Name: تربية اللبود الكتفي، القراد الأسود أرجل: تغذية مراحل غير ناضجة على الفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: تعلم بروتوكول تغذية القراد غير الناضج على الفئران لتحسين معدلات البقاء وتقليل الإجهاد على المضيف. تُستخدم هذه الطريقة لتبسيط تربية مستعمرات القراد وجمعها بكفاءة في يوم واحد.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يقر المؤلفون بالمساعدة من طاقم طب المختبر ، جامعة نيفادا ، رينو. تلقت MM تمويلا من Nevada INBRE.

الموافقة على البروتوكول (رقم 00682) المبينة أدناه من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة نيفادا رينو ويتبع المبادئ التوجيهية من جامعة نيفادا والحيوان جنة أخلاقيات البحث رينو. باختصار، كانت تخدير الفئران مع isoflurane وكانت تستخدم مخروط الأنف للحفاظ على مستويات الأيزوفلورين مستمرة لمدة 20 دقيقة. تم استخدام مرهم بيطري لمنع جفاف العيون تحت التخدير. وقد استخدم قرصة اصبع القدم للتأكد من مستوى التخدير وتم قياس معدل التنفس في جميع أنحاء الإجراء. تم الاحتفاظ بها الفئران في أقفاص الفردية ومراقبتها حتى استعاد وعيه. واستخدمت الفئران مرة واحدة فقط لتغذية القراد وكان الموت الرحيم آخر القراد الانتعاش. تم تنفيذ القتل الرحيم من قبل مختبر الموظفين العاملين الطب الحيواني. واستخدمت CO 2 والتفكك عنق الرحم عن القتل الرحيم للحيوانات. ملاحظة: العمل على القراد يتطلب استخدام مكافئ الحماية الشخصية كاملةuipment. لعد القراد غير الناضجة، وارتداء معاطف المختبر الأبيض، وقفازات النتريل طويلة لتغطية فتح الأكمام من معطف المختبر توج مع العصابات المطاطية، وأحذية مغلقة اصبع القدم. لإصابة الفئران مع القراد، واستخدام شبكة الشعر، والمآزر المتاح، وقفازات طويلة الأكمام على الأكمام، ويغطي القدم. استخدام المآزر البيضاء أو الخفيفة الملونة للكشف عن القراد الضال. افحص القفازات والأكمام بشكل دوري للقراد. 1. إعداد غرفة للإسكان الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين غرفة منفصلة لإيواء الفئران المصابة بالقراد. وضع حصيرة لزجة أو على الوجهين الشريط السجاد خارج وداخل الباب لمنع عرضي الهروب القراد. </li></ol> 2. عد القراد للماوس الإصابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الشريط على الوجهين في جميع أنحاء حواف أعلى من 7 &quot;× 5&quot; × 14 &quot;حاوية بلاستيكية وملء بالماء إلى حوالي 2 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مربع صغير آخر أو طبق بتري في وسط الحاوية وملء بالماء إلى 1 سم خلق &amp;# 34؛ خندق &quot;حول هذه الحاوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين القارورة التي تحتوي على اليرقات أو الحوريات داخل طبق بتري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام فرشاة الطلاء غرامة لإزالة اليرقات أو الحوريات من قارورة والعد تحت المجهر. عد 50 اليرقات أو 25 الحوريات في قوارير التلألؤ منفصلة. تغطية قارورة على الفور مع شبكة النايلون أو شاشة قماش الأورجانزا وإغلاق مع العصابات المطاطية. </li></ol> 3. إصابة الفئران مع القراد غير ناضجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدم مقعد عمل أبيض أو خفيف اللون وقم بإحكام الشريط على الوجهين حول محيط منطقة العمل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس مع إيسوفلوران. التحقق من مستوى التخدير من قبل أخمص القدمين قرصة. مرة واحدة تخدير، ونقل الماوس إلى وسادة التدفئة مغطاة المناشف الورقية ونعلق على مخروط الأنف لاستمرار إيسوفلوران العرض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم النفط القائمة على هلام العين لتجنب جفاف. لاحظ نمط التنفس من الماوس لضبط مستويات الأيزوفلورين (80 - 230 الأنفاس في الدقيقة أمر طبيعي.، خفض مستوى الأيزوفلورين إذا برإيثينغ معدل أقل من 80 نفسا في الدقيقة لتجنب قتل الحيوان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ قارورة واحدة من 50 اليرقات أو 25 الحوريات ووضع القراد تحت الفراء على الرأس بين الأذنين مع فرشاة الطلاء ( الشكل 1 ). الحفاظ على الماوس تحت التخدير لمدة 20 دقيقة بعد التنسيب لإعطاء ما يكفي من الوقت للقراد نعلق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرك الماوس إلى معيار، حذاء من البلاستيك مربع من نوع قفص الماوس القابل للتصرف مع الأغطية الساكنة والفراش الأبيض. توفير اللعب والماء، والغذاء ليبيتوم الإعلانية وفقا للرعاية الماوس العادية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين قفص الماوس داخل الفئران أكبر أو قفص جيربيل اصطف مع شريط لاصق على الوجهين حول حواف أعلى. ملء القفص الخارجي مع 3 سم من الماء ( الشكل 2 ). </li></ol> 4. جمع القراد من الفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القراد غير الناضجة فصل بين أيام 3 و 6 من التغذية. تحقق من الأقفاص وخندق المياه للقراد إنغورجد كل يوم بعد يوم 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع القراد منفصلة من القفص بين أيام 4 و 6. استخدام الألمر فرشاة أو ملقط لينة لالتقاط القراد إنغورجد وتخزينها في قوارير التلألؤ نظيفة توج مع شبكة قماش النايلون المضمون مع العصابات المطاطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير وفحص الماوس في يوم 7 عن أي القراد المتبقية المرفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الفراش، الحوض الغذائي، وزجاجة المياه للقراد إنكورجيد في يوم 7. الموت ببطء الفئران بعد الإجراء كما هو موضح أعلاه. الأوتوكلاف أقفاص القابل للتصرف، والفراش، وزجاجة المياه، وحوض الغذاء لتجنب أي الهروب القراد أونفيد. </li></ol> 5. تخزين الاحتياطي الفيدرالي القراد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على القراد إنكورجد في 90٪ الرطوبة، 20 ° C، و 12:12 ضوء: دورة مظلمة في الرطوبة ودرجة الحرارة حاضنة تسيطر حتى يحدث مولتينغ. قد يستغرق ذلك ما بين 12 و 18 أسبوعا تقريبا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين أن الرطوبة العالية تعزز البقاء على قيد الحياة القراد، كما أنه يجعل القراد عرضة للفرط الفطري. تحقق القراد تغذية تحت المجهر مرة واحدة على الأقل في الأسبوع للعفن. إذا تم الكشف عنها، وغسل الناجين في الايثانول 70٪ لمدة 5دقيقة، شطف في الماء، ونقل إلى ورقة مرشح لتجف، وينقل إلى قارورة نظيفة جديدة. </li></ol>

