Name: غير الغازية في فيفو الإسفار التصوير البصري من مب النشاط التهابات باستخدام عامل التصوير الفلورسنت أكتيفاتابل (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: استكشف التصوير البصري باستخدام مسبار فلوري قابل للتفعيل لتقييم نشاط إنزيمات MMP في نماذج التهاب المفاصل التجريبية. هذه التقنية سريعة وغير مكلفة وتساعد في فهم آليات الأمراض الالتهابية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر دانيال بوكالا، ناتالي ألتمير وفوندا كاي للدعم الفني الممتاز. نشكر جوناثان كوتن، جريج بودين وبول سوبيران لتحرير المخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل شركة سيمنز-مؤسسة فيرنر وكلية الطب في جامعة توبنغن ايبرهارد كرلس ( &#39;&#39; Promotionskolleg &#39;&#39;) والتي DFG من خلال CRC 156 (C3 المشروع).

وجاءت جميع الإجراءات الموضحة في هذه الورقة، والمبادئ التوجيهية والمعايير الدولية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان والأخلاق المحلية للبلد جنة توبنغن بألمانيا. تم الاحتفاظ بها 12 أسابيع من العمر BALB / ج و C57BL / 6 الفئران على 12 ساعة - 8: 12 ساعة ضوء: دورة الظلام وكان يضم في IVCs والظروف البيئية موحدة في 22 ± 1 ° C في مجموعات من 2-5 بالماء و الغذاء الإعلانية libitum الوصول. 1. تحضير المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخفيف الصبغة OI لالقريب التصوير مضان الأشعة تحت الحمراء وفقا لورقة البيانات الخاصة مباشرة قبل الحقن. الصبغة OI activatable (مسبار التجاري مع الإثارة في 680 نانومتر) لقياس تقوم ال MMPs في الجسم الحي هو على استعداد لاستخدام بتركيز 20 نانومول في 1.5 مل برنامج تلفزيوني 1X. يهز بلطف أو دوامة الحل قبل الاستخدام. ويمكن تخزين صبغ OI في 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر عندما محمية من الضوء. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> عن طريق الوريد ( 4 ) الحقن إعداد قسطرة الوريدية. استخدام حقنة الأنسولين 20 U (0.5 مل) مليئة محلول ملحي 0.9٪ (تحتوي على 10 وحدة حقن الهيبارين في 50 مل)، وإبرة 30 قياس تعلق على قسطرة البولي ايثيلين. حقن الجرعة الموصى بها من 2 نمول في الماوس من صبغ أوي. </li></ol> 2. تحريض التهاب المفاصل الروماتويدي والمزمن الاتصال فرط الحساسية رد فعل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التهاب المفاصل الروماتويدي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 100 ميكرولتر من المصل (المكتسبة من الفئران K / بكسن 10 ) تحتوي على الأجسام المضادة (أب) ضد إيسوميراز الجلوكوز 6 الفوسفات (غي) 1: 1 مع برنامج تلفزيوني 1X (200 ميكرولتر) للحث را. تخزين المصل المخفف في -80 درجة مئوية. ويرد وصف الإجراءات التفصيلية لتحريض را من قبل موناش وآخرون. 8 - </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحث را، ورفع كل الماوس بلطف عن طريق ذيله وحقن 200 ميكرولتر من المصل داخل الصفاق المخفف (إب) يوم 0 من tانه التجربة. بعد الحقن وضع الماوس مرة أخرى مباشرة في قفصه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياريا، وقياس أقطار الكاحل كل الكاحل، قبل الحقن AB وتعريف &quot;نتيجة التهاب المفاصل&quot; (الشكل 1A). مواصلة قياس تورم الكاحل يوميا حتى يوم 6 بعد GPI المصل باستخدام جهاز القياس الميكانيكية (ميكرومتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الصبغة OI activatable (خطوة 1،1-1،2)، لقياس النشاط في الجسم الحي MMP الرابع في الوريد ذيل الفئران RA في يوم 5 بعد الحقن GPI المصل وفي الوريد ذيل السيطرة على الفئران. إجراء تجارب التصوير الضوئي 24 ساعة بعد الحقن الذيل الوريد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاتصال رد فعل فرط الحساسية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتوعية C57BL / 6 الفئران، يعد حل TNCB 5٪ المذاب في 4: مزيج 1 من الأسيتون / النفط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير C57BL / 6 الفئران باستخدام 1.5٪ الأيزوفلورين تبخيرها في الأكسجين 100٪ (1.5 لتر / دقيقة). مرة واحدة يتم تخدير الفئران، وضعه في جنون الذاتي<html> البريد مخروط الأنف (خفض 5 مل البولي ايثيلين حقنة، متصلا 1.5 المجلد أنبوب٪ الأيزوفلورين) والحفاظ على التخدير. تطبيق البيطري مرهم العين على الحيوانات تخدير لمنع جفاف العينين في حين تخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق البطن بعناية (2 × 2 سم) باستخدام صغيرة الانتهازي شعر الحيوان. تجنب إصابة الجلد، وهذا يمكن أن يؤدي إلى إشارات الفلورسنت غير محددة داخل الحيوان ويمكن أن تؤثر على نتائج الدراسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 80 ميكرولتر من الحل TNCB 5٪ ببطء في منطقة البطن حلق باستخدام ماصة 100 ميكرولتر لتوعية الحيوان. ضع الماوس بلطف مرة أخرى إلى رعايتها أخذ القفص لضمان عيون الماوس، لا تأتي في اتصال مع الفراش لتجنب إصابة القرنية وتجنب درجة حرارة الجسم منخفضة خلال مرحلة الانتعاش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ستة أيام التوعية، وإعداد حل TNCB 1٪ (المنحلة في 9: مزيج 1 من الأسيتون / النفط) وتطبيق 20 ميكرولتر في الأذن اليمنى باستخدام ماصة للحصول CHSR الحادة والمزمنة.