، مما يؤدي الى نقطة واحدة من الضرر في جدار المثانة، مما يؤدي إلى نمو الورم في موقع واحد في المثانة 1،2. ومع ذلك، فإن نسبة نجاح زرع الورم باستخدام كهربي يعتمد مشغل متفاوتة 10-90٪، ويشمل الخطر الذي جدار المثانة سيتم ثقب، مما يؤدي إلى أورام النامية في التجويف البريتوني. يتم تنفيذ الكي الكيميائي باستخدام نترات الفضة، الامر الذي يسيء الى جدار المثانة 3. وبالمثل، وقد استخدم حمض إلى تلف جدار المثانة 4. كما تم استخدام التربسين إلى تلف المثانة وكذلك 5. قد ينتج عن هذه الأساليب في تطوير الورم أكثر من واحد في المثانة.وعلاوة على ذلك، هناك خطر حدوث أضرار بالغة في المثانة إذا ترك المواد الكيميائية في اتصال مع جدار المثانة لفترة طويلة جدا. الطريقة التي وضعتها Ninalga وآخرون. يستخدم موجبة بولي-L-ليسين (PLL) 6 الجزيئات إلى طبقة جدار المثانة. وهذا يتيح لخلايا الورم المشحونة سلبا على التمسك طبقة جلايكان المثانة. هذه الطريقة عموما النتائج في الورم أكثر من واحد النامية في المثانة، ولكن الورم غرس هو في 80-100٪ 4،7. من الناحية الفنية، بل هو أيضا أسهل طريقة لأداء. لضمان أن الأورام التي تنشأ هي إلى حد ما حتى في الحجم، من المهم أن الخلايا السرطانية لا تجميعها في كتل كبيرة قبل الزرع. من أجل تقييم فعالية العلاج، فمن الأفضل لأداء هذه الدراسة على الفئران بأورام مماثلة الحجم إلى حد ما. وهكذا، فإن نظام الكشف الجيدة التي يمكن قياس حجم الورم قريبا بعد زرع مهم. العديد من الاستراتيجيات لها النحلن المستخدمة لتقييم الأورام. وتشمل هذه التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) 10/08، مضان 11، تلألؤ بيولوجي 12،13، الموجات فوق الصوتية 14، وانزيم مرتبط المناعي فحص (ELISA) 15،16. بينما التصوير بالرنين المغناطيسي والموجات فوق الصوتية لا تتطلب إدخال تعديلات على الخلايا السرطانية، وهناك حاجة إلى معدات والتباين وكلاء حساسة للتصوير بالرنين المغناطيسي. تتطلب فحوصات fluorescence-، luminescence-، واستنادا ELISA-تعديل الخلايا السرطانية للتعبير عن البروتينات علامة التي يمكن الكشف عنها من قبل هذه الأساليب. لالتلألؤ، مطلوب ركيزة للكشف عن luciferase النشاط. وبالتالي، هناك خطوة إضافية وزيادة تكلفة. كل من التألق ومضان يتطلب معدات متخصصة. لإنتاج مضان، الأخضر بروتين فلوري (GFP) cyclization، الذي يحفزه الأكسجين الجزيئي، مطلوب. وبالتالي، قد يكون التعبير GFP متغير داخل كتلة الورم اعتمادا على الحصول على الأكسجين، مما يجعل هذا علامة لا يمكن الاعتماد عليها بدلا <sup&gt; 17. تعديل الفئران خط خلية سرطان المثانة MB49 لإفراز البروستاتا البشرية مستضد النوعي (PSA) 15،16 كمؤشر بديل هو استراتيجية أخرى. كما توفر هذه العلامات وسيلة بديلة لتأكيد وجود ورم في إنهاء التجربة، مما يجعلها بديلا لالمناعية. تعرض هذه الدراسة المنهج PLL زرع ورم مثلي وتقدم مقارنة بين أنظمة الكشف عن الورم، وهي ELISA، مضان، والتصوير بالموجات فوق الصوتية.

