Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Mia J. Smith; Thomas A. Packard; Shannon K. O'Neill; Rochelle M. Hinman; Marynette Rihanek; Peter A. Gottlieb; John C. Cambier

doi:10.3791/55382

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

Full Text

12,882 Views

09:25 min

February 16, 2017

DOI: 10.3791/55382-v

Mia J. Smith^1,2, Thomas A. Packard¹, Shannon K. O'Neill¹, Rochelle M. Hinman¹, Marynette Rihanek³, Peter A. Gottlieb³, John C. Cambier^1,4

¹Department of Immunology and Microbiology,University of Colorado School of Medicine, ²Department of Microbiology, Immunology, and Pathology,Colorado State University, ³Barbara Davis Center for Childhood Diabetes,University of Colorado School of Medicine, ⁴Department of Biomedical Research,National Jewish Health

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a method for isolating and enriching rare antigen-binding B cells from human peripheral blood using magnetic nanoparticles. This technique facilitates their phenotypic and functional analysis, providing insights into the biology of these cells.

Key Study Components

Area of Science

Immunology
Cell Biology
Biotechnology

Background

Antigen-reactive B cells are crucial for understanding immune responses.
Isolating these cells can be challenging due to their rarity.
Traditional methods may introduce geometric and flow rate issues.
This method aims to overcome these challenges using magnetic nanoparticles.

Purpose of Study

To develop a reliable method for enriching antigen-binding B cells.
To analyze the phenotype and function of these cells.
To enhance understanding of B cell biology before and after antigen exposure.

Methods Used

Collection of whole blood into heparinized tubes.
Mixing blood with magnesium and calcium-free PBS.
Layering the mixture onto a density gradient solution.
Utilizing magnetic nanoparticles for cell isolation.

Main Results

The method effectively isolates rare antigen-binding B cells.
It minimizes issues related to geometry and flow rates.
Allows for detailed phenotypic and functional analysis.
Provides a framework for further immunological studies.

Conclusions

This technique is a significant advancement in B cell research.
It opens new avenues for studying immune responses.
Future research can build on this method to explore B cell functions.

Frequently Asked Questions

What are antigen-binding B cells?

Antigen-binding B cells are immune cells that recognize and bind to specific antigens, playing a key role in the immune response.

How does the magnetic nanoparticle method work?

This method uses magnetic nanoparticles to selectively isolate B cells that bind to specific antigens, allowing for their enrichment and analysis.

What are the advantages of this method?

It overcomes challenges related to geometry and flow rates in traditional isolation methods, making it more efficient for rare cell populations.

Can this method be applied to other cell types?

While this method is designed for B cells, similar techniques may be adapted for other immune cell types.

What implications does this research have for immunology?

It enhances our understanding of B cell biology and could lead to new insights into immune responses and therapies.

ووصف وهناك طريقة بسيطة لكنها فعالة التي توظف النانوية المغناطيسية للكشف عن وإثراء خلايا B-مستضد رد الفعل لتحليل وظيفي والمظهرية.

الهدف العام من هذا الإجراء البسيط والفعال هو عزل وإثراء الخلايا البائية النادرة المرتبطة بالمستضد من الدم المحيطي البشري باستخدام الجسيمات النانوية المغناطيسية لتحليلها الظاهري والوظيفي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم المناعة فيما يتعلق بالنمط الظاهري وبيولوجيا الخلايا البائية النادرة المرتبطة بالمستضد قبل وبعد مواجهة مستضد في الجسم الحي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تتجنب المشكلات المرتبطة بالهندسة ، خاصة عندما يستخدم المرء صفيحة ستايرين أو حبة كبيرة.

وهو يتجنب المشاكل المرتبطة بمعدل التدفق عندما يقوم المرء بعزل الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي لعزل الخلايا النادرة في مجموعات كبيرة جدا من الخلايا البدائية. مباشرة بعد جمع 30 إلى 50 مل من الدم الكامل في أنابيب جمع الدم الهبارين ، امزج الدم بنسبة 1: 1 مع المغنيسيوم المعقم بدرجة حرارة الغرفة و PBS الخالي من الكالسيوم. بعد ذلك ، ضع طبقة من خليط الدم على 10 ملليلتر من محلول التدرج بكثافة درجة حرارة الغرفة في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 مليلتر باستخدام ضغط زناد ماصة بطيء متسق.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos