Name: إعداد وتقييم 99m ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: تعلم بروتوكول تسميع مشتقات التترازين بالتكنيشيوم-99m لتصوير الأعضاء المستهدفة مسبقاً باستخدام الكيمياء الحيوية المتعامدة. هذه الطريقة تطور الأدوية الإشعاعية الجديدة وتُحسّن دقة التصوير الطبي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

هذا العمل مدعوما بتمويل منحة بحثية من مجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة (NSERC) في كندا ، ومعهد أونتاريو لأبحاث السرطان (OICR ، #P.SI.015.8) ، وجمعية السرطان الكندية (CCS ، # 703857). يقر المؤلفون بمساهمات الدكتور دينيس سنايدر الذي قدم المساعدة في إعداد المخطوطة.

تمت الموافقة على الدراسات الحيوانية البحوث مجلس الحيوان الأخلاق في جامعة ماكماستر وفقا للمجلس الكندي للرعاية الحيوان (CCAC) المبادئ التوجيهية. 1. Radiolabeling من الليجندات TZ-ثلاثي الشعب مع 99m ح تنبيه: تتطلب الإجراءات التالية استخدام المركبات المشعة. وينبغي أن يتم العمل إلا في مختبر مرخص مع الالتزام بأنظمة السلامة والتخلص منها. يجب أن يتم تنفيذ ردود الفعل الميكروويف في الميكروويف مصممة خصيصا لتركيب الكيميائي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليف [99m ح (CO) 3 (H 2 O) 3] + 19، 20 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قارورة الميكروويف، والجمع بين 8 ملغ K 2 [BH 3 CO 2]، 15 ملغ نا 2 CO 3، 20 ملغ نا 2 B 4 O 7 · 10H 2 O، و 25 ملغ KOCO [CH (OH)]2 COONa · 4H 2 O. تطهير القارورة لمدة 10 دقيقة مع غاز الأرجون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4 مل من 99m TCO 4 - (~ 1100 من MBq، ~ 30 MCI) في المياه المالحة 0.9٪ إلى القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرارة التفاعل في الميكروويف لمدة 3.5 دقيقة في 110 درجة مئوية بعد 10 ثانية من التحريك لضمان خلط دقيق من الكواشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة من الحل إلى 3.5-4 باستخدام ~ 400 ميكرولتر من 1 M حمض الهيدروكلوريك. تحقق من استخدام ورقة الرقم الهيدروجيني. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Radiolabeling من Tetrazine بروابط 1-5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 2 ملغ من كل يجند (مركبات 1-5) في 250 ميكرولتر MeOH 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 250 ميكرولتر من [99m ح (CO) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 من MBq، ~ 2 MCI) إلى كل حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين خليط التفاعل باستخدام الميكروويف لمدة 20 دقيقة عند 60 درجة مئوية. ملاحظة: هذه خطوة مماثلة لجميع tetrazines 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالنسبة لمركبات 2- 5، تتبخر المذيبات وإعادة dissolلقد المنتجات الناشئة في 1 مل 1: 1 ت / ت DCM: TFA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين منتجات التفاعل المنحل (2-5) في 60 درجة مئوية في الميكروويف لمدة 6 دقائق (2-4) أو 10 دقيقة (5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التبريد لدرجة حرارة الغرفة، تتبخر المذيب باستخدام المبخر (36 ° C، 8 مللي بار، 3 دقائق، 6000 دورة في الدقيقة) وحل مجمع المجففة في 1: 1 إيه سي: H 2 O أو 1: 1 MeOH: H 2 O، قبل تنقية HPLC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنقية 99m ح المسمى المركبات (1-5)، بما في ذلك فصل المنتج المسمى من يجند tetrazine الخالي من الملصقات، وذلك باستخدام HPLC (C 18 عكس المرحلة). عادة، استخدام التدرج شطف من 30:70 إيه سي: H 2 O (على حد سواء مع 0.1٪ TFA) ل40:60 إيه سي: H 2 O أكثر من 20 دقيقة (18 دقيقة) وC 18 التحليلي عمود 4.6 × 100 مم. استخدام كل من الأشعة فوق البنفسجية (254 نانومتر) والكشف عن أشعة غاما. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ عينة صغيرة من كل منتج وصفت ومقارنة الوقت الاحتفاظ HPLC لأن من شارك في ينجECTED، غير المشعة، ومعيار إعادة المسمى (0.125 ملغ في 20٪ الميثانول-H 2 O). يتم التعرف على المعايير وصفت رد في تتبع الأشعة فوق البنفسجية HPLC، وسوف أزل في نفس الوقت على 99m مجمع المسمى ح-في تتبع γ-HPLC. ويظهر هذا التعاون حقن قمم في أوقات الاحتفاظ مماثلة، الأمر الذي يؤكد هوية 99m مجمع ح المسمى. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتبخر المذيب من الكسور HPLC باستخدام المبخر (36 ° C، 8 مللي بار، 3 دقائق، 6000 دورة في الدقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صياغة مجمع تنقية بتركيز 7.4 كيلو بيكيريل / ميكرولتر في برنامج تلفزيوني، التي تحتوي على 0.5٪ BSA و 0.01٪ توين-80. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان مركبات المسمى مستقرة، إجراء دراسة في المختبر الاستقرار. احتضان مركب وضعت في 37 درجة مئوية لمدة 1 و 4 و 6 ساعات، حقن كمية صغيرة (3.7 من MBq) من الخليط على HPLC في كل نقطة من الوقت لتقييم الاستقرار. </li></ol></li></ol> 2. الدراسات الحيوية التوزيع المستهدف قبل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><lط&gt; التحضير للحيوانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 7-9 الاسبوع القديمة، إناث الفئران BALB / ج (ن = 3)، إدارة TCO-BP وضعت في المياه المالحة (20 ملغ / كلغ) (5 ميكروغرام / ميكرولتر)، عن طريق حقن الوريد الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في جهاز ضبط النفس الجسدي، والتعرف على الأوردة الموجودة على السطوح الجانبية للذيل والقضاء مع مسحة الكحول. وفي حوالي 2 سم من نهاية الذيل، اضافة الى وجود إبرة عيار 30 في زاوية الضحلة، بالتوازي مع الوريد. خفض ببطء الغطاس لحقن، وإزالة الإبرة وتطبيق الاسفنج الشاش النظيف في موقع الحقن مع الضغط الخفيف حتى يتوقف النزيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 1 ساعة بعد الحقن من TCO-BP، إدارة ~ 0.74 من MBq (20 μCi) من 99m ح-tetrazine وضعت في 100 ميكرولتر من 0.5٪ BSA، 0.01٪ توين-80 في برنامج تلفزيوني، عن طريق حقن الوريد الذيل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدراسات البيولوجية توزيع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند نقطة زمنية محددة (ر = 6 ساعات)، تخدير الفئران باستخدام 3٪ الأيزوفلورين و 2٪ خليط غاز الأكسجين. إظهار له قرصة الانسحاب على الماوس تخدير للتأكد من أنها تحت الطائرة من التخدير الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم (1 مل) من خلال ثقب في القلب باستخدام حقنة قبل تعامل مع الهيبارين. مكان الماوس على ظهرها مع الأنف في مخروط الأنف لاستمرار التخدير وتحديد عملية الخنجري على الحيوان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضافة الى وجود إبرة G 25، قليلا إلى اليسار من خط الوسط الحيوان في إطار عملية الخنجري، في زاوية 20 درجة. إدراج تماما الإبرة، وسحب ببطء مرة أخرى على المكبس لرؤية الدم في محور إبرة إذا كان ثقب القلب. قليلا تعدل الإبرة في حين الضغط على المكبس إذا لزم الأمر، لثقب القلب. ببطء سحب الدم إلى المحقنة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحيوانية خلع عنق الرحم، في حين تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل حيوان في كيس من البلاستيك واستخدام المعاير الجرعة (99m وضع ح) لقياس مستوى النشاط الجسم كله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأنسجة والسوائل التالية في مرحلة ما قبل تزنإد عد أنابيب: الدم والعظام (الركبة والكتف)، المرارة والكلى والكبد والمعدة (مع المحتويات)، الأمعاء الدقيقة (مع المحتويات)، الأمعاء الغليظة والمصران الأعور (مع المحتويات)، والغدة الدرقية والقصبة الهوائية، المثانة البولية مع البول ، والذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الأنسجة المناسبة (باستثناء الدم والمرارة والمثانة البولية) في برنامج تلفزيوني