<table><tbody><tr><td>MB49-PSA الخلايا</td><td>N / A</td><td>N / A المرجع</td><td>(Wu QH ، 2004)</td></tr> <tr><td>RPMI 1640 وسائط</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01 &nbsp ؛</td><td></td></tr> وسائط <tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنينية (FBS) مصل الأبقار الجنينية في أمريكا الجنوبية</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>(FBS) أمريكا الجنوبية ، مصل</td> الأبقار <td>الجنيني الممتاز Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>(FBS) HyClone</td><td></td> <td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycin B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>مجانا PSA (الإنسان) مجموعة ELISA</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent لاستخراج الحمض النووي الريبي &nbsp ؛</td><td></td> مجموعة النسخ العكسي <td>من Ambion</td> 15596026 <td></td></tr><tr><td>عالية السعة مع مثبط RNase</td><td>الأنظمة الحيوية التطبيقية</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay & ndash ؛ Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &ndash ؛ Human KLK3</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL / 6J إناث الفئران</td><td>في الجسم الحي</td><td></td><td>4-6 أسابيع</td></tr><tr><td>التخدير القديم (75 مجم / كجم كيتامين و 1 مجم / كجم ميديتوميدين)</td><td>دواء عكس الصيدلية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>المحلية (1 مجم / كجم Atipamezole)</td><td>صيدلية</td><td></td><td></td>محلية</tr><tr><td>لكمة الأذن</td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>محلول هارتمان أو مرهم لاكتات الصوديوم</td><td>ب براون</td><td></td><td></td></tr> مرهم <tr><td>العيون - مرهم زيوت التشحيم العيني المعقم Duratears</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - HotHands handwarmers</td><td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Certo IV قسطرة</td><td>B براون</td><td>4251300</td><td>24 جم × 3/4 & Prime;</td></tr><tr><td>Aquagel تشحيم جيلي</td><td>الصيدلية</td><td></td><td></td>المحلية</tr><tr><td>محلول Poly-L-lysine ، 0.01٪ ،</td> <td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete ، Mini ، خالي من EDTA كوكتيل مثبط البروتياز</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Creatinine Assay Kit</td> أنظمة <td>الفحص الحيوي</td><td>DICT-50 & nbsp ؛</td><td></td></tr><tr><td>صبغة الفلورسنت - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE محلول انتقال الأنسجة المجمدة</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td> Catalog number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment and Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Realtime PCR</td><td>المطبق Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Software v2.3</td><td>الأنظمة الحيوية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>التطبيقية قفص التمثيل الغذائي</td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>رف من النوع العمودي ل 12 قفصا</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSبرنامج ديفا v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo نظام التصوير&nbsp;</td><td>الفرجار لعلوم الحياة&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>برنامج الصور الحية v3.1</td><td>الفرجار علوم الحياة&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>نظام التصوير Vevo 2100&nbsp;</td><td>VisualSonics&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

يصف هذا البروتوكول توليد أورام المثانة لدى الفئران C57BL / 6J الإناث باستخدام الفئران خط خلية سرطان المثانة MB49، الذي تم تعديله لإفراز البروستاتا البشرية محددة مستضد (PSA)، وإجراءات التأكد من زرع الورم. باختصار، يتم تخدير الفئران باستخدام المخدرات عن طريق الحقن ومصنوعة لوضع في موقف الظهرية. وأخلى البول من المثانة و 50 ميكرولتر من بولي-L-ليسين (PLL) وتغرس ببطء بمعدل 10 ميكرولتر / 20 ق باستخدام القسطرة 24 G الرابع. فإنه لا يتبقى في المثانة لمدة 20 دقيقة قبل stoppering القسطرة. تتم إزالة القسطرة وجلت PLL بواسطة ضغط لطيف على المثانة. ويعقب ذلك تقطير خط خلية سرطان المثانة الفئران (1 × 10 5 خلية / 50 ميكرولتر) بمعدل 10 ميكرولتر / 20 ق. ومقفول القسطرة لمنع إخلاء سابق لأوانه. بعد 1 ساعة، وإحياء الفئران بعقار انعكاس، وأخلت المثانة. معدل تقطير بطيء مهم،كما أنه يقلل من الجزر المثاني الحالبي، والتي يمكن أن تسبب الأورام تحدث في المسالك البولية العلوي وفي الكلى. خط الخلية يجب أيضا إعادة وقف التنفيذ للحد من التثاقل من الخلايا، وهذا يمكن أن يؤدي إلى أحجام الأورام متفاوتة بعد الزرع. هذه التقنية تحرض الأورام بكفاءة عالية. ويتم رصد نمو الورم عن طريق إفراز دعم البرامج والإدارة البولية. مراقبة PSA علامة هو أكثر موثوقية من الموجات فوق الصوتية أو التصوير مضان للكشف عن وجود أورام في المثانة. الأورام في الفئران تصل عموما حجم أقصى يؤثر سلبا على الصحة بنحو 3-4 أسابيع إذا تركت دون علاج. من خلال رصد نمو الورم، فمن الممكن أن نفرق الفئران التي تم علاجها من تلك التي لم تزرع بنجاح مع الأورام. مع تحليل نقطة النهاية الوحيد، وهذا الأخير يمكن افتراض خاطئ قد تم علاجه عن طريق العلاج.