<ol><li>Gleim, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+associated+with+tick+bites+and+pathogen+prevalence+in+ticks+parasitizing+humans+in+Georgia%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26amp%3B+Vectors%22%5BJournal%5D)">Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA.</a> Parasites &amp; Vectors. 9 (125), Available from:
 <a target="_blank" href="http://doi.org/10.1186/s13071-016-1408-6">http://doi.org/10.1186/s13071-016-1408-6</a> 1-13 (2016).</li>
<li>Krober, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
<li>Kuhnert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+of+Hard+Ticks+In+Vitro%3A+New+Perspectives+for+Rearing+and+for+the+Identification+of+Systemic+Acaricides%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides.</a> ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).</li>
<li>Voigt, W. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8233589">In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium.</a> Parasitol. 107, 257-263 (1993).</li>
<li>Gregson, J. D. Ticks. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGregson%2C+JD+%22Insect+Colonization+and+Mass+Production%22">Insect Colonization and Mass Production</a>. Smith, C. N. , Academic Press. New York. 49-72 (1966).</li>
<li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSonenshine%2C+DE+%22Biology+of+Ticks%22">Biology of Ticks</a>. 2, Oxford University Press. New York. (1993).</li>
<li>Bouchard, K. R., Wikel, S. K. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBouchard%2C+KR+%22Biology+of+Disease+Vectors%22">Biology of Disease Vectors</a>. Marquaedt, W. C. , Elsevier. New York. 705-711 (2005).</li>
<li>Schumaker, T. S., Barros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+Ornithodoros+%28Alectorobius%29+talaje.+%28Acari%3AArgasidae%29+in+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory.</a> J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).</li>
<li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi+%28Acari%3AIxodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).</li>
<li>James, A. M., Oliver, J. H. Jr Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Feeding+and+host+preference+of+immature+Ixodes+dammini%2CI.scapularis%2Cand+I.pacificus.(Acari%3AIxodidae)">J. Med. Entomol</a>. 27, 324-330 (1990).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

