والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

يصف هذا البروتوكول جيل من الفئران أورام المثانة مثلي في الإناث C57BL / 6J الفئران ورصد نمو الورم.

الهدف العام لهذه الطريقة غير الجراحية هو إنتاج أورام المثانة غير الغازية للعضلات باستمرار في الفئران والتي يمكن مراقبتها بسهولة لتقييم العلاجات داخل المثانة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان المثانة. مثل تقييم العلاجات الجديدة داخل المثانة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه من السهل زرع الأورام في الفئران ومراقبة نموها ، مما يساعد على تحديد الاستجابات للعلاجات بدقة. قبل يوم واحد من الزرع ، عندما تكون الخلايا حوالي 80٪ ممر ملتقى إلى الخلايا السرطانية MB49 PSA في وسائط DMEM كاملة مع انقسام واحد إلى اثنين. في يوم الإجراء ، اجمع الخلايا وعدها ، وتأكد من أنها صحية بما فيه الكفاية.

امزج بحجم متساو من تعليق الخلية و 4٪ Trypan Blue ، واحسب الخلايا الحية الملطخة باللون الأزرق باستخدام مقياس كثافة الدم. يجب أن تتمتع الخلايا بقابلية للحياة بنسبة 80٪ على الأقل. بعد ذلك ، أعد تعليق الخلايا عند مليوني لكل مليلتر في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مليلتر ، واغسلها ثلاث مرات في DMEM.

ثم احتفظ بها مبردة حتى يتم حقنها. بمجرد تخدير أنثى الفأر ، قم بتزويدها بالترطيب عن طريق الحقن داخل الصفاق من محلول هارتمانز بمعدل 1 مليلتر لكل 10 جرامات من وزن الجسم. كرر هذا كل ساعة أو ساعتين أثناء التخدير.

بعد ذلك ، ضع مرهما معقما للعيون على كلتا العينين ، وأعد وضعه حسب الحاجة. بعد ذلك ، ضع الفأر على مناشف ورقية فوق وسادة حرارية للحفاظ على درجة حرارة الجسم. بعد ذلك ، قم بتأمين الأرجل الخلفية بشريط لاصق.

استخدم الآن ضغطا برفق على منطقة أسفل البطن ، واجمع البول في أنبوب سعة 1.5 مليلتر لقياس المستوى الأساسي لمستضد البروستاتا النوعي البولي. بعد ذلك ، قم بتحميل حقنة سعة مليلتر واحد مع PLL معقم وقم بإرفاق قسطرة IV عيار 24 مع إزالة نمط الإبرة. ضع مادة التشحيم على طرف القسطرة.

بعد ذلك ، أدخل القسطرة في مجرى البول ، وباستخدام الملقط ، قم بتوجيهها إلى المثانة. توقف عندما تشعر بالمقاومة. بعد ذلك ، قم بإخراج 50 ميكرولترا من PLL بمعدل 10 ميكرولتر كل 20 ثانية لتجنب الارتجاع المثاني الحالبي.

الآن اترك القسطرة في المثانة لمدة 20 دقيقة ، مع سدادة لمنع التدفق. بعد 20 دقيقة ، قم بإزالة القسطرة وإخلاء المثانة من أي محتويات ، عن طريق الضغط برفق على أسفل البطن. بعد ذلك ، باستخدام حقنة سعة مليلتر واحد ، قم بإخراج أي محتويات متبقية من القسطرة.

الآن امزج خلايا MB49 PSA جيدا عن طريق سحب العينة ، وقم بتحميلها في حقنة سعة 1 مل. قم بتوصيل القسطرة وتشحيمها كما كان من قبل. أدخل القسطرة في المثانة كما كان من قبل.

وابدأ بحقن الخلايا ، باستخدام طرد تدريجي يبلغ 10 ميكرولتر لكل 20 ثانية. ثم انتظر ساعة واحدة. بعد ساعة ، قم بإزالة القسطرة وإخلاء المثانة من أي محتويات.

ثم حرر الماوس ، وضعه على جانبه البطني وقم بإحيائه بحقن الأتيباميزول. الآن ، راقب الفأر حتى يستعيد الاستلقاء القصي ، ثم أعده إلى قفص منزله. تم العثور على إفراز مستضد البروستاتا النوعي لخلايا MB49 يختلف باختلاف وسط النمو.

يتم استخدام وسائط DMEM لأنها أدت إلى معظم إفراز مستضد البروستاتا النوعي. من أجل تحديد حساسية PSA ELISA ، تم خلط أعداد مختلفة من الخلايا المفرزة MB49 PSA مع الخلايا الأم MB49. اكتشف الاختبار ما لا يقل عن 100،000 خلية تفرز PSA لكل مليون خلية.

تؤدي طريقة PLL لزرع الورم إلى ظهور أورام متعددة في المثانة. يمكن استخدام كل من مجموعات البول الليلية باستخدام أقفاص التمثيل الغذائي وعينات البول الموضعية لقياس مستضد البروستاتا النوعي بواسطة ELISA. بالنسبة لجميع الدراسات التي أجريت على ، تم تسجيل وزن الفأر كمقياس للصحة.

ويتم مراقبة مستضد البروستاتا النوعي البولي على أساس أسبوعي كمقياس لنمو الورم. تم استخدام علاجات مختلفة على كل فأر ، مما أدى إلى أحجام مختلفة من الورم. بعد أسبوعين من الزرع ، تم حصاد المثانتين ومعالجتها.

اختلفت أحجام الورم ، وتوقعت قياسات PSA ذلك. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنتاج أورام المثانة المتعامدة في الفئران ، ومراقبة نموها. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في غضون ساعتين لكل فأر.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التأكد من خلط الخلايا قبل الزرع ، وإجراء الزرع بمعدل بطيء. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل تحليل قياس التدفق الخلوي ل Uvm أو ELISA من أجل التحقق من تنشيط المناعة بعد العلاج.