تم العثور على إفراز دعم البرامج والإدارة من خلايا MB49 أن تختلف مع وسائل الإعلام نمو. يزرع MB49-PSA في وسائل الاعلام DMEM لأن هذا يؤدي إلى زيادة إفراز PSA (الشكل 1A). من أجل تحديد حساسية دعم البرامج والإدارة وإليسا في الوقت الحقيقي PCR، وتباينت أعداد مختلفة من MB49-إفراز PSA الخلايا مع الخلايا الأبوية MB49. PSA إليسا يكشف ما لا يقل عن 1 × 10 5 خلايا المفرزة للPSA / 1 × 10 6 خلايا (1B الشكل)، ف...

يصف هذا البروتوكول جيل من الفئران أورام المثانة مثلي في الإناث C57BL / 6J الفئران ورصد نمو الورم.

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

الهدف العام من هذه الطريقة غير الجراحية هو إنتاج أورام مثانة موضعية غير غازية للعضلات بشكل متسق في الفئران، بحيث يمكن مراقبتها بسهولة لتقييم العلاجات داخل المثانة. ويمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال سرطان المثانة، مثل تقييم العلاجات المبتكرة داخل المثانة.تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية في سهولة زرع الأورام في الفئران ومراقبة نموها، مما يساعد على تحديد الاستجابات للعلاجات بدقة. قبل يوم واحد من عملية الزرع، وعندما تصل الخلايا إلى حوالي 80% من درجة الالتحام (confluent)، يتم تمرير خلايا ورم MB49 PSA في وسط DMEM كامل بنسبة تقسيم من واحد إلى اثنين. وفي يوم الإجراء، يتم جمع الخلايا وعدّها، مع التأكد من كونها سليمة وبصحة جيدة.اخلط حجماً متساوياً من معلق الخلايا مع صبغة Trypan Blue بتركيز 4%، وقم بعدّ الخلايا الحية المصبوغة باللون الأزرق باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer). يجب ألا تقل حيوية الخلايا عن 80%. بعد ذلك، أعد تعليق الخلايا بتركيز مليونين لكل ملليلتر في أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر، واغسلها ثلاث مرات باستخدام وسط DMEM.بعد ذلك، احتفظ بها مبردة حتى يحين وقت حقنها. وبمجرد تخدير أنثى الفأر، قم بتوفير الترطيب لها عن طريق حقن محلول Hartmanns في التجويف البريتوني بمعدل 1 milliliters لكل 10 grams من وزن الجسم. كرر هذه العملية كل ساعة أو ساعتين أثناء فترة التخدير.بعد ذلك، ضع مرهم عيون معقم على كلتا العينين، وأعد وضعه عند الحاجة. ثم، ضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهري على مناشف ورقية فوق وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. بعد ذلك، قم بتثبيت الأرجل الخلفية باستخدام شريط لاصق.الآن، قم بتطبيق ضغط خفيف على منطقة أسفل البطن، واجمع البول في أنبوب سعة 1.5 milliliter لقياس المستوى الأساسي لـ PSA في البول. بعد ذلك، املأ محقنة سعة one-milliliter بـ PLL معقم، وقم بتثبيت قسطرة وريدية قياس 24-gauge بعد إزالة مخلات الإبرة. ضع المادة المزلقة على طرف القسطرة.