خطوات حاسمة في إطار بروتوكول من المهم أن يكون لديك عدة مستويات من تدابير السلامة عند تربية القراد لتجنب هروب عرضي. استخدام شريط لاصق وخندق المياه حاسمة لضمان السلامة. فمن المهم للحفاظ على الماوس تخدير على وسادة التدفئة للحفاظ على ثبات درجة حرارة الجسم. كما وجدنا أن حلق الماوس لا تقدم أي فائدة إضافية لمرفق القراد. يمكن الاحتفاظ الماوس الفردي في نفس القفص لمدة أسبوع واحد في المعينة &quot;غرفة القراد&quot; الذي فرض الم...

القراد والطفيليات الخارجية لدم تلزم من الفقاريات وتوزع في جميع أنحاء العالم. في الولايات المتحدة، لا يقل عن 11 نوعا من القراد هي ناقلات الجراثيم ذات الأهمية للصحة العامة 1. اللبود الكتفي هو المسؤول عن نقل العديد من مسببات الأمراض مثل العوامل المسببة للمرض لايم (بوريليا برغدورفيرية) الحمى الراجعة (B. miyamotoi)، anaplasmosis المحببات البشري (Anaplasma phagocytophilum)، والبابيزيا (بابيزيا النيابة.). وعلى الرغم من أهمية I. الكتفي بمثابة ناقلات الأمراض، وجمع هذه العناكب في وفرة من البرية للدراسات في المختبر ليست دائما ممكنة. ولذلك، فإن إنتاج القراد تربى مختبر صحي ضروري لدراسات في علم الأحياء القراد، والتفاعلات الممرض القراد. دورة حياة كل القراد الصلب (الأسرة اللبوديات)، بما في ذلك I. الكتفي، تتكون من البيض وثلاثة أكتيفe مراحل: اليرقة، الحورية، والكبار. تتغذى كل مرحلة نشطة على مضيف الفقاريات. التفاعلات المعقدة التي تحدث بين القراد ومضيفيهم على مدى عدة أيام من التعلق والتغذية يكاد يكون من المستحيل تكرار باستخدام المغذيات الاصطناعية، ومن غير المرجح أن توفر ما يكفي من الأرقام من القراد تغذية للتربية الجماعية 2 ، 3 ، 4 . لذلك، يتم استخدام الفئران الحية والأرانب في كثير من الأحيان كمضيفات لتربية غير ناضجة (اليرقات والحوريات)، ومراحل ناضجة (البالغين) من القراد، على التوالي. متطلبات مضاعفات متعددة لتغذية الدم خلال كل مرحلة تنموية تعقيد زراعة القراد، وهو الوقت والتكلفة مكثفة 5 ، 6 ، 7 . تتطلب معظم بروتوكولات تربية القراد حفظ الفئران في قفص الطابق شبكة الأسلاك المعلقة 7 ، 8 أو في كا أسطوانيغي من هذه الأبعاد أن الحيوان لا يمكن أن تتحرك بحرية والعريس نفسه 6 ، 9 ، 10 . يتم نقل هذه الأقفاص أسطوانية في وقت لاحق إلى قفص الأحذية مع شبكة الأسلاك. إنغورجد، ثم يتم جمع القراد منفصلة من الماء تحتها. ومع ذلك، يؤدي هذا الأسلوب في تعريض القراد تغذية للمياه الملوثة بالبول والبراز التي يمكن أن تزيد من النمو الفطري والوفيات القراد 9 . وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يزيد من إمكانية القراد الهروب من الحوض المائي، فضلا عن التسبب في الإجهاد على الفئران. للتحايل على هذه المشاكل، ونحن هنا تظهر القراد اليرقات التغذية على الفئران داخل البلاستيك صندوق الأحذية من نوع أقفاص القابل للتصرف. هذه الطريقة تسمح للسلوك الطبيعي من الفئران، ويزيد الانتعاش القراد إنغورجد، ويقلل من الوفيات القراد بسبب التلوث.