&quot;&gt; 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ مع التحدي 1ST على كلا الجانبين من الأذن اليمنى مع 20 ميكرولتر من محلول 1٪ تنب باستخدام ماصة 100 ميكرولتر وتكرار التحدي كل يوم ثان تصل إلى خمس مرات (يوم 15 بعد توعية) لاستخراج شر ( الشكل 1B ) . قياس سمك الأذن يوميا، وذلك باستخدام جهاز قياس ميكرومتر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن صبغ أوي أكتيفاتابل (التحقيق التجاري مع الإثارة في 680 نانومتر) (الخطوة 1.1-1.2) لقياس نشاط مب في الجسم الحي في الفئران شر 12 ساعة بعد التحدي. إجراء تجارب التصوير البصري 24 ساعة بعد الذيل حقن الوريد ( 4 ). </li></ol></li></ol> 3. إعداد الحيوان للتصوير البصري <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل تشاو الماوس (على الأقل 3 أيام قبل التصوير) إلى منخفضة أو عدم مضان تشاو (على سبيل المثال ، المنغنيز الحرة) لتجنب تدخل لصناعة السيارات في مضان (حوالي 700 نانومتر) مع إشارة مضان من وكلاء أوي المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان فيإلى مربع التخدير وتخدير باستخدام 1.5٪٪ إيسوفلوران يتبخر مع الأكسجين (1.5 لتر / دقيقة) (يمكن استبدال الأكسجين عن طريق الجو ولكن يحتاج إلى أن تكون موحدة في تجربة واحدة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم تخدير الماوس بشكل واضح، ووضعه في مخروط الأنف عصامي (بناء من قبل حقنة 5 مل البولي ايثيلين قطع، متصلة أنبوب 1.5٪٪ إيسوفلوران) والحفاظ على التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلاقة الحيوان بعناية على الموقع المستهدف (2 سم × 2 سم) باستخدام الحيوانات الصغيرة المتقلب الشعر. تجنب إصابة الجلد، وهذا يمكن أن يؤدي إلى إشارات الفلورسنت غير محددة داخل الحيوان ويمكن أن تؤثر على نتائج الدراسة. ملاحظة: الشعر يمكن أن تمتص إشارة مضان خلال أوي (تعتمد على سلالة الماوس، ويلاحظ أكثر أو أقل امتصاص) اعتمادا على المنطقة من الفائدة (روي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحقن الرابع ، ووضع ذيل الماوس في الماء تحسنت، للحث على توسع الأوعية، وتطهير بلطف الجلد في موقع الحقن مع الكحول، والبدء من خلال وضع القسطرة فيالموقع البعيدة من الذيل. وضع &quot;قطع&quot; حافة الإبرة في، في زاوية من 20 درجة في الوريد الذيل واختبار وضع الصحيح من القسطرة عن طريق إعادة تعليق حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم وضع القسطرة بشكل صحيح، استبدال المحاقن وحقن التحقيق OI (2 نانومول). بعد الحقن، واستبدال المحاقن وحقن 25 ميكرولتر من 0.9٪ المالحة حل واضح تماما حجم القتلى من الأنبوب البولي ايثيلين. ملاحظة: الأنسجة الوقت نصف عمر الصبغة OI المستخدمة (مسبار التجاري مع الإثارة في 680 نانومتر) لقياس النشاط MMP في الجسم الحي هو 72 ساعة. لضمان إزالة كاملة، إعادة حقن الصبغة لا ينصح في وقت سابق من 7 أيام بعد الحقن مسبق. </li></ol> 4. التصوير الضوئي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بلاستيكية سوداء أو ورقة ورقة في الصندوق الأسود للOI الماسح الضوئي في مركز مجال الرؤية (فوف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد بروتوكول القياس واختيار الطول الموجي المناسب (الإثارة: 680 ± 10 نانومتر والبريدمهمة: 700 ± 10 نانومتر) و المعلمات التصوير. ملاحظة: في بعض أنظمة أوي، الإعداد لعدة الأصباغ التصوير هو محدد مسبقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاختيار البروتوكول الصحيح للتصوير مضان، وفتح برامج التصوير (المقدمة من قبل الشركة المصنعة) وتهيئة النظام. معظم كاميرات كسد تحتاج إلى تهدئة إلى درجة حرارة العمل، وهذا يمكن أن يستغرق 10 دقيقة. للحصول على نتائج موثوقة، انتظر حتى يصبح النظام جاهزا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة في الجسم الحي نظام التصوير اقتناء لوحة التحكم يطفو على السطح وسوف كل مرشح زوج مختارة تمثل صورة واحدة في التسلسل. في هذه الحالة، والحصول على صورة واحدة مع أزواج مرشح للصبغة التجارية مع والإثارة والانبعاث الموجي من 680 ± 10 نانومتر و 700 ± 10 نانومتر، على التوالي، وبدء القياس (اضغط على &quot;الحصول على تسلسل&quot;). لمزيد من التعليمات التفصيلية، يرجى الاطلاع على دليل الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية الصور بشكل مناسب وحفظ المعلومات في &quot;تحرير الصورةتسميات &quot;، والتي سوف يطفو على السطح بعد&quot; تسلسل اكتساب &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ مسح الأساس لكل حيوان قبل حقن صبغ أوي، أو استخدام الحيوانات السيطرة ساذجة للتمييز إشارة الخلفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ساعة بعد حقن الوريد الذيل لصبغة أوي، ووضع الحيوانات في وسط فوف، في موقف لقياس أعلى إشارة في نظام أوي، وبدء القياسات. ملاحظة: هام: انخفاض حرارة الجسم يمكن أن تؤثر بشكل كبير على توزيع وكلاء التصوير. تأكد من أن يتم تسخين المرحلة تصل إلى 37 درجة مئوية لتجنب انخفاض حرارة الجسم من الحيوان. التصوير يمكن أن يؤديها في وقت واحد مع الحيوانات في مجموعات من 1 إلى 5 الفئران. اختيار حجم فوف اعتمادا على عدد من الحيوانات لقياس في نفس الوقت. يمكنك التقاط صورة حقل مشرق للتحقق مما إذا كان كل فأرة مرئيا. </li></ol> 5. تحليل البيانات ملاحظة: إجراء تحليل البيانات باستخدام برنامج الصورة التاليةبروتوكول الشركة الصانعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس RA، استخدام وحدة معايرة من انبعاث الفوتون كما هو مبين في الشكل 2، في حين أن الصورة CHSR المزمنة كما كثافة إشارة في المئة (الكفاءة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم رويس يدويا، استخدم لوحة الأداة. لتحليل الصور RA استخدام دائرة موحدة، توضع حول أعلى إشارة في كل الكاحلين والكفوف من كل حيوان. لتحليل CHSR، ضع رويس حول الحق كله، والأذن اليسرى وفقا للصورة حقل مشرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس الفوتون أو إشارة قيم الكثافة في العائد على الاستثمار، اضغط على &quot;التدبير&quot; رسم معين. وسيوفر النظام القيم في ROI رسمها للتحليل الإحصائي الوصفي. </li></ol>

