Name: جهاز لأداء الهجرة خلية / شفاء الجروح في لوحة 96-حسنا (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: تعلم تقييم هجرة الخلايا باستخدام جهاز ثقب ميكانيكي ثماني القنوات في لوحة 96-بئر. تتيح هذه الطريقة مراقبة شروط علاج متعددة بكفاءة عالية وتكلفة منخفضة لدراسات السرطان والجلدية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أن يشكروا السيد تام بو ليونغ والسيد وونغ تشي كين والموظفين الفنيين في ورشة عمل كلية العلوم ، جامعة هونغ كونغ المعمدانية ، على مهاراتهم الفنية ونصائحهم في صنع النموذج الأولي لهذا الجرح.

1. مقدمة عن أجزاء جهاز إحداث الجروح (الشكل 1)
<ol>
	<li>قم بتجهيز حامل الدبابيس عن طريق تثبيت دبابيس الجرح على مسافات متساوية. أمسك برؤوس الماصة واضبط ارتفاع الرأس عن طريق تحريك دبابيس الجرح القابلة للتعديل للأعلى وللأسفل.</li>
	<li>قم بتركيب قضيب التوجيه القابل للتعديل على مختلف العلامات التجارية لأطباق الزرع ذات الـ 96 بئراً، وتأكد من أن منطقة الجرح في موضع ثابت.</li>
	<li>ثبّت دبوس الجرح القابل للتعديل عن طريق إحكام ربط المسمار السداسي. ثبّت قضيب التوجيه في موضعه عن طريق إحكام ربط براغي الرأس السداسية في كلا الطرفين.</li>
</ol>
2. ضبط عرض حامل الدبابيس (الشكل 2)
<ol>
	<li>قم بفك براغي الرأس السداسية باستخدام مفتاح سداسي M5.</li>
	<li>أدخل عدداً مناسباً من حلقات الضبط على كلا جانبي حامل المسمار بحيث تتناسب قضبان التوجيه تماماً مع عرض طبق الزرع ذو الـ 96 بئراً. 
	ملاحظة: تتطلب أطباق Corning وIwaki زوجاً واحداً من الحلقات الكبيرة وزوجاً واحداً من الحلقات الصغيرة. بينما تتطلب أطباق Falcon وNunc زوجاً واحداً من الحلقات الكبيرة.</li>
	<li>أحكم ربط براغي الرأس السداسية لتثبيت قضيب التوجيه.</li>
</ol>
3. ضبط قضبان التوجيه (الشكل 3)
<ol>
	<li>قم بتركيب رؤوس ماصات بلاستيكية معقمة سعة 10-µL على دبابيس الجرح.</li>
	<li>قم بفك أغطية رؤوس البراغي سداسية المقبس باستخدام مفتاح سداسي M5.</li>
	<li>أمسك بأداة الجرح واغمس دبابيس الجرح في عمود واحد من لوحة زراعة ذات 96 بئراً.</li>
	<li>اضبط ارتفاع قضبان التوجيه حتى تلامس جميع الرؤوس قاع الآبار بالكاد.</li>
	<li>أحكم ربط أغطية رؤوس البراغي سداسية المقبس. تأكد من أن أداة الجرح تتناسب الآن تماماً مع لوحة الزراعة وأن الدبابيس متمركزة جيداً في منتصف الآبار.</li>
</ol>
4. معايرة الدبابيس
<ol>
	<li>أمسك مسبّب الجروح بشكل عمودي على سطح معقم ومسطح (أي: (طبق بتري) ثم قم بفك جميع البراغي سداسية الرؤوس باستخدام مفتاح سداسي M3.</li>
	<li>انقر على جهاز إحداث الجروح حتى تلامس جميع الرؤوس السطح العقيم المسطح بشكل متساوٍ.</li>
	<li>أحكم ربط براغي سداسية الرؤوس (hex screws) مرة أخرى لتثبيت المسامير في موضعها.</li>
	<li>تحقق من استواء كل سن عن طريق نقر أداة إحداث الجروح برفق على السطح العقيم المسطح.</li>