<table><tbody><tr><td>مرهم Puralube البيطري</td><td>أمازون</td><td></td><td>متوفر من أي متجر للحيوانات الأليفة أو متجر عبر الإنترنت</td></tr><tr><td>قفص فأر يمكن التخلص منه</td> <td>&nbsp ؛ مبتكر ، سان دييغو ، كاليفورنيا &nbsp ؛</td><td>MV 2</td><td>مجموعة من القاع والغطاء</td></tr> الأبيض <tr><td>ألفا دري الفراش&nbsp;</td><td>توريد المختبر ، فورت وورث ، تكساس</td> <td>& nbsp ؛ ألفا دري & تجارة;</td><td></td></tr></tbody></table>

تربية<em&gt; اللبود الكتفي،</em&gt; القراد الأسود أرجل: تغذية مراحل غير ناضجة على الفئران

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

إيكسوديس كتفي ، ناقلات مرض لايم، هي واحدة من ناقلات الأمراض الأكثر أهمية في شرق وغرب الولايات المتحدة الأمريكية. هذا النوع هو ثلاثة مضيف القراد الذي يتطلب وجبة الدم من المضيف الفقاريات لكل مرحلة التطوير، والإناث البالغات تتطلب وجبة الدم للاستنساخ. القراد اليرقات تعلق على مضيفهم لمدة 3-5 أيام للتغذية وإسقاط قبالة المضيف عندما إنكورجيد تماما. هذا الاعتماد على العديد من المضيفين مختلفة ووقت المرفقة طويلة لالتحام يعقد تعقيد القراد في إعداد المختبر. ومع ذلك، لفهم علم الأحياء القراد والتفاعلات الممرض القراد، وإنتاج القراد صحية، والمختبرات تربيته أمر ضروري. هنا، علينا أن نبرهن على بروتوكول بسيط وفعالة من حيث التكلفة للقراد غير ناضجة التغذية على الفئران. قمنا بتعديل البروتوكولات القائمة لانخفاض الضغط على الفئران وزيادة القراد نجاح التغذية والبقاء على قيد الحياة باستخدام أقفاص المتاح دون قيعان شبكة لتجنب الاتصال من القراد وايث المياه الملوثة مع الفئران البول والبراز.

قمنا بتعديل بروتوكولات تربية القراد الحالية 6 ، 10 لتحسين كفاءة التغذية وخفض الضغط على المضيف الماوس. وأظهرت النتائج أن أقفال الماوس نمط صندوق الأحذية القياسية هي مناسبة تماما لتربية القراد. وفرت الفراش الأبيض تباين جيد لسهولة جمع القراد تغذية. صعدت معظم القراد جدران الحاويات بعد التغذية وكان من السهل جمعها. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الغطاء المجهز الضيق من الصناديق البلاستيكية التي يمكن التخلص...