<ol><li>Veale, D. J., Ritchlin, C., FitzGerald, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunopathology+of+psoriasis+and+psoriatic+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis.</a> Ann Rheum Dis. 64, 26(2005).</li>
<li>Harris, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rheumatoid+arthritis.+Pathophysiology+and+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Rheumatoid arthritis. Pathophysiology and implications for therapy.</a> N Engl J Med. 322 (18), 1277-1289 (1990).</li>
<li>Lee, D. M., Weinblatt, M. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11567728">Rheumatoid arthritis.</a> Lancet. 358 (9285), 903-911 (2001).</li>
<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> J Clin Rheumatol. 11, S39-S44 (2005).</li>
<li>Pap, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+pattern+of+membrane-type+matrix+metalloproteinases+in+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Differential expression pattern of membrane-type matrix metalloproteinases in rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Rheum. 43 (6), 1226-1232 (2000).</li>
<li>Firestein, G. S., Paine, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromelysin+and+tissue+inhibitor+of+metalloproteinases+gene+expression+in+rheumatoid+arthritis+synovium%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Stromelysin and tissue inhibitor of metalloproteinases gene expression in rheumatoid arthritis synovium.</a> Am J Pathol. 140 (6), 1309-1314 (1992).</li>
<li>Schwenck, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+detects+acute+and+chronic+contact+hypersensitivity+reactions+and+enables+monitoring+of+the+antiinflammatory+effects+of+N-acetylcysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo optical imaging of matrix metalloproteinase activity detects acute and chronic contact hypersensitivity reactions and enables monitoring of the antiinflammatory effects of N-acetylcysteine.</a> Mol Imaging. 13, (2014).</li>
<li>Monach, P. A., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+K%2FBxN+arthritis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">The K/BxN arthritis model.</a> Curr Protoc Immunol. 15, 22(2008).</li>
<li>Zelmer, A., Ward, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+fluorescence+imaging+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive fluorescence imaging of small animals.</a> J Microsc. 252 (1), 8-15 (2013).</li>
<li>Kouskoff, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+disease+provoked+by+systemic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organ-specific disease provoked by systemic autoimmunity.</a> Cell. 87 (5), 811-822 (1996).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+cell+proliferation+enables+the+detection+of+the+extent+of+experimental+rheumatoid+arthritis+by+3%27-deoxy-3%27-18f-fluorothymidine+and+small-animal+PET%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of cell proliferation enables the detection of the extent of experimental rheumatoid arthritis by 3'-deoxy-3'-18f-fluorothymidine and small-animal PET.</a> J Nucl Med. 54 (1), 151-158 (2013).</li>
<li>Schwenck, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+and+Cerenkov+luminescence+imaging.+Applications+in+small+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nuklearmedizin%22%5BJournal%5D)">Fluorescence and Cerenkov luminescence imaging. Applications in small animal research.</a> Nuklearmedizin. 55 (2), 63-70 (2016).</li>
<li>Mahling, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparative+pO2+Probe+and+%5B18F%5D-Fluoro-Azomycinarabino-Furanoside+%28%5B18F%5DFAZA%29+PET+Study+Reveals+Anesthesia-Induced+Impairment+of+Oxygenation+and+Perfusion+in+Tumor+and+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Comparative pO2 Probe and [18F]-Fluoro-Azomycinarabino-Furanoside ([18F]FAZA) PET Study Reveals Anesthesia-Induced Impairment of Oxygenation and Perfusion in Tumor and Muscle.</a> PLoS One. 10 (4), 0124665(2015).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+breathing+affects+3%27-deoxy-3%27-18F-fluorothymidine+uptake+in+mouse+models+of+arthritis+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Oxygen breathing affects 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine uptake in mouse models of arthritis and cancer.</a> J Nucl Med. 53 (5), 823-830 (2012).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthetics+on+3%27-%5B18F%5Dfluoro-3%27-deoxythymidine+%28%5B18F%5DFLT%29+uptake+in+animal+models+of+cancer+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthetics on 3'-[18F]fluoro-3'-deoxythymidine ([18F]FLT) uptake in animal models of cancer and inflammation.</a> Mol Imaging. 12 (5), 277-287 (2013).</li>
<li>Liu, N., Shang, J., Tian, F., Nishi, H., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+imaging+for+evaluating+the+efficacy+of+edaravone+after+transient+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo optical imaging for evaluating the efficacy of edaravone after transient cerebral ischemia in mice.</a> Brain Res. 1397, 66-75 (2011).</li>
<li>Sheth, R. A., Maricevich, M., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+molecular+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+in+abdominal+aortic+aneurysms+correlates+with+treatment+effects+on+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">In vivo optical molecular imaging of matrix metalloproteinase activity in abdominal aortic aneurysms correlates with treatment effects on growth rate.</a> Atherosclerosis. 212 (1), 181-187 (2010).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescent+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescent imaging of matrix metalloproteinase activity after myocardial infarction.</a> Circulation. 111 (14), 1800-1805 (2005).</li>
<li>Wallis de Vries, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Images+in+cardiovascular+medicine.+Multispectral+near-infrared+fluorescence+molecular+imaging+of+matrix+metalloproteinases+in+a+human+carotid+plaque+using+a+matrix-degrading+metalloproteinase-sensitive+activatable+fluorescent+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Images in cardiovascular medicine. Multispectral near-infrared fluorescence molecular imaging of matrix metalloproteinases in a human carotid plaque using a matrix-degrading metalloproteinase-sensitive activatable fluorescent probe.</a> Circulation. 119 (20), e534-e536 (2009).</li>
<li>Weissleder, R., Tung, C. H., Mahmood, U., Bogdanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+tumors+with+protease-activated+near-infrared+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of tumors with protease-activated near-infrared fluorescent probes.</a> Nat Biotechnol. 17 (4), 375-378 (1999).</li>
<li>Cortez-Retamozo, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+assessment+of+inflammation+and+treatment+response+in+a+mouse+model+of+allergic+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Real-time assessment of inflammation and treatment response in a mouse model of allergic airway inflammation.</a> J Clin Invest. 118 (12), 4058-4066 (2008).</li>
<li>McIntyre, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+fluorogenic+proteolytic+beacon+for+in+vivo+detection+and+imaging+of+tumour-associated+matrix+metalloproteinase-7+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Development of a novel fluorogenic proteolytic beacon for in vivo detection and imaging of tumour-associated matrix metalloproteinase-7 activity.</a> Biochem J. 377, 617-628 (2004).</li>
<li>Scherer, R. L., VanSaun, M. N., McIntyre, J. O., Matrisian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+matrix+metalloproteinase-7+activity+in+vivo+using+a+proteolytic+nanobeacon%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of matrix metalloproteinase-7 activity in vivo using a proteolytic nanobeacon).</a> Mol Imaging. 7 (3), 118-131 (2008).</li>
<li>Olson, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+activatable+cell+penetrating+peptides+for+targeting+protease+activity+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol+%28Camb%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of activatable cell penetrating peptides for targeting protease activity in cancer.</a> Integr Biol (Camb. 1 (5-6), 382-393 (2009).</li>
<li>Duijnhoven, S. M., Robillard, M. S., Nicolay, K., Grull, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+targeting+of+MMP-2%2F9+activatable+cell-penetrating+imaging+probes+is+caused+by+tumor-independent+activation%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor targeting of MMP-2/9 activatable cell-penetrating imaging probes is caused by tumor-independent activation).</a> J Nucl Med. 52 (2), 279-286 (2011).</li>
<li>Schafers, M., Schober, O., Hermann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-metalloproteinases+as+imaging+targets+for+inflammatory+activity+in+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Matrix-metalloproteinases as imaging targets for inflammatory activity in atherosclerotic plaques.</a> J Nucl Med. 51 (5), 663-666 (2010).</li>
<li>Wagner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+18F-labelled+derivative+of+the+MMP+inhibitor+CGS+27023A+for+PET%3A+radiosynthesis+and+initial+small-animal+PET+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Radiat+Isot%22%5BJournal%5D)">A new 18F-labelled derivative of the MMP inhibitor CGS 27023A for PET: radiosynthesis and initial small-animal PET studies.</a> Appl Radiat Isot. 67 (4), 606-610 (2009).</li>
<li>Waschkau, B., Faust, A., Schafers, M., Bremer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+a+new+fluorescence-labeled+MMP+inhibitor+to+image+tumor+MMP+activity+in+vivo+in+comparison+to+an+MMP-activatable+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Performance of a new fluorescence-labeled MMP inhibitor to image tumor MMP activity in vivo in comparison to an MMP-activatable probe.</a> Contrast Media Mol Imaging. 8 (1), 1-11 (2013).</li>
<li>Vogl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alarmin+S100A8%2FS100A9+as+a+biomarker+for+molecular+imaging+of+local+inflammatory+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Alarmin S100A8/S100A9 as a biomarker for molecular imaging of local inflammatory activity.</a> Nat Commun. 5, 4593(2014).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