بعد ذلك، أدخل القسطرة في الإحليل، وقم بتوجيهها إلى المثانة باستخدام الملقط. توقف عند الشعور بمقاومة. ثم، قم بحقن 50 µL من PLL ببطء وبمعدل 10 µL كل 20 ثانية لتجنب الارتجاع البولي الحالبي.الآن، اترك القسطرة في المثانة لمدة 20 دقيقة، مع وضع سدادة لمنع التدفق للخارج. بعد مرور 20 دقيقة، قم بإزالة القسطرة وإفراغ المثانة من أي محتويات عن طريق الضغط برفق على أسفل البطن. ثم، باستخدام محقنة سعة واحد ملليلتر، قم بغسل أي محتويات متبقية خارج القسطرة.الآن، اخلط خلايا MB49 PSA جيداً باستخدام الماصة، ثم حمّلها في محقنة سعة 1-mL. قم بتوصيل القسطرة وتشحيمها كما سبق. أدخل القسطرة في المثانة كما سبق.ابدأ بحقن الخلايا، مع استخدام دفع تدريجي بمعدل 10 µL كل 20 ثانية. ثم انتظر لمدة ساعة واحدة. وبعد مرور الساعة، قم بإزالة القسطرة وتفريغ المثانة من أي محتويات.بعد ذلك، قم بتحرير الفأر مع وضعه على جانبه البطني وأعد إفاقته عن طريق حقن atipamezole. الآن، راقب الفأر حتى يستعيد وضعية الاستلقاء الصدري، ثم أعده إلى قفصه الأصلي. وقد وُجد أن إفراز PSA في خلايا MB49 يتفاوت بتفاوت أوساط النمو.يتم استخدام وسط DMEM لأنه أدى إلى تحقيق أعلى معدل من إفراز PSA. ولتحديد حساسية مقايسة ELISA لـ PSA، تم خلط أعداد مختلفة من خلايا MB49 المفرزة لـ PSA مع خلايا MB49 الأصلية. وقد كشفت المقايسة عن وجود 100,000 خلية مفرزة لـ PSA على الأقل لكل مليون خلية.تؤدي طريقة PLL لزراعة الورم إلى تطور أورام متعددة في المثانة. ويمكن استخدام كل من تجميعات البول طوال الليل باستخدام أقفاص التمثيل الغذائي وعينات البول العشوائية لقياس PSA عن طريق تقنية ELISA. وفي جميع الدراسات الحيوانية، تم تسجيل وزن الفأر كمقياس للصحة.ويتم رصد مستويات PSA في البول بشكل أسبوعي كمقياس لنمو الورم. وقد استُخدمت علاجات مختلفة لكل فأر، مما أدى إلى تفاوت في أحجام الأورام. وبعد أسبوعين من عملية الزرع، تم استئصال المثانات ومعالجتها.تباينت أحجام الأورام، وقد توقعت قياسات PSA ذلك. بعد مشاهدة هذا الفيديو، سيكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث أورام مثانة متجانسة في الفئران ومراقبة نموها. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون ساعتين لكل فأر.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر ضمان خلط الخلايا قبل الزرع، وإجراء عملية الزرع بمعدل بطيء. وبعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى، مثل تحليل قياس التدفق الخلوي لـ Uvm أو تقنية ELISA، وذلك من أجل استقصاء التنشيط المناعي بعد العلاج.

a-murine-orthotopic-bladder-tumor-model-and-tumor-detection-system

Research

JoVE Journal

Cancer Research

أبحاث السرطان

تنشأ أورام المثانة في إناث الفئران بطريقة مينيملي من خلال قسطرة ، الكي المحلية ، والتصاق الخلايا السرطانية لاحقا الى مواقع الحرق.