إنتاج القراد المختبرية صحية القراد هو ضروري للدراسات على البيولوجيا القراد، والتفاعلات الممرض القراد. هنا علينا أن نبرهن على بروتوكول بسيط لتغذية غير ناضجة القراد الذي هو فعالة من حيث التكلفة وأقل إرهاقا للفئران.

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

يتمثل الهدف العام من بروتوكول تغذية القراد هذا في تحسين المعايير الحالية من خلال زيادة معدلات بقاء القراد الذي يتغذى على الدم، مع تقليل الإجهاد الواقع على القارض المضيف. وبالإضافة إلى تبسيط تربية مستعمرات القراد، توفر هذه الطريقة وسيلة أسهل لجمع عدد كبير من القراد المتغذي على الدم في يوم جمع واحد، وهو أمر ضروري للإجابة على أسئلة بيولوجية رئيسية في مجالات البيولوجيا الكلية. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في عدم تعرض القراد للمياه التي تحتوي على فضلات الفئران، مما يقلل من نفوق القراد.بالإضافة إلى ذلك، يمكن جمع القراد في يوم واحد، مما يقلل من الإجهاد الذي يتعرض له الفأر. ولحفظ أنابيب القراد من أجل عدها، قم بتجهيز وعاء يمنع الهروب إلى أدنى حد؛ وذلك بوضع شريط لاصق مزدوج الوجه على طول الحواف العلوية لوعاء بلاستيكي.بعد ذلك، املأ الحاوية بنحو سنتيمترين من الماء. ثم، ضع صندوقاً صغيراً آخر أو طبقاً في مركز الحاوية، واملأه بنحو سنتيمتر واحد من الماء، بحيث يغرق ويبقى في موضعه. ضع قوارير يرقات القراد أو الحوريات داخل هذا الصندوق أو الطبق.لعدّ القراد من أجل عملية الإصابة، استخدم مجهراً وفرشاة تلوين دقيقة لإزالة اليرقات أو الحوريات من القارورة. انقل 50 يرقة أو 25 حورية إلى قارورة وميضية. وبمجرد امتلاء القارورة تماماً، قم بتغطيتها بشبكة نايلون أو شاشة من قماش الأورجانزا، وثبّت الغطاء بأربطة مطاطية محكمة.خصّص غرفة منفصلة لإيواء الفئران المصابة بالقراد. ولمنع هروب القراد عن طريق الخطأ، ضع حصيرة لاصقة أو شريط سجاد مزدوج الوجه خارج الغرفة، وضع حصيرة أخرى داخل باب الغرفة. أولاً، جهّز منطقة للتعامل مع القراد بالقرب من الفئران.استخدم طاولة عمل بيضاء أو فاتحة اللون. ضع إطاراً من الشريط اللاصق مزدوج الوجه حول محيط منطقة العمل على الطاولة. الآن، قم بتخدير الفأر باستخدام isoflurane.عندما يصبح الفأر جاهزاً، انقله إلى وسادة تدفئة مغطاة بمناشف ورقية، وقم بتركيب مخروط أنفي لإعطاء الـ isoflurane بشكل مستمر. تحقق من مستوى التخدير باستخدام قرصة الإصبع. اضبط المخدّر بناءً على نمط التنفس.يُعد معدل التنفس من 80 إلى 230 نفساً في الدقيقة طبيعياً. قم بتقليل جرعة isoflurane إذا كان التنفس أبطأ. كما يجب وضع مرهم عيني يعتمد على هلام البترولوم على العينين.