أوي هو أداة مفيدة جدا وسريعة وغير مكلفة لغير الغازية في الجسم الحي التصوير الجزيئي في البحوث قبل السريرية. قوة معينة من أوي هو القدرة على رصد عمليات ديناميكية للغاية مثل الاستجابات الالتهابية. وعلاوة على ذلك، أوي يسمح واحد لمتابعة مسار المرض لفترة طويلة من الزمن، تتراوح بين أيام وأسابيع. أوي لديه العديد من المزايا على غيرها في طرائق التصوير المجراة مثل التصوير المقطعي البوزيترون الانبعا...

تصنف أمراض المناعة الذاتية مثل التهاب المفاصل الروماتيزمي (RA) أو الشائع الصدفية كما من نوع تأخر تفاعلات فرط الحساسية (DTHRs). 1 RA هو مرض المناعة الذاتية شيوعا التي تتميز الزليل التآكل والتدمير المشترك. 2 التهاب المفاصل الملتهبة تثبت تسلل وانتشار خلايا التهابية، وزيادة التعبير الخلايا الموالية للالتهابات مما يؤدي إلى تشكيل متقطعة مزنية والغضاريف والعظام التدمير. 3، 4 انشقاق من جزيئات المصفوفة خارج الخلية، مثل مادة الكولاجين مصفوفة metalloproteinases (تقوم ال MMPs)، أمر ضروري لتحويل الأنسجة والأوعية الدموية ويسبب دمار الأنسجة. تتميز 5، 6 الاتصال فرط الحساسية ردود الفعل (لجنة حقوق الإنسان) من خلال تجميع العدلات مما يؤدي إلى انفجار الأكسدة. 7 على غرار RA، تقوم ال MMPs في لجنة حقوق الإنسان هي involفيد في تحويل الأنسجة، وهجرة الخلايا والأوعية الدموية من أجل إقامة التهاب مزمن. للتحقيق RA، تم استخدام إيزوميراز الجلوكوز 6 فوسفات (GPI) حقن -serum نموذج الفأر. 8 من الأمصال المعدلة وراثيا الفئران K / BXN تحتوي على أجسام مضادة ضد GPI، تم حقنها ساذجة الفئران BALB / ج وبعد ذلك بدأ التهاب الروماتيزم لتطوير خلال 24 ساعة بحد أقصى من تورم الكاحل في يوم 6 بعد حقن GPI المصل (انظر 1.1). لتحليل CHR المزمن، وتوعية C57BL / 6 الفئران مع trinitrochlorobenzene (TNCB) على البطن. وطعن الأذن اليمنى تصل إلى 5 مرات بدءا 1 بعد أسبوع التوعية (انظر أيضا 1.1 و 1.2). موسع OI الحيوانات الصغيرة هي تقنية تقوم على التحقيق في الجسم الحي من fluorescent-، chemiluminescent- وإضاءة الحيوية إشارات، والتي تستخدم أساسا في مجال البحوث قبل السريرية. البيانات نصف الكمية المكتسبة يعطي نظرة ثاقبة لmolecآليات ular في الأعضاء والأنسجة من صحية وكذلك نماذج تجريبية على الحيوانات المريضة، وتمكن طولية متابعة القياسات (على سبيل المثال لتقييم الشخصية الاستجابة العلاجية في الجسم الحي). وهناك ميزة كبيرة من الدراسات الطولية هي الحد من أعداد الحيوانات، كما يمكن قياس الحيوانات نفسها في متابعة الدراسات في عدة نقاط الوقت بدلا من استخدام الفئران مختلفة في نقطة زمنية. حل OI يسمح التصوير وظيفي مفصل لأجهزة وهياكل الأنسجة أصغر في حيوانات التجارب. استخدام الإثارة وانبعاث المرشحات محددة مع مجموعة نقل الضيق، لتوفير الحماية ضد الضوء المتناثرة من قبل lightproof &quot;مربع الظلام&quot; وجهاز حساس اتهم جانب (CCD) وكاميرا، والتي يتم تبريد في العديد من الأجهزة وصولا الى -70 ° C ، ويسمح محددة للغاية والقياسات الحساسة من إشارات مضان. باستخدام وكلاء الفلورسنت مع excitation- والانبعاثات الأطياف في إطار مضان القريب من الأشعة تحت الحمراء (650-950 نانومتر)، ونسب الإشارة إلى الضوضاء يمكن أن تحسن بشكل كبير. ويتميز نافذة مضان الأشعة تحت الحمراء القريبة من امتصاص منخفضة نسبيا من إشارة من الهيموجلوبين والمياه فضلا عن انخفاض الخلفية لصناعة السيارات في مضان. 9 وهذا ما يسمح عمق الاختراق تصل إلى 2 سم في أنسجة الحيوانات الصغيرة. يمكن OI-تحقيقات تتناول هدف مباشرة (مثلا عن طريق مضان الأجسام المضادة المسمى) أو يمكن تفعيلها في النسيج المستهدف (مثلا عن طريق البروتياز). تحقيقات منظمة اوكسفام الدولية Activatable صامتة بصريا في شكلها المعطل بسبب فورستر نقل الطاقة الرنين (الحنق) إلى شاردة التبريد، والذي ينقل الطاقة الإثارة داخل جزيء إلى مجال آخر. إذا تم المشقوق الصبغة (بواسطة الأنزيم البروتيني على سبيل المثال) لم يعد يتم نقل الطاقة في جزيء ويمكن الكشف عن إشارة الفلورسنت التي كتبها OI. وهذا يسمح للتصميم تحقيقات OI مع specificit عاليةذ لعمليات بيولوجية متميزة والضوضاء نسب الإشارة إلى ممتازة. ويوضح البروتوكول التالية بالتفصيل إعداد الحيوانات، القياسات OI OI باستخدام مسبار Activatable إلى صورة MMP-2، -3، -9 -13 والنشاط في الجسم الحي واثنين من نماذج تجريبية من التهاب (RA، لجنة حقوق الإنسان).

<table><tbody><tr><td>Cornergel</td><td>Gerhard Mann GmbH</td><td>1224635</td><td>مرهم العيون &nbsp;</td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott GmbH</td><td>4831850</td> حقنة الأنسولين <td>الأيزوفلوران</td></tr><tr><td>U40</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>324876</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sintetica</td><td>6093089</td><td></td></tr><tr><td>High-Med-PE 0.28 × 0.61 مم</td> أنابيب البولي إيثيلين <td>Reichelt Chemietechnik GmbH + Co</td><td>28460</td><td>، القطر الداخلي 0.28 مم ، القطر الخارجي 0.61 & nbsp ؛ مم &nbsp;</td></tr><tr><td>BD إبر مخروطية عادية ، 30 جرام</td><td>بيكتون ديكنسون وشركاه المحدودة</td><td>305106</td><td>30 G قنية حقن</td></tr><tr><td>RTA-0011 مبخر الأيزوفلوران</td><td>Vetland Medical Sales and Services LLC-Artagain</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>ورقة الرسم</td><td>Strathmore Artist</td><td>Paper 446-8</td><td>الفحم الأسود</td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>نظام التصوير البصري</td></tr><tr><td>BD الإبر المخروطية العادية ، 25 G</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>2-كلورو-1،3،5-ترينيتروبنزين</td><td>سيجما ألدريتش جي إم بي إتش</td><td>7987456F</td><td>TNCB</td></tr><tr><td>MMPSense 680</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>NEV10126</td><td>صبغة التصوير الفلوري</td></tr><tr><td>Oditest &nbsp;</td><td>Koreplin GmbH</td><td>C1X018</td><td>القياس الميكانيكي</td></tr><tr><td>Miglyol 812</td><td></td> <td>SASOL-Oil</td><td></td></tr> <tr><td>&nbsp; BALB / C ، C57BL / 6</td><td>مختبرات تشارلز ريفر &nbsp ؛</td><td>-</td> <td>الفئران المستخدمة للتجارب</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich GmbH</td><td></td><td>لتخفيف مصل RA &nbsp ؛</td></tr><tr><td>ماصة (100 وميكرو؛ ل)</td> <td>Eppendorf&nbsp;</td><td></td><td>تستخدم لتطبيق TNCB&nbsp;</td></tr><tr><td>ماكينة الحلاقة&nbsp;</td><td>Wahl&nbsp;</td><td>9962</td><td>ماكينة حلاقة شعر</td></tr><tr><td>صورة حية&nbsp;</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td></td><td>برنامج تصوير لقياس OI</td></tr></tbody></table>