</ol>
5. خدش الطبقة الخلوية الأحادية (الشكل 4)
<ol>
	<li>يتم استزراع خلايا بطانية وعائية سرية بشرية على طبق زراعة خلايا مكون من 96 بئراً ومطلي بـ 0.1% جيلاتين. تُزرع الخلايا في وسط Medium 199 مضاف إليه 20% مصل جنين بقري مثبط حرارياً، و1% بنسيلين/ستربتوميسين، و0.09 g/L هيبارين. تُحفظ الخلايا في حاضنة رطبة تحتوي على 5% ثاني أكسيد الكربون عند 37 ºC طوال الليل قبل الاستخدام. يجب أن تصل الخلايا إلى حالة الاندماج الكامل بنسبة 100% قبل إحداث الجرح.</li>
	<li>ضع رؤوس إحداث الجروح عند الجانب الأيسر (أو الأيمن) لكل بئر ضمن العمود نفسه في طبق الزراعة. حرك أداة إحداث الجروح عبر البئر إلى الجانب الآخر؛ مع التأكد من ملامسة رؤوس الإحداث لقاع البئر.</li>
	<li>كرر عملية الخدش (الخطوة 5.2) لجميع الأعمدة.</li>
	<li>بعد إحداث الجروح، يتم التخلص من الوسط في كل بئر واستبداله بوسط جديد يحتوي على المركبات المختبرة.</li>
</ol>
6. الحصول على البيانات وتحليل الصور
<ol>
	<li>قم بتصوير البئر بالكامل التي تحتوي على الجرح الميكانيكي في طبقة الخلايا أحادية الطبقة باستخدام مجهر منخفض القوة مزود بكاميرا رقمية (مثلاً عدسة شيئية 10X) فور إحداث الجرح (t=0 h).</li>
	<li>أضف المركبات المختبرة إذا لزم الأمر واحضنها للمدة المطلوبة. قم بتصوير البئر بالكامل مع منطقة الجرح مرة أخرى بعد انتهاء وقت الحضن المطلوب (t=Δh).</li>
	<li>باستخدام برنامج لتحليل الصور مثل ImageJ (<a href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a>)، قم بقياس منطقة الجرح في الصورة باستخدام أداة الرسم الحر (freehand tool).</li>
	<li>احسب النسبة المئوية لانغلاق الجرح: 
	<img alt="صيغة معدل التئام الجروح، توضح حساب النسبة المئوية للانخفاض في منطقة الجرح بمرور الوقت." src="/files/ftp_upload/55411/55411eq1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="معادلة"></li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prespecification+and+plasticity%3A+shifting+mechanisms+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li>
<li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li>
<li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration%3A+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li>
<li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound%3A+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980(2015).</li>
<li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparsion+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li>
<li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2F+wound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg%281%29+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li>
<li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