لإزالة الدم وصمة عار الجافة قبل وضع الأنسجة في أنابيب العد المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الذبيحة في كيس من البلاستيك وقياس المتبقي نشاط الجسم كله باستخدام تدريج الجرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن كل أنبوب يحتوي على عينة الأنسجة. طرح الوزن الأولي من أنبوب للحصول على كتلة من الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام جرعة تدريج (99m وضع ح) لقياس كمية من النشاط في عينة الاختبار (100 ميكرولتر) في وقت لحقن كل فأر. ملاحظة: هذه عينة اختبار تساوي حجم الحقن، مما يعطي العد النشاط في وقت الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت القياس الأنسجة، لliquot 5 ميكرولتر من عينة الاختبار المستخدمة سابقا. استخدام أشعة غاما مضادة متعددة للكشف عن (99m وضع ح) والاعتماد للحصول على العد في الدقيقة (CPM) لاختبار عينة 5 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام اثنين من القيم التي تم الحصول عليها في 2.2.9 و2.2.10 لحساب النشاط والعلاقة CPM باستخدام المعادلة 1 للحصول على عامل التحويل (CPM μCi -1). (1) <img alt="المعادلة 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188eq1.jpg" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام العداد جاما لقياس كمية الإشعاع في كل الأنسجة أو عينة السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعادلة 1 لحساب كمية النشاط في كل الأنسجة أو السوائل في وقت قياس نسبة إلى مجموع حقن الجرعة. ثم يتم تطبيع هذه القيمة من حيث الوزن الجهاز وذكرت كنسبة مئوية حقن جرعة غرام الواحد (أي٪ ID / ز) من الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الخطوات 2.1.2 إلى 2.2.13 لإجراء تجربة السيطرة السلبية باستخدام 99m ح المسمى بروابط tetrazine في أبسينم من TCO-BP. الفئران التضحية (ن = 3) في 0.5 و 1 و 4 و 6 ساعة بعد الحقن والحصول على الأنسجة أو السوائل كما هو موضح أعلاه. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jurisson, S. S., Lydon, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+Technetium+Small+Molecule+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals.</a> Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).</li>
<li>Kluba, C. A., Mindt, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click-to-chelate%3A+Development+of+Technetium+and+Rhenium-Tricarbonyl+Labeled+Radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals.</a> Molecules. 18, 3206-3226 (2013).</li>
<li>Amato, I. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/cen-v087n036.p058">Nuclear Medicines Conundrum.</a> Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).</li>
<li>Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+of+Avidin+and+Biotin+for+Imaging+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications.</a> J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).</li>
<li>Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine+Ligation%3A+Fast+Bioconjugation+Based+on+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity.</a> J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).</li>
<li>Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Based+Cycloadditions%3A+Application+to+Pretargeted+Live+Cell+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging.</a> Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Chemistry+for+Pretargeted+Tumor+Imaging+in+Live+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.%2C+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+Pretargeted+Strategy+for+the+PET+Imaging+of+Colorectal+Carcinoma+via+the+Modulation+of+Radioligand+Pharmacokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics.</a> Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).</li>
<li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Reactive+trans-Cyclooctene+Tags+with+Improved+Stability+for+Diels-Alder+Chemistry+in+Living+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems.</a> Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).</li>
<li>Rossin, R., Robillard, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+Imaging+Using+Bioorthogonal+Chemistry+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).</li>
<li>Denk, C., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201404277/abstract">Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).</li>
<li>Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2013/CC/c3cc41027g#!divAbstract">Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation.</a> Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazine-Trans-Cyclooctene+Ligation+for+the+Rapid+Construction+of+18F+Labeled+Probes%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes.</a> Chem. Commun. 46 (42), 8043(2010).</li>
<li>Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga+Chelating+Bioorthogonal+Tetrazine+Polymers+for+the+Multistep+Labeling+of+Cancer+Biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers.</a> Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).</li>
<li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pretargeted+PET+Imaging+Strategy+Based+on+Bioorthogonal+Diels-Alder+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry.</a> J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).</li>
<li>García, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096808961630061X">99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging.</a> Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).</li>
<li>Russell, R. G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonates%3A+The+First+40+Years%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonates: The First 40 Years.</a> Bone. 49 (1), 2-19 (2011).</li>
<li>Yazdani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bone-Seeking+Trans-Cyclooctene+for+Pretargeting+and+Bioorthogonal+Chemistry%3A+A+Proof+of+Concept+Study+Using+99mTc+and+177Lu-Labeled+Tetrazines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines.</a> J. Med. Chem. , (2016).</li>
<li>Alberto, R., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja980745t">A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand.</a> J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).</li>
<li>Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja003932b">Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3.</a> J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).</li>
<li>Lu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960894X12011584">Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).</li>
<li>Maresca, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0020169312001764">Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics.</a> Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).</li>
<li>Bartholomä, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+Mode+of+Action+of+Re%28CO%293+Thymidine+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22ChemMedChem%22%5BJournal%5D)">Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes.</a> ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