غير الغازية<em&gt; في فيفو</em&gt; الإسفار التصوير البصري من مب النشاط التهابات باستخدام عامل التصوير الفلورسنت أكتيفاتابل

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

تصف هذه الورقة طريقة غير الغازية لتصوير المصفوفة ميتالوبروتيناسيس (مب) - النشاط من قبل التحقيق الفلورسنت أكتيفاتابل، عبر في الجسم الحي مضان التصوير البصري (أوي)، في اثنين من نماذج الماوس المختلفة من الالتهاب: التهاب المفاصل الروماتويدي (را) والاتصال فرط الحساسية رد فعل (شر) نموذج. ضوء مع الطول الموجي في الأشعة تحت الحمراء القريبة (نير) نافذة (650 - 950 نانومتر) يسمح اختراق أعمق الأنسجة والحد الأدنى من امتصاص إشارة مقارنة أطوال موجية أقل من 650 نانومتر. المزايا الرئيسية باستخدام مضان أوي هو أنها رخيصة وسريعة وسهلة التنفيذ في نماذج حيوانية مختلفة. أكتيفاتابل تحقيقات الفلورسنت صامتة بصريا في الدول المعطل لها، ولكن تصبح الفلورسنت عالية عند تفعيلها من قبل الأنزيم البروتيني. تنشيط مبس تؤدي إلى تدمير الأنسجة وتلعب دورا هاما لتطور المرض في تأخر من نوع فرط الحساسية ردود الفعل (دثرس) مثل را و شر. وعلاوة على ذلك، مبس هيوالبروتياز الرئيسية للغضروف وتدهور العظام والتي تتسبب فيها الضامة، الخلايا الليفية والغضروفية استجابة للسيتوكينات الموالية للالتهابات. هنا نستخدم مسبار التي يتم تنشيطها من قبل مبس الرئيسية مثل مب-2، -3، -9 و -13 ووصف بروتوكول التصوير لمؤشر الأشعة تحت الحمراء القريب مضان أوي نشاط مب في را والسيطرة على الفئران بعد 6 أيام من تحريض المرض كذلك كما هو الحال في الفئران مع الحاد (التحدي 1X) والمزمنة (5X التحدي) شر على الأذن اليمنى مقارنة مع آذان صحية.

للحث على التهاب المفاصل الروماتيزمي (RA) في ساذجة الفئران BALB / ج، تم حقن الحيوانات الملكية الفكرية مع لصناعة السيارات في الأجسام المضادة (1: 1 تمييع مع برنامج تلفزيوني 1X) ضد GPI في يوم 0. الحد الأقصى للالتهاب (تورم الكاحل) في هذا GPI المصل التي يسببها RA النموذج هو يوم 6 وظيفة حقن 11. لذلك، تم إعداد 2 نانومول من الصبغة OI activatable وحقن الرابع في الوريد ذيل الفئران التهاب المفاصل والحيوانات الأصحاء في ...

هذه الورقة يفسر تطبيق التصوير الفلورسنت باستخدام مسبار التصوير الضوئي أكتيفاتابل لتصور النشاط في الجسم الحي من ميتالوبروتيناسس المصفوفة الرئيسية في اثنين من نماذج تجريبية مختلفة من الالتهاب.