يتميز جرح الخلايا الخاص بنا بالعديد من الميزات الفريدة في حل مشاكل فحوصات هجرة الخلايا التقليدية. آلة جرح الخلايا الميكانيكية ذات 8 قنوات مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ عالي الجودة (فولاذ 304) مع عمر طويل يمكن تعقيمه عن طريق التعقيم. يمكن استخدام جميع العلامات التجارية تقريبا لألواح الثقافة ذات 96 بئرا المتوفرة في السوق مع جهاز الجرح الميكانيكي هذا بسبب شريط التوجيه القابل للتعديل. يضمن تصميم شريط التوجيه القابل للتعديل أيضا أن تكون منطقة الخدش في وسط كل بئر. يمكن للجرح في الوضع المركزي للبئر تسهيل التقاط الصور باستخدام...

تلعب هجرة الخلايا دورا مهما في العمليات الخلوية ، مثل التطور الجنيني ، وتكوين الخلايا العصبية ، وتكوين الأوعية الدموية ، والتئام الجروح ، وإصلاح الغشاء المخاطي ، والتحولات الظهارية واللحمية المتوسطة في ظل التطور الطبيعي وحالة المرض< فئة الدعم = "xref">1. إنها عملية معقدة تتضمن تنسيق العديد من الأحداث بين الخلايا وداخلها بما في ذلك تفاعلات جزيئات الإشارات ، واستقطاب الخلايا ، وإعادة تنظيم الهيكل الخلوي ، وإعادة تشكيل المصفوفة ، ونتوء الغشاء ، وتعديل التصاق الخلية الديناميكية < فئة sup = "xref">2. من خلال دراسة هجرة الخلايا ، يمكن تحديد اكتشاف والتحقق من صحة المواد الكيميائية أو الجزيئات الحيوية التي تؤدي إلى حركة الخلايا والمسارات الكيميائية الحيوية المرتبطة بها. يمكن استخدام هذه العملية الأساسية بشكل مفيد كوكيل لتطبيقات مختلفة ، مثل علاج الأمراض واستهداف الأدوية.
 اختبار الجرح هو أحد فحوصات هجرة الخلايا < فئة sup = "xref" >3. هنا ، ستتم إزالة عينة فردية من الخلايا جزئيا بوسائل ميكانيكية لإنتاج منطقة مجردة حيث تهاجر الخلايا لتغطية المنطقة. سيتم مراقبة النسبة المئوية للتعافي في نقطة زمنية معينة. عند التعامل مع عدد كبير من العينات ، يمكن أن تكون مشكلات مثل التكلفة التجريبية والتلوث المتبادل داخل العينات مشكلة. على الرغم من توفر العديد من الأدوات والمقايسات التجارية لدراسة هجرة الخلايا 4,5,6 ، إلا أن العديد منها يتطلب معدات باهظة الثمن ومتطورة ولا تزال هناك حاجة إلى تحسينات. لهذه الأسباب ، تم تطوير جرح خلية ميكانيكي ذو 8 قنوات (الشكل 1).
لقد أدرج جرح الخلية الميكانيكية ذو 8 قنوات العديد من الميزات الفريدة في حل المشكلات المذكورة أعلاه. يوفر المرونة لإجراء فحوصات هجرة / جرح الخلايا في شكل لوحة ثقافة 96 بئرا. يضمن تصميم شريط التوجيه القابل للتعديل أن تكون منطقة الخدش في الموضع المركزي لكل بئر. أيضا ، يمكن ضبط ارتفاع قضبان التوجيه بحيث يكون الجرح قابلا للتطبيق على مختلف العلامات التجارية للوحات الثقافة. وأخيرا، يتيح تصميم دبوس الجرح القابل للتعديل ملامسة متساوية لأطراف الماصة مع سطح لوحة الاستزراع لتحقيق الجرح المتزامن والقابل للتكرار<فئة الجرح="xref">7,8.

<table><tbody><tr><td>لوحة ثقافة الخلايا ذات 96 بئر</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>يمكن أيضا استخدام العلامات التجارية الأخرى للوحة زراعة الخلايا ذات 96 بئرا</td></tr> أطراف <tr><td>ماصة P10</td><td>Axygen</td><td>301-03-051</td> رأس <td>ماصة P10 قصير أكثر سهولة في إنشاء جرح واضح</td></tr><tr><td>Wounder</td><td>R & P Technology Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td>لزراعة الخلايا الخلوية للخلايا البطانية للوريد السري البشري. استخدم وسط الثقافة المناسبة والحالة لنوع آخر من الخلايا.</td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td>لزراعة الخلايا للخلايا البطانية للوريد السري البشري. استخدم وسيط زراعة مناسب وحالة لنوع آخر من الخلايا.</td></tr><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين</td><td>جيبكو</td><td>15140122</td><td>لزراعة الخلايا للخلايا البطانية للوريد السري البشري. استخدم وسط زراعة القراصة المناسبة والحالة لنوع آخر من الخلايا.</td></tr><tr><td>ملح الصوديوم الهيبارين من الغشاء المخاطي المعوي للخنزير</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>لزراعة الخلايا الخلوية للخلايا البطانية للوريد السري البشري. استخدم وسط زراعة القراصة المناسب والحالة لنوع آخر من الخلايا.</td></tr><tr><td>الجيلاتين من جلد البقر</td><td>Sigma</td><td>G9391</td><td>لزراعة الخلايا للخلايا البطانية للوريد السري البشري. استخدم وسط الثقافة المناسب والحالة لنوع آخر من الخلايا.</td></tr></tbody></table>

جهاز لأداء الهجرة خلية / شفاء الجروح في لوحة 96-حسنا

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

الهجرة خلية / اصابة الفحص هو الطريقة المستخدمة عادة لدراسة الهجرة الخلية والعمليات الحيوية الأخرى، مثل الأوعية الدموية والانبثاث ورم. في هذا الاختبار، تزرع الخلايا لتشكيل أحادي الطبقة متموجة ويتم إنشاء الجرح الميكانيكية بواسطة خدش مع الجهاز. ثم يمكن رصدها معدل الهجرة من الخلايا باتجاه منطقة الجرداء بواسطة التصوير. تم تصميم wounder الميكانيكية 8 قنوات لمعالجة معظم المشاكل المرتبطة فحص الهجرة الخلية. أولا، wounder لدينا يمكن تعقيمها بسهولة عن طريق التعقيم أو مع المطهرات الشائعة. ثانيا، دبابيس قابل للتعديل الفردية تسمح الاتصال حتى مع لوحة الثقافة الخلية بحيث يمكن إنشاء الجروح الحادة وقابلة للتكرار. ثالثا، قضبان توجيه على كلا الجانبين من wounder ضمان موقف جرح ثابت في كل بئر. استخدام المتاح نصائح ماصة بلاستيكية للإصابة يمكن أن يزيد من توفير معالجة أفضل للwounder وكذلك لتقليل عبر contaminatأيون. في الختام، يمكن لنا wounder خلية توفر الباحثين مع جهاز سهل الاستخدام وقابلة للتكرار لأداء الفحص الهجرة الخلية باستخدام معيار لوحة ثقافة 96-جيدا.

تم تصميم أداة إحداث الجروح الميكانيكية ذات الـ 8 قنوات هذه لخدش طبقة أحادية من الخلايا من أجل إجراء مقايسة هجرة الخلايا. وهي جهاز سهل الاستخدام يمكنه تنفيذ مقايسات خدش الخلايا في أطباق ذات 96 بئراً في أقل من دقيقة دون الحاجة إلى تدريب خاص. يمكن لهذه الأداة إحداث مناطق جروح في الطبقات الأحادية للخلايا بعرض موحد يبلغ حوالي 600 µm وبحواف حادة (الشكل 5 و 6). ويعتمد عرض الجروح على العلامة التجارية لرؤوس الماصات وأداء المستخدم. ويعد هذا المدى من عرض الجرح مناسب...

هنا ، نقدم بروتوكولا لإجراء اختبار هجرة الخلايا شبه الإنتاجية على لوحة زراعة الخلايا المكونة من 96 بئرا. هذا البروتوكول هو طريقة سريعة وبسيطة واقتصادية لإنشاء جروح خدش متسقة على طبقة أحادية الخلية.