الآن، خذ قارورة واحدة تحتوي على 50 يرقة أو 25 حورية، وباستخدام فرشاة رسم، انقل القراد إلى الفأر. ضع القراد تحت الفراء على الرأس بين الأذنين. بعد وضع آخر قرادة، أبقِ الفأر تحت تأثير التخدير لمدة 20 دقيقة، لتمكين القراد من الالتصاق قبل أن يحاول الفأر إزالتها.بعد مرور 20 دقيقة، أعد الفأر إلى قفص إيواء جديد يحتوي على فرش أبيض لتحسين رؤية القراد. أضف بعض الألعاب ووفر إمكانية الوصول الحر إلى الماء والطعام. استخدم صناديق قابلة للتخلص منها ذات أغطية محكمة الإغلاق.بعد ذلك، ضع القفص المنزلي داخل قفص جرذان أو جربوع أكبر حجماً يحتوي على شريط لاصق مزدوج الوجه حول الحافة الداخلية العلوية للجدران. ثم، املأ الفراغ بين القفصين بحوالي ثلاثة سنتيمترات من الماء. ستنفصل القراد غير البالغة بعد ثلاثة إلى ستة أيام من التغذية.بدءاً من اليوم الثالث وما بعده، افحص الأقفاص والمياه المحيطة يومياً للبحث عن القراد المنتفخ. اجمع القراد المنفصل باستخدام فرشاة رسم أو ملاقط ناعمة، وانقله إلى قنينات وميضية نظيفة مغطاة بقطع من قماش النايلون ومثبتة بأربطة مطاطية. في اليوم السابع، قم بتخدير الفأر كما سبق، وافحص وجود أي قراد متبقٍ ملتصق.علاوة على ذلك، افحص بعناية مادة الفرش، ومعلف الطعام، والماء. بعد ذلك، قم بقتل الفأر رحيمًا وتعقيم الأقفاص القابلة للتخلص منها، ومادة الفرش، وزجاجة الماء، ومعلف الطعام باستخدام جهاز التعقيم (autoclave) للقضاء على أي قراد متبقٍ. ثم ضع القراد المتخم في حاضنة مضبوطة الظروف.في غضون 12 إلى 18 أسبوعاً، يجب أن تنسلخ القراد. افحص القراد تحت المجهر مرة واحدة على الأقل أسبوعياً للتأكد من عدم وجود عفن. وفي حالة اكتشاف أي عفن، اغسل القراد الناجي باستخدام 70%ethanol لمدة خمس دقائق.بعد ذلك، يتم شطف العينات الناجية بالماء ونقلها إلى ورق ترشيح للتجفيف. وبمجرد أن تصبح نظيفة وجافة، تُنقل القراد إلى قوارير جديدة ونظيفة، ويُستكمل دورة حياتها. وقد تسلق معظم القراد جدران الحاويات بعد التغذية، مما جعل عملية جمعها سهلة.نادرًا ما تمكنت القراد من الهروب من أقفاص الفئران. ووفرت الفرشة البيضاء تباينًا جيدًا للكشف عن القراد التي تغذت. وخلال عمليات الجمع، انفصل معظم القراد بحلول اليوم الرابع.انتظر عدد قليل من الفئران حتى اليوم الخامس ليتحرر، وبحلول اليوم السابع، لم يكن أي فأر يحمل أي قراد. تمكن حوالي 2/3 من القراد من الالتصاق والتغذية حتى الامتلاء. ظلت جميع الفئران بصحة جيدة ولم تظهر عليها أي علامات انزعاج.بمجرد إتقان هذه الطريقة، يمكن توفير المئات من القراد المتغذي على الدم في يوم جمع واحد. وأثناء تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر ارتداء معدات الوقاية الشخصية الكاملة لمنع التصاق القراد عن طريق الخطأ.