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام التصوير البصري لتصور مسبار قابل للتنشيط لتقييم النشاط الحي (in vivo) لبروتينات ميتالوبروتياز المصفوفة الرئيسية، أو MMPs، في النماذج التجريبية للالتهابات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية حول الآليات البيولوجية الكامنة في الأمراض الالتهابية. وتتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها سريعة، ومنخفضة التكلفة، وسهلة التعلم.علاوة على ذلك، يتوفر مجموعة متنوعة كبيرة من المجسات التي تستهدف عمليات بيولوجية مختلفة. ولتحفيز التهاب المفاصل الروماتويدي، استخدم أولاً الميكرومتر لقياس جميع أقطار الكاحل لكل حيوان. بعد ذلك، ارفع الفأر الأول برفق من الذيل واحقن 200 µL من مصل فأر KBN المخفف الذي يحتوي على أجسام مضادة ضد glucose six phosphate isomerase أو GPI داخل الصفاق.بعد ذلك، أعد الحيوان إلى قفصه وقم بقياس تورم الكاحل يومياً حتى اليوم السادس. ولتحسيس فرط الحساسية التلامسي، استخدم آلة تشذيب شعر الحيوانات الصغيرة لحلاقة منطقة بمساحة 2 × 2 سنتيمتر من بطن فأر مخدر بعناية، ثم استخدم ماصة سعة 100 microliter لوضع 80 microliters من محلول 5%TNCB المحضر حديثاً على الجلد المكشوف. من المهم جداً تجنب إصابة الجلد في أي مرحلة من مراحل الإجراء، لأن ذلك قد يؤدي إلى ظهور إشارات فلورية غير محددة داخل الحيوان وقد يؤثر على نتائج الدراسة.أعد الحيوان برفق إلى قفصه، مع تجنب انخفاض درجة حرارة الجسم خلال مرحلة التعافي. بعد ستة أيام، استخدم ماصة لوضع 20 µL من محلول TNCB بتركيز 1% على كلا جانبي الأذن اليمنى، يليه تطبيق 100 µL من TNCB بتركيز 1% كل يومين لمدة تصل إلى 10 أيام، مع قياس سمك الأذن يومياً. لقياس نشاط MMP في الجسم الحي، قم أولاً برج صبغة التصوير البصري القابلة للتنشيط بلطف باستخدام جهاز الدوامة، ثم املأ محقنة إنسولين سعة 0.5 mL بتركيز 2 nM من الصبغة لكل فأر.بعد ذلك، جهز محقنة أخرى بإبرة قياس 30 متصلة بقسطرة بولي إيثيلين، وضع ذيل الفأر الأول في ماء دافئ. وعندما تتوسع الأوردة، أدخل القسطرة بحيث تكون الحافة المقطوعة للإبرة بزاوية 20 درجة عند الطرف القاصي للذيل في وريد ذيل متوسع، ثم أعد تعليق المحقنة لاختبار الموضع الصحيح للقسطرة. إذا كانت القسطرة في الموضع المناسب، استبدل المحقنة واحقن 2 nanomolar من المسبار.ثم استبدل سرنجة مسبار التصوير البصري بسرنجة تحتوي على محلول ملحي بتركيز 0.9%، واحقن 25 microliters من المحلول الملحي في الوريد الذيلي لتفريغ الحجم الميت لأنبوب البولي إيثيلين تمامًا. بعد ذلك، اضبط صندوق ماسح التصوير الخاص بماسح التصوير البصري على 37 degrees celsius، وضع ما يصل إلى خمسة فئران داخل صندوق الماسح في مركز مجال الرؤية. وبعد مرور 24 hours من الحقن، افتح برنامج التصوير وقم بتهيئة النظام، مع السماح لكاميرا CCD بالتبريد حتى تصل إلى درجة حرارة التشغيل.عندما يصبح النظام جاهزاً، قم بضبط الأطوال الموجية ومعلمات التصوير المناسبة وفقاً لفلورة مسبار التصوير. ستظهر لوحة التحكم في الحصول على البيانات الخاصة بنظام التصوير الحي. ثم انقر فوق تسلسل الحصول على البيانات لبدء القياس.لحفظ الصور التي تم الحصول عليها، حدد موقع الحفظ المطلوب. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إضافة المزيد من المعلومات في نافذة تحرير تسميات الصور. هنا، يمكن ملاحظة إشارة فلورية محسنة بوضوح في القوائم الأمامية والكواحل للفئران المصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي في اليوم السادس بعد تحفيز المرض، مقارنة بالإشارة الضئيلة الملحوظة في حيوانات المجموعة الضابطة.يُظهر تحليل التوزيع الحيوي لنشاط MMP في أعضاء الحيوانات التجريبية والضابطة إشارة معززة بقوة في الكواحل والقوائم الأمامية حصرياً في مفاصل فئران التهاب المفاصل الروماتويدي. ومن المثير للاهتمام أنه لوحظ أيضاً تعزيز في إشارة MMP في كلتا كليتي فئران التهاب المفاصل الروماتويدي، بينما أظهر الكبد والأمعاء إشارة MMP قوية بغض النظر عن حالة الإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي. وخلال تفاعل فرط الحساسية التلامسي المزمن الذي تم تحفيزه بخمس تحديات من TNCB في الأذن اليمنى، تظهر زيادة عالية في نشاط MMP في الأذن اليمنى الملتهبة مقارنة بالأذن اليسرى الضابطة السليمة.يُظهر التحليل شبه الكمي لكثافة الإشارة في الكواحل أو القوائم المصابة بالتهاب المفاصل وتلك السليمة زيادة بمقدار سبعة أضعاف في كثافة إشارة MMP في الكواحل المصابة بالتهاب المفاصل، مع رصد كثافة إشارة MMP أعلى بثلاثة أضعاف في القوائم الأمامية مقارنة بالحيوانات السليمة. كما تُظهر آذان الحيوانات المصابة بتفاعل فرط الحساسية التماسي الحاد والمزمن زيادة ملحوظة في إشارة MMP حتى بعد تحدٍ واحد فقط، وتظل هذه الإشارة مرتفعة حتى التحدي الخامس. يمكن تطبيق هذه الطريقة بسهولة في نماذج حيوانية تجريبية مختلفة، وهي تتيح متابعة طويلة الأمد للعمليات البيولوجية والعلاجات الأساسية داخل الجسم الحي (in vivo).عند محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر أن كل مسبار تصوير بصري له إجراء حقن ووقت امتصاص مختلف. لذلك، يجب إجراء دراسات طولية لكل صبغة فلورية ومسبار تصوير بصري جديد. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها على ما يصل إلى خمسة حيوانات في أقل من 10 دقائق إذا تم أداؤها بشكل صحيح.تستطيع هذه الطريقة تقديم رؤى حول آليات الالتهاب داخل الجسم (in vivo)، ولكن يمكن تطبيقها أيضاً لاستقصاء أمراض أخرى مثل السرطان أو التنكس العصبي. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يتكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام التصوير البصري داخل الجسم باستخدام مسبار تصوير قابل للتنشيط في نماذج الأمراض الالتهابية.

non-invasive-vivo-fluorescence-optical-imaging-inflammatory-mmp

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يوضح هذا الفيديو تقنية لتقييم تسلل البلاعم المعوية في نموذج الفئران لالتهاب القولون باستخدام التصوير المقطعي بوساطة التألق (FMT). عند إحداث التهاب القولون في الفأر عن طريق كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS) ، يتم حقن بالأجسام المضادة التي تتعرف على علامة البروتين السكري F4 / 80 على البلاعم المتسللة في القولون. ثم يتم تصوير الماوس في جهاز FMT حيث يتم إعادة بناء إشارات التألق والانعكاس في صورة ثلاثية الأبعاد لتحديد التوزيع المكاني وشدة التألق.