تم إعداد مجموعة من يخلب ثلاثي الشعب المرتبطة tetrazine من أقطاب مختلفة، وجرى تقييم فائدة المجمعات 99m ح في رد فعل IEDDA مع مشتق TCO في الجسم الحي. تم وضع 99m ح سيلة فعالة وقابلة للتكرار وضع العلامات لمدة خمس tetrazine-يخلب، حيث كان تركيز يجند 10 -3 م وأعقب خطوة وصفها من قبل deprotection من تي الجماعات بوتيل (للمركبات 2-5). تم استخدام تركيزات عالية من يجند لتحسين العائد الإشعاعية والحد من أوقات رد الفعل الذي التقلي...

يبقى 99m ح النظائر المشعة المهيمن المستخدمة في الطب النووي التشخيصي، مع أكثر من 50 مليون عملية التصوير التي أجريت في السنة في جميع أنحاء العالم 1، 2، 3. غالبية 99m كلاء ح المستخدمة سريريا هي نوع نضح المواد المشعة. هناك عدد محدود من المركبات المستهدفة بنشاط التي يتم فيها توجيه 99m ح ربط العلامات البيولوجية المحددة من خلال ربط لبناء الاستهداف. وغالبا ما تعوق إنشاء 99m المستهدفة المواد المشعة ح بتأثير 99m المجمعات TC-يجند على قدرة جزيء استهداف لربط العلامات البيولوجية من الفائدة، أو النظائر نصف الحياة ليست طويلة بما فيه الكفاية للاستخدام مع ارتفاع الجزيئات الحيوية الوزن الجزيئي مثل الأجسام المضادة. وهذه الأخيرة عادة ما يتطلب عدة أيام قبل أن يتم الحصول على الصور من أجل أن جزيء حيوي لمسح من غير المستهدفة TISS<html> UES. يقدم قبل استهداف نهجا بديلا للتغلب على هذه التحديات. قبل استهداف جنبا إلى جنب مع الكيمياء bioorthogonal وقد تبين أن يكون وسيلة فعالة لتطوير تحقيقات التصوير الجزيئي جديدة لكل مضان والإذاعة التصوير 4، 5، 6، 7، 8. ومعكوس الطلب الإلكترون ديلز-ألدر (IEDDA) التفاعل بين 1،2،4،5-tetrazine (TZ) ومشتقاتها -cyclooctene عبر (TCO)، كما هو موضح في الشكل رقم 1، وقد ثبت أن تكون فعالة بشكل خاص 6. رد فعل IEDDA مع هذه المكونات يمكن أن يحمل حركية سريعة في برنامج تلفزيوني (ك 2 ≈ 6000 م -1 ق -1) وانتقائية عالية، مما يجعلها مثالية للفي الجسم الحي قبل استهداف التطبيقات 9، 10. <html> e_content &quot;&gt; النهج الأكثر شيوعا ينطوي على إدارة ناقلات TCO المستمدة من الاستهداف وبعد فترة تأخير كافية، يدار من tetrazine رديولبلد. tetrazines رديولبلد على أساس 11 C، 18 F، 64 النحاس و 89 عنصر الزركون، و 111 في كان وذكرت 11، 12، 13، 14، 15. وفي المقابل، هناك واحد فقط تقرير ل99m ح المسمى TZ، الذي تم إعداده باستخدام نوع يجند HYNIC تتطلب استخدام المشترك بروابط لمنع بروتين ملزمة وتدهور في الجسم الحي 16. وكبديل لذلك، ونحن التقرير هنا توليف 99m ح (I) المسمى tetrazines باستخدام عائلة بروابط التي تشكل مجمعات ثلاثي الشعب مستقرة مع [99m ح (CO) 3] + الأساسية. العمر = &quot;1&quot;&gt; <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig1.jpg" /> الشكل 1: IEDDA رد فعل bioorthogonal بين tetrazine و-cyclooctene العابرة. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> عائلة بروابط أعد تحتوي يخلب ثلاثي الشعب التي تختلف في الاستقطاب وطبيعة المجموعة رابط بين منطقة ملزم المعادن وTZ (الشكل 2). وكان الهدف هو تحديد 99m ح-Tetrazine بناء يمكن أن توطين نحو فعال وتتفاعل مع مواقع المسمى TCO في الجسم الحي واضحة بسرعة عندما لا تكون ملزمة، من أجل انتاج عالية المستهدفة لغير المستهدفة النسب. لاختبار بروابط، تم استخدام TCO المشتقة من البايفوسفونيت (TCO-BP) 17. لقد أظهرنا في وقت سابق ان TCO-BP يموضع إلى مناطق استقلاب العظام نشط ويمكن أن تتفاعل معtetrazines رديولبلد في الجسم الحي 18. وهو كاشف مناسب لاختبار tetrazines الجديدة، لأنها يمكن أن تكون على استعداد في خطوة واحدة والتجارب لا يمكن أن يؤديها في الفئران العادية التي يحدث فيها توطين في المقام الأول في المفاصل (الركبتين والكتفين).

<table><tbody><tr><td>غاز الأرجون</td><td>Alphagaz</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>Na2CO3</td><td>EMD Millipore</td><td>106395</td><td>---</td></tr><tr><td>Na2B4O7&#183; 10H2O</td><td>Anachemia</td><td>S9640</td><td>---</td></tr><tr><td>KNaC4H4O6&#183; 4H 2 O</td><td>Anachemia</td><td>217255</td> <td>---</td></tr> <tr><td>Technelite 99m TC مولد</td><td>Lantheus التصوير الطبي</td> <td>---</td> <td>مصدر 99m TcO4-</td></tr><tr><td>0.9٪ سالين</td><td>لانثيوس التصوير الطبي</td> <td>---</td> <td>لمولد التصفية</td></tr><tr><td>1 M HCl</td><td>Lab Chem</td> <td>---</td> <td>---</td></tr><tr><td>MeOH</td><td>Caledon</td><td>---</td><td></td></tr><tr><td>---ACN</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>HPLC الصف</td></tr><tr><td>Millipore H2O</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Barnstead Nanopure</td><td>---</td></tr><tr><td>DCM</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>TFA</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td>pH 7.4 1x</td></tr><tr><td>BSA</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>A7906</td><td>---</td></tr><tr><td>Tween80</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>P8047</td><td>---</td></tr> <tr><td>إيزوفلوران</td><td>CDMV</td><td>108737</td><td>المورد: فريسينيوس كابي صحة</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Waters</td><td>1525 مضخة ثنائية ، 2998 كاشف مصفوفة الثنائي الضوئي ، E-SAT / IN ، كاشف Bioscan Flowcount PMT (البند # 15590)</td> <td>---</td></tr> <tr><td>عمود HPLC لتحليل وتنقية المركبات 2-4</td><td>Phenomenex</td><td>00G-4435-E0</td><td>الجوزاء & reg ؛ 5 & مايكرو ؛ م C18 110 &nbsp ؛ &Aring;, عمود LC 250 × 4.6 مم</td></tr><tr><td>عمود HPLC لتحليل وتنقية المركبتين 1 و 5</td><td>Waters&nbsp;</td><td>186003115</td><td>عمود XBridge BEH C18 ، 130 &Aring ؛ 5 & م ، 4.6 مم × 100 مم</td></tr><tr><td>مفاعل الميكروويف&nbsp;</td><td>Biotage&nbsp;</td><td>بادئ 8</td><td>---</td></tr><tr><td>Biotage V10 المبخر</td><td>Biotage&nbsp;</td><td>المسلسل # V1041</td><td>---</td></tr> <tr><td>معاير الجرعة</td><td>Capintec، Inc.&nbsp;</td><td>CRC-25R</td><td>---</td></tr> <tr><td>عداد جاما</td><td>Perkin Elmer</td><td>Wizard 1470 عداد جاما الأوتوماتيكي</td> <td>---</td></tr> <tr><td>مقياس غرفة &nbsp ؛</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP105 Delta Range</td><td>---</td></tr> <tr><td>قوارير الميكروويف&nbsp;</td><td>Biotage&nbsp;</td><td>355629</td><td>0.5-2 مل&nbsp;</td></tr></tbody></table>

