وسرطان الخلايا مسانج ماوس نموذج الإنتقالية الكلوي لتقييم الكمي وطولية من قبل السريرية العلاج

تنفيذ نموذج مثلي من سرطان الخلايا الكلوية في الفئران مناعيا يتيح للمحقق نظام سريريا ذات الصلة التي تحددها وجود الورم والرئة الكلى الأولية الانبثاث في نفس الحيوان. هذا النظام يمكن استخدامها لاختبار preclinically مجموعة متنوعة من العلاجات في الجسم الحي.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء أورام الكلى التقويمية للفأر من خلال زرع الخلايا السرطانية داخل الكلى لدراسة نمو الورم ورم خبيث وفعالية العلاجات المضادة للأورام. يمكن استخدام هذه الطريقة للإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أورام المسالك البولية مثل مدى فعالية العلاج الجديد في نموذج ما قبل السريري لسرطان الكلى. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن زرع الورم داخل الكلى يؤسس ورما كلويا ينتقل الرئة الأولي ويحاكي التسبب في سرطان الخلايا الكلوية السريري.

لتحضير الخلايا السرطانية Renca ، قم أولا بفصل مزرعة الخلية باستخدام 0.25٪ Trypsin و HBSS بعد الشطف باستخدام PBS. قم بتحييد التفاعل بعد خمس دقائق باستخدام RPMI Medium الكامل. نقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي للطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في HBSS الطازجة.

بعد العد ، اضبط الحجم إلى اثنين في عشرة إلى الخلايا الست لكل تركيز مليلتر في HBSS ، وارسم الخلايا إلى حقنة سعة مليلتر واحد مزودة بإبرة قياس 18. بعد ذلك ، ضع ستارة جراحية معقمة فوق وسادة تدفئة وتأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم. قم بإزالة الشعر من الجانب الأيسر للفأر ووضع مرهم بيطري على العينين.

ثم امسح موقع الزرع بمطهر اليود 5٪ بوفيدون واستخدم مشرط معقم لعمل شق واحد إلى سنتيمتر ونصف على الجانب الأيسر ، مع الحرص على عدم اختراق الصفاق. باستخدام المقص ، افصل الأدمة عن الصفاق ، وقم بتربيت موقع الشق بشاش قطني معقم لإزالة أي دم. ثم أمسك الرأس باليد اليسرى وادعم الجناح باليد اليمنى لتحديد موقع الطحال من خلال الصفاق.

باستخدام إصبع واحد من اليد اليمنى ، المس الماوس من الأسفل. يجب أن تصبح الكلية مرئية. الحفاظ على قبضة قوية على لتوفير التوتر عبر الصفاق والكلى ، اطلب من مساعد توصيل 0.1 مل من خلايا Renca ببطء من خلال الصفاق السليم إلى مركز الكلى.

أمسك الإبرة في مكانها لمدة خمس إلى 10 ثوان لتقليل التدفق العكسي للخلايا. ثم أغلق الشق بطبقة رقيقة من مادة لاصقة من أنسجة سيانواكريلات. في نقطة النهاية التجريبية ، استخدم المقص لعمل شق خط الوسط ، بدءا من منتصف البطن عبر القفص الصدري والرقبة والغدد اللعابية.

باستخدام المقص والملقط ، قم بإزالة الأضلاع بعناية دون المساس بأنسجة الرئة ، وقم بإزالة النسيج الضام لفضح القصبة الهوائية. املأ حقنة سعة ثلاثة ملليلتر مزودة بإبرة قياس 18 بحبر الهند بنسبة 10٪ و PBS. ثم استخدم الملقط لربط خياطة حريرية بعناية تحت القصبة الهوائية ثم ربط عقدة فضفاضة.

بعد ذلك ، أدخل الإبرة بعناية في القصبة الهوائية وقم بتضخيم الرئتين ببطء بواحد إلى واحد ونصف من محلول India Ink. اسحب العقدة بإحكام حول القصبة الهوائية لمنع التدفق العكسي للحبر ، ثم قم بإزالة الإبرة وقطع النسيج الضام بعناية لإزالة الرئتين المنتفختين. ثبت الرئتين في أنبوب مخروطي سعة 15 مليلتر يحتوي على خمسة ملليلتر من محلول Fekete في غطاء دخان كيميائي في درجة حرارة الغرفة.

بعد 24 إلى 48 ساعة ، قم بإزالة الرئتين السليمتين المزيعة الملوثة وافصل الفصوص بعناية في طبق بتري 35 × 10 ملم. ثم احسب عدد عقيدات الورم البيضاء تحت مجهر تشريح. يؤدي زرع خلايا رينكا داخل الكلى الناجح للفأر إلى تطور الورم في الكلى والورم الخبيث إلى الرئتين مع الحاملة للورم مما يدل على عبء ورم قوي كما يقاس بزيادة وزن الكلى المزروعة بالورم.

كما لوحظ ، يمكن التعرف على أورام Renca عن طريق التلوين الكيميائي المناعي للسيتوكيراتين ثمانية و 18. يسمح زرع لوسيفيراز الذي يعبر عن خط خلايا Renca بتتبع عبء الورم في الكلى والورم الخبيث إلى الرئة عن طريق التصوير الحيوي كما يؤكده تضخم الرئة في الهند. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في أقل من خمس دقائق لكل فأرة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تحديد الكلى بوضوح من خلال الصفاق لضمان زرع ورم كلوي دقيق. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل اختبار الأدوية قبل السريرية للإجابة على أسئلة إضافية ، مثل إلى أي مدى يؤثر الدواء الجديد على نمو أو ورم خبيث للأورام الكلوية؟ بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء زرع الخلايا السرطانية داخل الكلى لإنشاء أورام الكلى التقويمية في الفأر.

لا تنس أن العمل مع الحية والأدوات الجراحية يمكن أن يكون خطيرا وأن الاحتياطات ، مثل اتباع إرشادات التعامل مع المؤسسية والحفاظ على منطقة وأدوات جراحية معقمة يجب دائما اتخاذ أثناء إجراء هذا الإجراء.