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

الهدف العام من جهاز إحداث جروح الخلايا الميكانيكي ذي الثماني قنوات هو قياس تأثير المعالجة على هجرة الخلايا باستخدام مقايسة التئام الجروح بطريقة سريعة وشبه عالية الإنتاجية دون استخدام معدات باهظة الثمن ومعقدة. تُعد هجرة الخلايا عملية خلوية مهمة في مختلف الظروف الفسيولوجية والظروف الفسيولوجية المرضية. وتُستخدم مقايسات التئام الجروح في المختبر في دراسات مختلفة بما في ذلك دراسات السرطان، والأوعية الدموية، والأمراض الجلدية.تتمثل الميزة الرئيسية لهذه الطريقة في إمكانية مراقبة التأثير على هجرة الخلايا في لوحة ذات 96 مساراً، مما يسمح بملاحظة ظروف معالجة مختلفة في آن واحد. سيقوم Ka Chun Ng، وهو طالب دراسات عليا من مختبرنا، بشرح الإجراء. لبدء التجربة، قم بتجهيز حامل الدبابيس عن طريق تثبيت دبابيس إحداث الجروح على مسافات متساوية.أمسك برؤوس الماصة وقم بتحريك دبابيس الجرح القابلة للتعديل للأعلى وللأسفل لضبط ارتفاع الرأس. بعد ذلك، قم بتركيب قضيب التوجيه القابل للتعديل على أطباق زراعة ذات 96 بئراً من علامات تجارية مختلفة وتأكد من أن منطقة الجرح في موضع ثابت. قم بتثبيت دبوس الجرح القابل للتعديل عن طريق إحكام ربط المسمار السداسي.ثبّت قضيب التوجيه في موضعه عن طريق إحكام ربط براغي رأس سداسية المقبس على كلا الطرفين. استخدم مفتاح سداسي M5 لفك براغي رأس سداسية المقبس. أدخل عدداً مناسباً من حلقات الضبط على كلا جانبي حامل الدبوس بحيث يتناسب قضيب التوجيه تماماً مع عرض طبق المزرعة ذي الـ 96 بئراً.ثم أحكم ربط براغي سداسية الرأس لتثبيت قضيب التوجيه. ابدأ بضبط قضبان التوجيه عن طريق تركيب رؤوس ماصات بلاستيكية معقمة سعة 10 µL على دبابيس اللف. بعد ذلك، قم بفك البراغي سداسية الرأس باستخدام مفتاح سداسي M5.أمسك بأداة إحداث الجروح واغمس دبابيس الجرح في أحد أعمدة طبق زرع مكون من 96 بئراً. ثم اضبط ارتفاع قضبان التوجيه حتى تلامس جميع الرؤوس قاع الآبار بالكاد. أحكم ربط براغي الرأس السداسية.تأكد من أن أداة إحداث الجروح تتناسب الآن تمامًا مع طبق الزرع وأن الدبابيس متمركزة بشكل جيد في منتصف الآبار. أمسك أداة إحداث الجروح بشكل عمودي على سطح مسطح ومعقم، مثل طبق بتري، وقم بفك جميع براغي سداسية الرأس باستخدام مفتاح سداسي M3. اضرب على أداة إحداث الجروح برفق حتى تلامس جميع الرؤوس السطح بالتساوي.بعد أن تلامس الرؤوس السطح بشكل متساوٍ، أحكم ربط براغي سداسية الرأس مرة أخرى لتثبيت الدبابيس في موضعها. ثم تحقق من استواء كل رأس عن طريق النقر بجهاز الجرح بلطف على السطح المعقم المسطح. ازرع خلايا بطانية وعائية سرية بشرية في طبق زراعة خلايا مكون من 96 بئراً ومطلي بـ 0.1% gelatin.يتم استزراع الخلايا في وسط medium 199 مضاف إليه 20% من مصل جنين البقر المعطل حرارياً، و1% من البنسلين والستربتومايسين، و0.09 grams per liter من الهيبارين. تُحفظ الخلايا في حضانة رطبة تحتوي على 5%carbon dioxide عند 37 degrees Celsius طوال الليل قبل الاستخدام. وبمجرد وصول الخلايا إلى حالة الاندماج الكامل بنسبة 100%confluency، يتم وضع رؤوس إحداث الجروح عند الجانب الأيسر من كل بئر ضمن العمود نفسه في طبق الاستزراع.حرك أداة إحداث الجروح بشكل عرضي إلى الجانب الآخر من البئر. تأكد من ملامسة رؤوس الإحداث لقاع البئر. ولضمان أن يكون الجرح في كل بئر من طبقة الخلايا متمركزاً وعلى نفس النمط، قم بتحريك أداة إحداث الجروح في حركة قوسية تمتد عبر البئر وصولاً إلى الطرف الآخر.كرر عملية الخدش لجميع الأعمدة. بعد إحداث الجروح، تخلص من الوسط في كل بئر واستبدله بوسط جديد يحتوي على المركبات المختبرة. ثم انتقل إلى مرحلة الحصول على البيانات وتحليل الصور.تتيح الصور التمثيلية لصف وعمود من الآبار مباشرة بعد عملية الخدش إجراء تحليل كمي لعرض كل جرح. تم الحصول على صور الجروح من خلايا بطانية من الوريد السري البشري وخلايا ليفية جلدية بشرية. يشير الخط المنقط إلى منطقة الجرح، بينما يشير الخط المتصل إلى منطقة هجرة الخلايا.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام هذا الجهاز لإجراء مقايسة التئام الجروح في طبق ذي 96 بئراً بطريقة شبه عالية الإنتاجية، ولضمان خدش كل بئر بواسطة أداة إحداث الجروح.

a-device-for-performing-cell-migrationwound-healing-in-a-96-well-plate

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

تستخدم عادة، يتم وصف طرق للوصول للغاية لدراسة الهجرة الخلية والغزو في المختبر. الأسلوب الأول هو الجرح خلية إغلاق الفحص الذي يقيس حركية الخلية. الأسلوب الثاني هو transwell الهجرة والغزو الفحص أن يقيم الكيميائي والقدرة الغازية من الخلايا.

في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات

MRP4 ينظم العديد من الفعاليات الإشارات التي تعتمد على النوكليوتيدات دوري بما في ذلك دور توضيح مؤخرا في الهجرة الخلية. وصفنا نهج مباشرة، ولكن متعدد الأوجه لكشف أهداف جزيئية المصب MRP4 مما أدى إلى التعرف على interactome MRP4 الفريد الذي يلعب دورا رئيسيا في التنظيم صقل للهجرة الخلايا الليفية.

