قياس ونمذجة مقلص التجفيف في الطبقة القرنية البشرية

الهدف العام من هذه الطريقة هو تحديد الصلابة الميكانيكية الديناميكية وتراكم ضغوط التجفيف في عينات خارج الجسم الحي من الطبقة القرنية البشرية ، بعد معالجات كيميائية مختلفة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات الميكانيكا الحيوية وعلوم التجميل ، مثل كيف يمكن أن يؤثر تكوين الطبقة القرنية أو علاج أنسجة الجلد بمنتجات العناية الشخصية ، وخصائصها الميكانيكية وسلوك التجفيف الديناميكي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر بديلا أسرع لطرق التقييم الميكانيكي الأخرى ، وتتطلب أنسجة جلد أقل بكثير وتوفر تجفيفا أكثر ملاءمة من الناحية الفسيولوجية عن طريق منع التبخر من الجانب السفلي للعينة.

لتحضير أغطية مطلية بالمطاط الصناعي ، قم أولا بعمل عامل معالجة Sylgard 184 مع مواد صلبة أساسية عند قاعدة إلى نسبة عامل معالجة من 55 إلى واحد ، حتى تصبح متجانسة. هناك حاجة إلى ستة جرامات في المجموع. بعد ذلك ، قم بإزالة الغاز من المحلول.

ثم استخدم المحلول لطلاء الأغطية على مغطى الدوران. باستخدام ماصة ذات تجويف عريض ، قم بإسقاط مليلتر واحد من الخليط مركزيا على غطاء. ثم قم بتدوير الغطاء عند 2 ، 000 دورة في الدقيقة لمدة 60 ثانية.

اصنع خمسة أو ستة أغطية مطلية بهذه الطريقة. لعلاج الغطاء ، احتفظ بها في فرن 60 درجة مئوية لمدة 12 ساعة. في اليوم التالي ، قم بقياس سماكة أغشية المطاط الصناعي.

استخدم شفرة حلاقة لرفع إحدى حواف الفيلم المطاطي عن الغطاء. ثم استخدم قلم تحديد لا يمحى لتمييز الجانب العلوي من الفيلم المطاطي ووضع علامة على الغطاء المعالج تحته. الآن ، باستخدام مجهر مقلوب ، قم بقياس ارتفاع Z بين المستويات البؤرية للعلامات لقياس سمك الأغشية.

اتبع الإجراءات القياسية لتحضير أنسجة SC. لعمل عينات ، خذ لكمات قطرها ستة ملليمترات من SC. على العينات ، ضع علامة في منتصف الوجه الخارجي باستخدام علامة لا تمحى. بعد ذلك ، قم بإيداع حبات علامة الفلورسنت على سطح SC عن طريق تعويم العينات في 15 مل من الماء ، تحتوي على حوالي 90 ميكرولتر من تركيز الخرزة.

استخدم التحريك اللطيف لمدة 30 دقيقة واضبط تركيز الخرزة حسب الحاجة. بعد العلاج ، اغمر كل عينة في الماء لتثبيتها على المطاط الصناعي. ضع غطاء مطلي بزاوية ضحلة ، من 15 إلى 30 درجة تحت SC مع المطاط الصناعي باتجاه الجانب السفلي من SC. ثم ارفع الغطاء من الماء مع تثبيت SC أعلاه ، وبالتالي تصفيح عينة SC بسلاسة دون تجاعيد أو هواء محاصر.

بعد ذلك ، جفف العينات المركبة في الظروف المحيطة لمدة ساعة تقريبا. بمجرد تجفيفها ، انقل العينات إلى غرفة محكمة الغلق تحتوي على طبق من الماء. اسمح للعينات بالتوازن مع الرطوبة لمدة 24 ساعة.

في اليوم التالي، قم بتركيب عينة في غرفة التروية لجلسة تصوير طويلة. ضع حجرة التروية فوق الركيزة وأغلق حواف غرفة التروية بالمطاط الصناعي باستخدام الشحوم المفرغة. ثم سجل الصور الفلورية والضوء المنقولة بمجال رؤية كبير بما يكفي لالتقاط عينة SC الكاملة.

خلال ال 16 ساعة القادمة ، التقط صورة كل 10 دقائق. في غطاء الدخان الكيميائي ، قم بتحميل غطاء بلاستيكي صغير بمليلتر واحد من السيلان. انقل الغطاء إلى حاوية محكمة الغلق مع غطاء مبطن بالمطاط الصناعي ، وليس في اتصال مباشر.

اسمح لهم بالحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس ساعات. أثناء الانتظار ، قم بإعداد 20 مل من محلول الخرز وفقا لبروتوكول النص ثم اسكبه في طبق 10 سم. بعد خمس ساعات ، ضع ببطء الركائز المطاطية المتشابكة لأسفل ، في محلول الخرزة.

قم بتحميل ركيزتين في كل طبق واترك الركائز تتفاعل مع الخرز لمدة 45 دقيقة. في وقت لاحق ، باستخدام الملقط ، قم بإزالة الركائز وشطفها بالماء المقطر لإزالة الخرز غير المرتبط. ثم جففها تحت تيار لطيف من الهواء المضغوط وقم بتخزينها في صندوق مغلق وغير شفاف.

باستخدام التقنية الموضحة سابقا ، انقل عينات SC إلى ركيزة معالجة في حمام مائي. مباشرة بعد تركيب SC ، ضع قطرة خمسة ميكرولترات من محلول حبة علامة الفلورسنت غير المخفف عليها. ثم اترك SC حتى يجف لمدة 60 دقيقة.

الآن ، قم بقياس سمك SC باستخدام المجهر بعدسة ذاتية 40x في غرفة التروية. قم بقياس سمك SC بمرور الوقت، باستخدام ملحق التركيز البؤري عن بعد لتسجيل الفرق في ارتفاع Z بين طبقتي الخرز. توجد طبقة واحدة في واجهة الركيزة SC والأخرى أعلى SC. باستخدام التقنيات الموصوفة ، تم تحضير عينة SC وتغليفها بخرز الفلورسنت.

بعد 16 ساعة من التجفيف ، عند 25٪ من الرطوبة النسبية ، تم قياس الإزاحة. بسبب التماثل الدائري للعينات ، تم حساب متوسط هذه الإزاحة بشكل سمتي. طوال فترة التجفيف ، تظل عمليات إزاحة السمت صغيرة.

ومع ذلك ، زادت ملامح الإزاحة الشعاعية بشكل رتيب من المركز إلى الحافة ونمت في الحجم حتى تم الوصول إلى التوازن. تظهر الملامح المسجلة على فترات 30 دقيقة التطور الزمني للإزاحة داخل المستوى. انخفض متوسط سمك SC أثناء التجفيف ، بشكل أساسي خلال أول ساعتين.

ثم تم تحليل ديناميكية التجفيف عن طريق تركيب ملامح الإزاحة على نموذج انقباض خطي مرن باستخدام نهج الحد الأدنى من المربعات الصغرى. من النموذج ، تم استخراج إجهاد التجفيف التعاقدي ، وكذلك معامل المرونة. زادت كلتا المعلمتين بسرعة خلال أول ساعتين من التجفيف.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر لصق العينات على الركيزة تماما. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل تلطيخ الدهون من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل كيفية تغيير علاجات تجميلية معينة لتكوين دهون الأنسجة.