rearing-ixodes-scapularis-black-legged-tick-feeding-immature-stages

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

جمع الدملمف القراد المصابة، والغدد اللعابية، واللعاب مهم لدراسة كيفية ينقلها القراد مسببات الأمراض تسبب المرض. في هذا البروتوكول نحن لشرح كيفية جمع الدملمف والغدد اللعابية من...

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

مرض لايم هو أكثر الأمراض التي تنتقل عن طريق النواقل شيوعا في أمريكا الشمالية.  العامل المسبب ، Borrelia burgdorferi هو بكتيريا لولبية تنتقل عن طريق قراد Ixodid.  يتم تحسين انتقال العدوى والكشف عنها في النماذج الحيوانية عن طريق استخدام تغذية القراد ، والتي نصفها هنا.

تغذية القراد على لانتقالها وتشخيصها في أبحاث مرض لايم

في هذه الدراسة ، تم تطوير نظام تغذية للمراحل الحورية واليرقات من القراد الصلب باستخدام كبسولة تعلق على فأر المختبر. تتكون كبسولة التغذية من مواد مرنة وتظل مربوطة بقوة بالماوس لمدة أسبوع واحد على الأقل وتسمح بمراقبة مريحة لتغذية القراد.

نموذج يستند إلى كبسولة لمراحل القراد الثابت غير ناضجة الإصابة على الفئران المختبرية

يصف البروتوكول الحالي طريقة لحقن أجنة القراد. حقن الأجنة هو الأسلوب المفضل للتلاعب الجيني لتوليد خطوط معدلة وراثيا.

تقنية حقن الأجنة لتحرير الجينات في القراد ذو الأرجل السوداء ، Ixodes scapularis

تظهر هنا طريقة لتغذية القراد في الدم في المختبر عبر نظام غشاء اصطناعي للسماح باحتقان جزئي أو كامل لمجموعة متنوعة من مراحل حياة القراد.

القراد غشاء اصطناعي التغذية ل Ixodes كتفي

تقدم هذه المقالة منهجية تعريض البشر ليرقات Ixodes scapularis للبحوث السريرية. هذه التقنية بسيطة نسبيا ، ويمكن تحملها من قبل المتطوعين في البحث ، ويمكن تعديلها وفقا للاحتياجات التجريبية. يجب إجراء مثل هذه الأبحاث التي تشمل البشر بموجب بروتوكولات الدراسة السريرية المعتمدة من قبل السلطات التنظيمية المناسبة.

نموذج للتعرض التجريبي للبشر لقراد كتفي Ixodes اليرقات

توضح هذه الطريقة تطوير نظام تغذية دم للقراد في المختبر ، يدمج غرفة مطبوعة ثلاثية الأبعاد وغشاء سيليكون مصنع في المختبر. يتيح النظام تغذية القراد بشكل اصطناعي، مما يسمح بأخذ عينات سهلة في مراحل التغذية المختلفة واستخدام كميات دم منخفضة، مما يوفر أداة لا تقدر بثمن لدراسة قراد الإكسوديد.

تغذية دم القراد عبر غشاء صناعي على غرفة مطبوعة ثلاثية الأبعاد في أبحاث القراد المعتمدة على إكسوديد

دراسات بحثية لايم المرض غالبا ما تتطلب جيل من القراد المصابين burgdorferi البورلية الممرض ، وهي العملية التي عادة ما يستغرق عدة أسابيع. نحن هنا يبرهن على وجود عدوى قراد microinjection المستندة إلى الإجراء الذي يمكن أن ينجز في غضون ساعات. نظهر أيضا أسلوب المناعي للتوطين في الموقع من burgdorferi باء داخل القراد.

الطرق السريعة لنقل وتوطين مسببات المرض داخل القناة الهضمية لايم القراد

وصف الأسلوب هنا يستخدم الحقن المباشر للبكتيريا الممرضة للحشرات في hemocoel...

تربية وحقن<em&gt; ماندوكا سيكستا</em&gt; اليرقات لتقييم الفوعة البكتيرية

استجابات حساسية، والتي تتميز تنشيط الخلايا البدينة والخلايا القاعدية، ويقودها الربط عبر ال IgE وإطلاق وسطاء proinflammatory. ويمكن تحقيق التقييم الكمي للاستجابات حساسية باستخدام ايفانز الأزرق صبغ لرصد التغيرات في نفاذية الأوعية الدموية بعد التحدي حساسية.

قياس الحساسية المفرطة المحلية في الفئران

تعلم بروتوكول تغذية القراد غير الناضج على الفئران لتحسين معدلات البقاء وتقليل الإجهاد على المضيف. تُستخدم هذه الطريقة لتبسيط تربية مستعمرات القراد وجمعها بكفاءة في يوم واحد.

تربية

استكشف المزيد من الفيديوهات