نموذج مثلي من سرطان المثانة الفئران

إنشاء ورم المثانة orthotopic نموذج لتقييم آثار antitumor من سارنا تسليم intravesically ونمو الورم الرصد بواسطة الموجات فوق الصوتية والتصوير bioluminescent.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

في هذا الفيديو ، نصف عملية زرع تقويم العضيات لورم المثانة المزروعة في مثانة الفئران لدراسة دور بيئة الأعضاء في تطوير الأورام.

النموذج العضوي لورم المثانة: طريقة لزرع عضيات المثانة في مثانة الفئران المتلقية

في هذا الفيديو ، نصف الإجراء داخل المثانة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى مثانة نموذج الفأر. يساعد هذا الإجراء في إنشاء نموذج ورم المثانة التقويمي الذي يمكن استخدامه لتطوير استراتيجيات علاجية.

نمذجة ورم المثانة التقويمي في نموذج الفأر: إجراء للإعطاء داخل المثانة للخلايا السرطانية في مثانة الفئران

يمكن أن يكون زرع الخلايا السرطانية في العضو الأصلي بمثابة نموذج ما قبل السريري المفيد لتقييم العلاجات الجديدة. يمكن زراعة خلايا سرطان المثانة MB49 داخل المثانة بعد التقطير داخل المثانة. يوضح هذا البروتوكول قسطرة مثانة الفأر لغرض زرع الورم وتوصيل الفيروسات الغدية.

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

تقنية أنشئت لتطعيم الغازية مثلي xenografts سرطان المثانة الأولية يتطلب فتح البطن وتعبئة المثانة. هذا الإجراء يلحق قسط كبير من المراضة على الفئران، هي صعبة وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. لذا قمنا بتطوير الدقة العالية، عن طريق الجلد باستخدام نهج توجيه الموجات فوق الصوتية.

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

هي الناجمة عن أورام المثانة مورين مع مسرطن النيتروسامين N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). يتم توليد ورم المثانة غير المتجانسة؛ ولذلك يلزم إجراء تقييم دقيق لعبء الورم قبل التعشيه للعلاج التجريبي. نقدم هنا بروتوكولا التصوير بالرنين المغناطيسي سريعة وموثوق بها لتقييم حجم الورم والمرحلة.

تقييم التصوير بالرنين المغناطيسي لاورام المثانة مورين المستحثة مسرطن

يوفر هذا البروتوكول خطوات تجريبية مفصلة لإنشاء ثقافة ثلاثية الأبعاد في المختبر من organoids ورم المثانة المستمدة من سرطان المثانة الميورين الناجم عن مادة مسرطنة. يتم وصف أساليب الاستزراع بما في ذلك المرور والهندسة الوراثية وزرع العظام من organoids الورم.

الثقافة والتلاعب وزرع تقويم العظام من ورم المثانة الماوس Organoids

لتوضيح عملية متعددة الخطوات لنشر البريتوني من سرطان المبيض، تقدم الدراسة الحالية نموذج تجريبي الفئران من نمو الورم الأصلي والانبثاث البريتوني عن طريق التلقيح مثلي مع هذه الخلايا السرطانية.

فأري موديل التجريبية التنمية الورم الأصلي والبريتوني ورم خبيث<em&gt; عبر</em&gt; مثلي تلقيح مع خلايا المبيض سرطان

نحن تصف طريقة استخدام التشعيع الطرفية المستهدفة للحث على سلوك مثل التعب في الفئران. جرعة التشعيع غير قاتلة المختارة يؤدي إلى انخفاض لمدة أسبوع في النشاط تشغيل عجلة الطوعي.

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

اكتشف طريقة غير جراحية لإنتاج أورام المثانة غير الغازية في فئران C57BL/6J. تتيح هذه التقنية مراقبة نمو الورم بسهولة لتقييم العلاجات داخل المثانة في أبحاث سرطان المثانة.

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

استكشف المزيد من الفيديوهات