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق bioorthogonal الكيمياء

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

يظهر الاستهداف المسبق جنبا إلى جنب مع الكيمياء المتعامدة الحيوية كطريقة فعالة لإنشاء مستحضرات صيدلانية إشعاعية جديدة. من بين الطرق المتاحة ، أثبت الإلكترون العكسي الذي يتطلب الإضافة الحلقية Diels-Alder (IEDDA) بين التيترازين المصنف بالإشعاع وعبر السيكلوكتين (TCO) المرتبط بجزيء حيوي أنه نهج متعامد حيوي عالي الفعالية لتصوير أهداف بيولوجية محددة. على الرغم من حقيقة أن التكنيتيوم -99 م لا يزال النظير الأكثر استخداما في الطب النووي التشخيصي ، إلا أن هناك ندرة في طرق تحضير 99mTc. نبلغ هنا عن إعداد عائلة من مشتقات ثلاثية الأسنان-مخلب-تيترازين ومجمعاتها Ttc(I). تم تصنيف هذه المركبات غير المعروفة حتى الآن ب 99mTc باستخدام طريقة بمساعدة الميكروويف بنسبة 31٪ إلى 83٪ من الإنتاجية الكيميائية المشعة. المنتجات مستقرة في محلول ملحي و PBS وتتفاعل بسرعة مع مشتقات TCO في المختبر. تم إثبات قدراتهم على الاستهداف المسبق في الجسم الحي باستخدام مشتق TCO-bisphosphonate (TCO-BP) الذي يتم توطينه في مناطق التمثيل الغذائي النشط للعظام أو الإصابة. في دراسات الفئران ، أظهر 99 مترامن Tc-tetrazines تركيزات عالية من النشاط في مفاصل الركبتين والكتف ، وهو ما لم يلاحظ عند إجراء التجارب في غياب TCO-BP. اختلف الامتصاص الكلي في الأعضاء غير المستهدفة والحركية الدوائية اختلافا كبيرا اعتمادا على طبيعة الرابط وقطبية المخلب.

تم توليفها بروابط باستخدام الربط، والدوال chelators مختلفة عبر استراتيجية أمينة الاختزالية بسيطة (الشكل 2)، تليها اقتران المنتج إلى tetrazine المتاحة تجاريا 22، 23. تم تنفيذ Radiolabeling باستخدام نفس الأسلوب لجميع المركبات، وكان تكرار للغاية. وكان محسن العملية من خلال تغيير درجة الحموضة، وكمية من يجند وفترة رد الفعل ودرجة الحرارة وعندها 99m ح-رديولبلد المركبات ا...