استخدام التصوير المقطعي بوساطة التألق لتقييم التهاب الأمعاء الفئرانية

نحن تصف طريقة التصوير غير الغازية للتمييز مراحل التهابات. تسليم النظامية من كسيماترين يكشف مجالات التهاب حاد تعتمد على النشاط MPO في العدلات. في المقابل، حقن lucigenin يسمح التصور من التهاب مزمن تعتمد على النشاط Phox في الضامة.

في الجسم الحي أسلوب التصوير لتميز الالتهاب الحاد والمزمن

نحن تصف متعددة زاوية التصوير الضوئي التناوب (MAROI) نظام لفي الجسم الحي الكميات من علامة فلوري ألقاها saposin C (SapC) dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. توظيف نماذج الماوس من السرطان والتهاب المفاصل، وعلينا أن نظهر كيف يمكن استخدام MAROI تحليل منحنى إشارة لرسم خرائط دقيقة وتوصيف العمليات البيولوجية المرض.

في فيفو التصوير الضوئي من أورام الدماغ والتهاب المفاصل عن طريق نيون SapC-DOPS Nanovesicles

المصفوفة خارج الخلية يخضع لإعادة عرض كبيرة أثناء التئام الجروح، والتهاب وتكون الأورام. نقدم نهجا المناعي intravital المجهري الرواية لتصور ديناميات ييفي وكذلك مكونات المصفوفة مثل شبكة مع القرار المكانية والزمانية عالية باستخدام epifluorescence أو اثنين من الفوتون المجهري.

طويلة الأجل حيوي داخلي المناعي التصوير من الأنسجة مكونات مصفوفة مع Epifluorescence والميكروسكوب ثنائي الفوتون

&lt; p class = 'jove_content'&gt; يمكن أن يكون استخدام الفلوروفورات للتصوير في الجسم الحي محدودا بشكل كبير عن طريق الاضطلاع ، والإزالة السريعة ، وحساسية الكشف المنخفضة ، والتأثيرات السامة للخلايا على المضيف. يؤدي تغليف الفلوروفورات في الجسيمات الشحمية عن طريق ترطيب الفيلم والبثق إلى تبريد التألق والحماية مما يتيح التصوير في الجسم الحي بحساسية عالية للكشف.

مضان تبريد لالقريبة من الأشعة تحت الحمراء Fluorophore-مغلفة Liposomal كأداة لل في فيفو التصوير الضوئي

نقوم بتفصيل بروتوكول لمراقبة سلوك العدلات والخلايا الوحيدة في الأوردة المساريقية في ظل الحالة المستقرة والظروف الالتهابية باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر داخل الحيوية على الفئران المخدرة.

التصوير العدلات وحيدات في مساريقي الأوردة التي كتبها حيوي داخلي المجهري على الفئران مخدرة في الوقت الحقيقي

الآليات التي تحكم الحركة من خلالي CD4 المستجيب خلايا تي في مواقع الالتهاب غير معروفة نسبيا. نقدم نهجا غير الغازية لتصور والتلاعب في المختبر -primed خلايا CD4 T في الأدمة الأذن الملتهبة، والسماح لدراسة السلوك الديناميكي لهذه الخلايا في الموقع.

التصوير CD4 T خلية الخلالية الهجرة في الأدمة الملتهبة

وتبين لنا تقنية لفي الجسم الحي تلألؤ بيولوجي الحية والأشعة تحت الحمراء القريبة التصوير من التهاب العصب البصري والتهاب الدماغ في النموذج التجريبي التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي (بنت) لمرض التصلب المتعدد في الفئران SJL / J.

تلألؤ بيولوجي والقريبة من تحت الحمراء التصوير من التهاب العصب البصري والمخ التهاب في نموذج EAE من مرض التصلب العصبي المتعدد في الفئران

تحقيقات محددة الهدف تمثل أداة مبتكرة لتحليل الآليات الجزيئية، مثل تعبير البروتين في أنواع مختلفة من الأمراض (مثل التهاب وعدوى توموريجينيسيس). في هذه الدراسة، يصف لنا إجراء تقييم كمي تمجربهك ثلاثي الأبعاد لتسلل بلعم المعوية في نموذج مورين من التهاب القولون باستخدام التصوير المقطعي الأسفار بوساطة خاصة-F4/80.

الأسفار بوساطة التصوير المقطعي للكشف والتحديد الكمي لالتهاب الأمعاء مورين المتصلة بلعم

تحدث التغيرات المورفولوجية في الخلايا الليفية المتجاوبة المناعية بعد التنشيط وتعزيز التعديلات في التوظيف الخلوي. استخدام التصوير بفوتونين بالاقتران مع بروتين خاص بالفيبلاف 1 (FSP1) من الفوتونات وراثياً؛ tdTomato floxed-stop-floxed (TB/TB) خط الماوس والأخضر الفلورسنت الموسومة lipopolysaccharide-FITC، يمكننا أن نوضح استيعاب محددة للغاية من lipopolysaccharide في الخلايا الليفية الجلدية والتغيرات المورفولوجية في الجسم الحي.

في فيفو اثنين من اللون 2-الفوتون التصوير من الخلايا المراسل الموسومة وراثيا في الجلد

استكشف التصوير البصري باستخدام مسبار فلوري قابل للتفعيل لتقييم نشاط إنزيمات MMP في نماذج التهاب المفاصل التجريبية. هذه التقنية سريعة وغير مكلفة وتساعد في فهم آليات الأمراض الالتهابية.

غير الغازية

استكشف المزيد من الفيديوهات