أساليب لدراسة Mrp4 تحتوي على المجمعات ضخم في تنظيم الخلايا الليفية الهجرة

والهدف من هذا البروتوكول تقييم أثر العوامل برو ومكافحة ميجراتوري على الهجرة الخلية داخل مصفوفة فيبرينوجين ثلاثي الأبعاد.

وصف الهجرة الخلية في إطار ثلاثي الأبعاد في المختبر الجرح البيئات

تفيد هذه الدراسة أسلوبين مختلفين لتحليل الخلية الغزو والهجرة: مقايسة الدائرة Boyden و في المختبر الفيديو المستندة إلى مجهر التئام المقايسة. وصف بروتوكولات لهذه التجارب اثنين، وتتم مقارنة مزايا وعيوب.

تقييم عملية الهجرة وغزو الخلية: مقارنة من الصفر فيديو المستندة إلى مجهر الجرح المقايسة والمقايسة الدائرة Boyden

هذه المخطوطة يصف كيف شق مثل الآفات على الخلايا الظهارية مثقف مونولاييرس مريح نموذج الجرح الشفاء في المختبر، مما يسمح للتصوير بواسطة [كنفوكل] أو الفحص المجهري بالليزر، والتي يمكن أن توفر جودة عالية البيانات الكمية والنوعية لدراسة سلوك الخلية والآليات المعنية بالهجرة.

مجهرية على أساس أساليب التقييم للهجرة الخلية الظهارية أثناء التئام الجرح في المختبر

نقدم هنا، بروتوكولا لتقييم تأثير الببتيدات على هجرة الخلايا الظهارية الشعب الهوائية. يسمح هذا الأسلوب للحصول على بيانات كمية عن سرعة الإغلاق الهجرة والجرح خلية السريع واستنساخه بدرجة عالية.

رواية في المختبر الجرح المقايسة الشفاء لتقييم الهجرة الخلية

ويصف البروتوكول الحالي بأسلوب متكامل يحقق سرطان الخلية الهجرة والغزو على منصة واحدة في الوقت الحقيقي، وتوفير خيار استنساخه بسهولة وكفاءة من حيث الوقت لدراسة التنقل خلية ومورفولوجيا.

سير عمل بسيطة هجرة/غزو تصوير خلية يعيش الآلي باستخدام

هنا، نقدم بروتوكول احتساء الصفر في المختبر باستخدام الخلايا الليفية الأولية ولإجراء اختبار التئام الجروح في الجلد في الجسم الحي في الفئران. كلا الاختبارين هما طريقتان مباشرتان لتقييم الجروح في المختبر وفي الجسم الحي.

فحص الهجرة الصفر وغرفة الجلد السمرة لتحليل في المختبر وفي الجسم الحي للشفاء الجروح

في هذه الورقة ، يتم تقديم ملحق مطبوع 3D مصمم حديثا كنموذج للثقافة المشتركة ويتم التحقق من صحته من خلال دراسة الاتصال بين الخلايا بين الخلايا البطانية والخلايا الكيراتينية.

ملحق مبتكر مطبوع ثلاثي الأبعاد مصمم لتمكين ثقافات الخلايا 2D و 3D المباشرة

من خلال دمج تصميم تجربة التفاعل وتحليل متطلبات المستخدم ، نقدم مكشطة خلايا مبتكرة تعزز فحوصات التئام الجروح الخلوية من حيث قابلية التكاثر والاعتمادية والتطبيق العملي والسلامة الخلوية وتجربة المستخدم.

أداة لإنشاء فجوات خالية من الخلايا مستقرة وقابلة للتكرار تلقائيا لتحسين موثوقية فحص التئام الجروح بالخلايا

يتم هنا تقديم بروتوكول للتقييم الكمي لهجرة الخلايا ثلاثية الأبعاد داخل وداخل واجهة الهلاميات المائية الحبيبية.

تحديد هجرة الخلايا ثلاثية الأبعاد داخل وإلى المواد الحيوية هيدروجيل الحبيبية

تعلم تقييم هجرة الخلايا باستخدام جهاز ثقب ميكانيكي ثماني القنوات في لوحة 96-بئر. تتيح هذه الطريقة مراقبة شروط علاج متعددة بكفاءة عالية وتكلفة منخفضة لدراسات السرطان والجلدية.

جهاز لأداء الهجرة خلية / شفاء الجروح في لوحة 96-حسنا

استكشف المزيد من الفيديوهات