هنا ، نصف بروتوكولا للوضع الإشعاعي والاختبار في الجسم الحي لمشتقات مخلب التيترازين ثلاثي الأبعاد 99mTC (I) للاستهداف المسبق والكيمياء المتعامدة الحيوية.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنتاج تيترازينات موسومة بالتكنيشيوم-99m للتصوير مسبق الاستهداف باستخدام الكيمياء الحيوية المتعامدة مع جزيئات حيوية معدلة بـ trans-cyclooctene كناقلات استهداف. توفر هذه الطريقة منصة جديدة وهامة لتطوير مستحضرات صيدلانية إشعاعية مبتكرة. ومن خلال الاستهداف المسبق، يمكن استخدام معقدات التكنيشيوم الموصوفة هنا لتصوير مجموعة واسعة من الأعضاء والأنسجة والمؤشرات الحيوية.تتميز هذه التقنية بتوفيرها منهجية قوية ومفصلة خطوة بخطوة لإنتاج مركبات التيترازين الموزونة إشعاعياً بـ technetium-99m، وهو النظير الطبي الأكثر استخداماً في الطب التشخيصي. ويمكن استخدام هذه التقنية مع ناقلات استهداف مختلفة، بما في ذلك الجزيئات الصغيرة والأجسام المضادة. كما يمكن استخدامها في العلاج الإشعاعي عن طريق استبدال technetium بنظائر rhenium الباعثة لجسيمات بيتا.ستقوم نانسي جانزن، فنية البيولوجيا في مختبرنا، بتوضيح جزء من الإجراءات الحيوانية. لبدء إجراء الوسم الإشعاعي، اخلط في وعاء ميكروويف ثمانية mg من potassium boranocabonate، و15 mg من sodium carbonate، و20 mg من sodium tetraborate decahydrate، و25 mg من potassium sodium tartrate tetrahydrate. قم بتطهير الوعاء بغاز الأرجون لمدة 10 دقائق.بعد ذلك، أضف أربعة ملليلتر من بيرتكنتيت التكنيشيوم-99m في محلول ملحي بتركيز 0.9% بنشاط إشعاعي يبلغ 1,110 ميجابيكريل إلى القارورة. قم بتحميل خليط التفاعل في مفاعل ميكروويف، وحركه لمدة 10 ثوانٍ. ثم سخن الخليط عند درجة حرارة 110 درجة مئوية لمدة 3.5 دقيقة للحصول على كاتيون التكنيشيوم-99m ثلاثي الماء ثلاثي الكربونيل.أضف حوالي 400 µL من حمض الهيدروكلوريك بتركيز 1 M لضبط pH المحلول إلى ما بين 3.5 و4. بعد ذلك، وبالنسبة لكل ربيطة تيترازين، أذب 2 mg من الربيطة في 250 µL من الميثانول. أضف 250 µL من معقد technetium-99m بنشاط إشعاعي قدره 74 MBq إلى كل محلول ربيطة.سخن الخليط في مفاعل ميكروويف عند 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. وبالنسبة لربيطات التيترازين التي تحتوي على مجموعات حماية t-Butyl، انقل المحلول من قارورة الميكروويف إلى قارورة وميض سعة 20 مل، ثم بخر المذيب وأعد إذابة كل معقد في 1 مل من محلول مكون من ثنائي كلورو ميثان وحمض ثلاثي فلورو أسيتيك بنسبة واحد إلى واحد من حيث الحجم. بعد ذلك، انقل المحلول إلى قارورة ميكروويف، وسخن هذه المعقدات في مفاعل ميكروويف عند 60 درجة مئوية لمدة تتراوح من 6 إلى 10 دقائق لإزالة حماية الربيطات.بَرّد المعقدات حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة، ثم بخر المذيب. أعد إذابة الرواسب في 500 µL من محلول مائي بنسبة واحد إلى واحد من إما الأسيتونيتريل أو الميثانول مع الماء قبل الانتقال إلى التنقية باستخدام HPLC. استخدم HPLC ذات الطور المعكوس C18 لتنقية كل معقد تيترازين مُعلم إشعاعياً باستخدام تدرج شطف يتراوح من 30 إلى 70 ثم إلى 40 إلى 60 من الأسيتونيتريل إلى الماء على مدار 20 دقيقة، مع وجود 0.1% حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك في سائل الشطف طوال العملية.اجمع المنتج المنقى عند ظهوره في أثر أشعة غاما. بعد ذلك، قم بالحقن المشترك لكل معقد مُعلم مع محلول يحتوي على 0.125 milligrams من معقد الراديوم-تيترازين المقابل في 20%methanol في الماء. قارن أوقات الاستبقاء لذروة معقد الرينيوم في أثر الأشعة فوق البنفسجية (UV) وذروة معقد التكنيشيوم في أثر أشعة غاما للتحقق من هوية ذروة غاما.قم بإزالة المذيب من كل مركب تكنشيوم-تيترازين منقى. قم بتركيب كل مركب بتركيز 7.4 kilobecquerels لكل microliter في محلول ملحي منظم بالفوسفات مع 0.5% bovine serum albumin و 0.01% polysorbate 80. وبالنسبة لكل فأر تجارب، اسحب في حقنة 100 microliters من محلول بتركيز خمس microgram لكل microliter من مشتق TCOPB في محلول ملحي لتحضير جرعة بمقدار 20 milligram لكل kilogram.قم بتوصيل إبرة قياس 30 بمحقنة الجرعات. ضع الفأر الخاضع للتجربة في جهاز تثبيت بدني. حدد الأوردة الموجودة على السطح الجانبي للذيل على بعد سنتيمترين تقريبًا من نهاية الذيل، ثم امسح المنطقة بمسحة كحولية.أدخل إبرة المحقنة بزاوية ضحلة موازية للوريد. احقن مشتق TCOBP ببطء. اسحب الإبرة ثم ضع قطعة من الشاش النظيف مع الضغط قليلاً على موقع الحقن حتى يتوقف النزيف.بعد ساعة واحدة من حقن مشتق TCOBP، يتم إعطاء جرعة مقدارها 100 µL من معقد تيترازين technetium-99m المطلوب بنشاط إشعاعي يبلغ حوالي 0.74 MBq عن طريق الحقن في وريد الذيل. استخدم جهاز معايرة الجرعات لقياس النشاط الإشعاعي لعينة اختبار بحجم 100 µL من معقد التكنيشيوم عند وقت الحقن. احتفظ بعينة الاختبار لإجراء القياسات اللاحقة.قم بتخدير الفأر باستخدام خليط غازي مكون من 3% isoflurane و 2% oxygen بعد ست ساعات من الحقن. ضع الفأر على ظهره مع وضع أنفه في المخروط الأنفي لضمان استمرار التخدير، وحدد موقع الزائدة الخنجرية. قم بتوصيل إبرة قياس 25-gauge بمحقنة معالجة مسبقاً بـ heparin.أدخل الإبرة بزاوية 20 درجة أسفل الناتئ الخنجري، وإلى اليسار قليلاً من الخط الناصف. وبمجرد إدخال الإبرة بالكامل، اسحب المكبس ببطء للتحقق من وجود دم في محور الإبرة، مما يؤكد نجاح عملية ثقب القلب. أعد ضبط وضعية الإبرة حسب الحاجة.بمجرد ثقب القلب، اسحب ملليمتر واحد من الدم ببطء داخل المحقنة. انقل عينة الدم إلى أنبوب عد موزون مسبقاً. قم بقتل الفأر عن طريق خلع الفقرات العنقية أثناء وجوده تحت التخدير.ضع الحيوان الذي تم قتله رحيمًا في كيس بلاستيكي وقم بقياس نشاط الجسم بالكامل باستخدام معاير الجرعات. بعد ذلك، اجمع عظام الركبة والكتف، والمرارة، والكليتين، والكبد، والغدة الدرقية والرغامى، والذيل. واجمع أيضًا المعدة، والأمعاء الدقيقة، والأمعاء الغليظة والأعور، والمثانة البولية مع محتوياتها.اغسل الدم من جميع الأنسجة المجمعة باستثناء المرارة والمثانة البولية باستخدام محلول ملحي منظم بالفوسفات. جفف الأنسجة عن طريق التربيت، وضع كل نسيج في أنبوب عد موزون مسبقاً. قم بقياس النشاط المتبقي للجثة.قم بوزن كل عينة من الأنسجة، واحسب كتلة النسيج بمفرده. استخدم عداد غاما متعدد الكواشف لقياس نشاط جزء قدره 5 µL من عينة اختبار معقد التكنيشيوم. وباستخدام القيمة التي تم الحصول عليها بعدد العدات في الدقيقة والنشاط المقاس في وقت الحقن، احسب عامل التحويل.قم بقياس نشاط كل عينة من الأنسجة والسوائل باستخدام كاشف غاما. حوّل القيم إلى ميكروكوري (microcurie)، ثم قم بتطبيع (normalize) كل قيمة بناءً على وزن العضو لتحديد النسبة المئوية للجرعة المحقونة لكل جرام من النسيج. كرر هذه العملية مع مجموعة إضافية من الفئران دون حقن مشتق TCOPB لتكون بمثابة سلسلة ضابطة سلبية.باستخدام هذه الطريقة، تم وسم خمسة معقدات تترازين تختلف في تركيبات الرابط والقائد الرئيسية باستخدام التكنيشيوم-99m. واستُخدم مشتق TCOPB، الذي يتمركز في المناطق ذات معدل دوران الكالسيوم المرتفع في العظام، لاستهداف مسبق لمفاصل الكتف والركبة في الفئران. كما تم حساب نسب النسبة المئوية للجرعة المحقونة لكل جرام من النسيج للعظام مقارنة بالدم لكل مركب من مركبات التترازين.تخلص الجسم من المركبات الخمسة جميعها من الدم بسرعة واستهدفت العظام، مما يشير إلى حدوث تفاعل الاقتران الحيوي المتعامد الانتقائي بين مركبات التيترازين ومشتق TCOBP داخل الجسم الحي. وأظهر المركب الثالث أفضل مزيج من الاستهداف والتخلص من الدم. كما أشارت تجارب الضبط السلبية إلى أن معقدات التيترازين الملحقة بنظائر مشعة لم تتمركز بشكل ملحوظ في العظام في حالة غياب مشتق TCOBP.على سبيل المثال، عند عدم إعطاء مشتق TCOBP، ظهرت مستويات عالية من المركب الثاني في المرارة والأمعاء ولكن بكميات قليلة جداً في العظام. ولوحظ تباين واسع في التموضع النسيجي لدى الفئران التي تلقت مشتق TCOBP بين المركبات الخمسة التي تم اختبارها. فعلى سبيل المثال، ظهرت كمية قليلة جداً من المركب الثالث في الأمعاء الغليظة أو الكبد أو البول والمثانة مقارنة بالمعقدات الأخرى، بينما ظهرت كمية أكبر بكثير من المركب الثالث في العظام.بمجرد إتقانها، يمكن تنفيذ تقنية الوسم الموصوفة هنا من البداية إلى النهاية في أقل من ساعتين إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. وأثناء محاولة تطبيق هذه التقنية، من المهم التأكد من وزن جميع الكواشف بدقة وتطهير الأملاح باستخدام الأرجون قبل إضافتها إلى محلول التكنيشيوم. ومن الضروري أيضاً ضبط pH محلول التكنيشيوم ليكون بين 3.5 إلى 4 قبل إضافة ربيطة التيترازين.بعد مشاهدة هذا الفيديو، ينبغي أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير وتنقية التترازينات الموصومة بالتكنيشيوم وكيفية استخدامها لإنتاج أدوية إشعاعية جديدة باستخدام استراتيجية الاستهداف المسبق والكيمياء الحيوية المتعامدة. لا تنسَ اتخاذ الاحتياطات المناسبة عند التعامل مع المواد المشعة، مثل فهم نوع الإشعاع المنبعث وأفضل الطرق لتدريع العينات والتعامل معها.

preparation-evaluation-99mtc-labeled-tridentate-chelates-for-pre

Research

JoVE Journal

Chemistry

الكيمياء

يصف هذا الفيديو تقنية العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا أو PRIT ، حيث يتم إعطاء المترافقات المناعية متبوعة بالروابط الإشعاعية لعلاج الأورام. يقلل هذا العلاج المناعي الإشعاعي من جرعات الإشعاع إلى الأنسجة السليمة ويستخدم النويدات المشعة ذات عمر النصف المنخفض للغاية غير المتوافق مع النواقل القائمة على الأجسام المضادة.

العلاج المناعي الإشعاعي الموجه مسبقا: طريقة للتوصيل المستهدف للنويدات المشعة العلاجية للأورام

لإثبات السرطان MR التصوير الجزيئي مع الببتيد الصغيرة المستهدفة التصوير بالرنين المغناطيسي وكيل النقيض محددة لبروتينات البلازما في متخدر سدى الورم في الفأر نموذج البروستاتا السرطانية.

MR التصوير الجزيئي للسرطان البروستاتا مع وكيل النقيض المستهدفة الجزيئية الببتيد الصغيرة CLT1

ونحن نقدم وسيلة لالسريع، الشلل عكسها من جزيئات صغيرة والجمعيات جسيمات متناهية الصغر بين functionalized لسطح مأكل مثل الطحين الرنين (SPR) دراسات، وذلك باستخدام متسلسلة على رقاقة bioorthogonal الكيمياء إضافة حلقية والضد مستضد الالتقاط.

ميكروفلويديك على رقاقة رد الفعل التقاط-إضافة حلقية لشل حركة عكسية جزيئات صغيرة أو هياكل متعدد المكون للتطبيقات الاستشعار البيولوجي

تم تسخير الطلب على الإلكترون العكسي المتعامد بيولوجيا Diels-Alder cycloadd لإنشاء استراتيجية تصوير PET فعالة ومعيرية مستهدفة مسبقا للسرطان. في هذا البروتوكول ، يتم وصف خطوات هذه المنهجية في سياق نظام نموذجي يستخدم الجسم المضاد المستهدف لسرطان القولون والمستقيم huA33 و 64Cu-Radioligand المسمى Cu.

تسخير الطلب Bioorthogonal معكوس الكترون ديلز-ألدر الإضافة الحلقية لPretargeted PET التصوير

فئة نظرا لنصف عمرها الإشعاعي متعدد الأيام وخصائص التحلل المواتية ، فإن المعدن المشع الباعث للبوزيترون 89Zr مناسب للغاية للاستخدام في المستحضرات الصيدلانية المشعة القائمة على الأجسام المضادة لتصوير التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني. في هذا البروتوكول ، سيتم وصف الاقتران الحيوي والتخليق الإشعاعي والتطبيق قبل السريري ل 89جسما مضادا مسمى Zr.

وBioconjugation وRadiosynthesis من<sup&gt; 89</sup&gt; الأجسام المضادة عنصر الزركون-DFO المسمى

ووصف إجراءات مفصلة لتركيب لأزيد المسمى I-125 وradiolabeling من dibenzocyclooctyne (DBCO) -group مترافق، جزيئات الذهب 13 نانومتر الحجم باستخدام خالية من النحاس فوق رد فعل.

بروتوكول الأمثل لRadiolabeling كفاءة من جزيئات الذهب عن طريق استخدام<sup&gt; 125</sup&gt; أزيد المجموعة الترقيعي المسمى أنا

بعد إعداد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة 64 النحاس تعديل ملزم لالفئران المعدلة وراثيا مستقبلات الخلايا التائية والخلايا T هي رديولبلد في الجسم الحي، وتحليلها للبقاء، وظائف، والاستقرار ووضع العلامات وموت الخلايا المبرمج، ونقلت adoptively في الفئران مع مجرى الهواء من نوع تأخر فرط الحساسية رد فعل للتصوير غير الغازية التي كتبها التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني / التصوير المقطعي (PET / CT).

الفئران اللمفاويات وسمها من قبل<sup&gt; 64</sup&gt; النحاس والأجسام المضادة مستقبلات استهداف ل<em&gt; في فيفو</em&gt; الاتجار خلية بواسطة PET / ط م

الببتيدات المشتقة من الفيروسية بالإضافة إلى جسم-يصرف (ACs) نهج تكتسب زخما بسبب إمكانية إيصال حمولات الجزيئية مع تراكم خلايا الورم زيادة. استخدام أساليب مشتركة لتقييم تصريف الببتيد والتيار المتردد وتراكم حمولة داخل الخلايا، واستهداف الورم، هذا البروتوكول يساعد الباحثين خلال مراحل التطوير الأولية الرئيسية.

تعديل التقييم الأولى لجسم-يصرف مع الببتيدات المشتقة من الفيروسية لزيادة تراكم الخلوية وتحسين استهداف الورم

ويصف هذا البروتوكول التوليف وتوصيف ترانس-سيكلوكتيني (TCO)-تعديل الأجسام المضادة وراديوليجاند لو المسمى تيترازيني (Tz) 177راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير). وبالإضافة إلى ذلك، أنها تفاصيل استخدام هذه الثوابت اثنين للدراسات الطولية العلاج في نموذج موريني سرطان القولون والمستقيم و في فيفو بيوديستريبوتيون.

راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس

في هذا البروتوكول، ونحن سوف تصف توليف القرون، كاشف المستندة إلى [سولفون] فينيوكساديازوليل الميثيل للمرفق الموقع انتقائية من الشحنات إلى ثيولس الجزيئات الحيوية، لا سيما الأجسام المضادة. وبالإضافة إلى ذلك، سوف يصف لنا التوليف وتوصيف تشيلاتور بيفونكشونال الحاملة لقرون وفي التصريف لجسم نموذجي.

تعديل التوليف وبيوكونجوجيشن من الكواشف ثيول المتفاعلة لإنشاء الموقع بشكل انتقائي إيمونوكونجوجاتيس

يظهر هنا بروتوكول لخلايا التسمية الإشعاعية ذات النظائر المشعة للتصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) ، 89 Zr (t1/2 78.4 h) ، باستخدام سينثون وضع العلامات الإشعاعية الجاهزة للاستخدام ، [89 Zr] Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr] Zr-DBN). تسمح خلايا الملصقات الإشعاعية التي تحتوي على [89Zr] Zr-DBN بالتتبع والتصوير غير الباضعين للخلايا ذات العلامات الإشعاعية التي يتم إعطاؤها في الجسم باستخدام التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لمدة تصل إلى 7 أيام بعد تناولها.

التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني لتهريب الخلايا: طريقة لوضع العلامات الإشعاعية للخلايا

تعلم بروتوكول تسميع مشتقات التترازين بالتكنيشيوم-99m لتصوير الأعضاء المستهدفة مسبقاً باستخدام الكيمياء الحيوية المتعامدة. هذه الطريقة تطور الأدوية الإشعاعية الجديدة وتُحسّن دقة التصوير الطبي.

إعداد وتقييم

استكشف المزيد من الفيديوهات