تسجيل إيغ في التحرك بحرية الفئران حديثي الولادة باستخدام طريقة رواية

الهدف العام من هذه الطريقة هو تسجيل مخطط كهربية الدماغ من صغار الفئران حديثي الولادة التي تتحرك بحرية ، باستخدام قطب كهربائي جديد تم إعداده مستقر لمدة أسبوع أو أكثر. ستكون هذه الطريقة قد أجابت على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب وستكون مفيدة في دراسة صرع حديثي الولادة. باستخدام هذه التقنية ، يمكن للمرء تسجيل إشارات EEG عالية الجودة ومستقرة لأطر زمنية أطول.

مما سيساعد في تشخيص الاضطرابات العصبية المرضية المختلفة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن الفئران حديثي الولادة في p8 إلى p15 يصعب التعامل معها وتتطلب عناية كبيرة. يتطلب القطب اتصالا متقطعا ليعمل كواجهة إشارة مع أجهزة الاتصال.

يملأ دبوس الكمبيوتر هذا الدور. افصل بعناية دبابيس الذكور والإناث عن دبوس الكمبيوتر باستخدام الكماشة. بعد ذلك ، قم بتوصيل المسامير الذكرية والإناث معا لتشكيل قطب كهربائي ، وتأمين الاتصال بالسيانواكريلات.

اصنع عدة أقطاب كهربائية من هذا القبيل. بمجرد أن تصلب الروابط ، ضع الأقطاب الكهربائية في دورق مملوء بالماء المقطر لمدة عشر دقائق. ثم ضعها في منظف بالموجات فوق الصوتية لتنظيف الأقطاب الكهربائية.

ثم انقل الدورق إلى فرن على حرارة 45 درجة مئوية ، وقم بتسخينه لمدة نصف ساعة. أخيرا ، قم بتعقيم الأقطاب الكهربائية مع التعرض للأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة. في غطاء السلامة الحيوية ، قم أولا بإعداد الأدوات الجراحية المعقمة ، وجهاز تجسيمي معقم للجراحة.

بعد ذلك ، قم بتخدير جرو الفئران حديثي الولادة باستخدام اثنين من نقاط الخمسة بالمائة من الأيزوفلوران. عندما يتم تخدير الجرو بعمق ، قلل الأيزوفلوران إلى واحد بالمائة. قبل المتابعة ، استخدم قرصة إصبع القدم للتأكد من تخدير الماوس بدرجة كافية.

بعد ذلك ، قم بإصلاح رأس الجرو في الجهاز التجسيمي. ضع قضبان الأذن في قنوات الأذن وشد القضبان برفق. كن حذرا:جمجمة حديثي الولادة ناعمة جدا.

الآن ، قم بعمل شق خط الوسط بطول خمسة عشر ملم في الجمجمة. ثم ، باستخدام ملقط ، اسحب فروة الرأس برفق لتوسيع الشق. لإبقاء الشق مفتوحا ، استخدم قطعة من القطن المنقوع بالمحلول الملحي.

الآن ، حدد موقع بريجما ولاجدا ، وقم بتمييزهما بقلم رصاص. تعد خطوات زرع القطب الكهربائي التالية أمرا بالغ الأهمية ويجب تنفيذها بدقة. أولا ، باستخدام إبرة قياس 26 ، قم بعمل ثقب لدغ في قشرة الفص الجبهي ، على بعد ملليمترين من بريجما وضمن نقطة صفر خمسة ملليمترات من خط الوسط.

بعد ذلك ، قم بعمل ثقب لدغ في الحصين عند نقطة واحدة ثمانية ملليمترات خلف بريجما ونقطة صفر خمسة ملليمترات جانبية من خط الوسط. يجب ألا تخترق الإبرة أكثر من ملليمترين تحت سطح القشرة لتقليل تلف الدماغ. الآن ، باستخدام الملقط ، أدخل القطب المرجعي في فتحة القشرة ، وأدخل أقطاب التسجيل في فتحة الحصين.

بعد ذلك ، ضع مرهم الإريثروميسين حول الأقطاب الكهربائية ، وقم بتثبيت الأقطاب الكهربائية في مكانها باستخدام سيانواكريلات. أثناء روابط الغراء ، قم بإعداد الأسمنت السني بقوام لزج ولزج. لزوجة الأسمنت السني أمر بالغ الأهمية.

إذا كان أسمنت الأسنان رقيقا جدا ، فقد يؤدي ذلك إلى تكوين طبقة عازلة غير مرغوب فيها تحت القطب. إذا كان الأسمنت كثيفا جدا ، فصل الأقطاب الكهربائية بسهولة أكبر بسبب الكتلة الزائدة. قبل وضع الأسمنت ، جفف الجمجمة والأقطاب الكهربائية تماما.

ثم قم بتثبيت الأقطاب الكهربائية في الجمجمة باستخدام أسمنت الأسنان. بعد ذلك ، ضع بعض حمض البيكريك على الأقطاب الكهربائية لإضافة طبقة أخرى من الحماية إليها. الآن ، قم بإزالة من الإطار التجسيمي ، وحقن 300 ميكرولتر من محلول الجلوكوز بنسبة عشرة بالمائة تحت الجلد.

ثم انقل إلى بطانية ساخنة لإبقائه عند 37 درجة مئوية حتى يصبح متنقلا. بمجرد أن تصبح متنقلة ، قم بإعطاء البوبرينورفين للتوسط في آلام ما بعد الجراحة ، ونقل الجرو إلى قفص منزله مع سده. قبل استخدام الغرسة ، انتظر يومين على الأقل حتى يتعافى الجرو.

بعد فترة التعافي ، قم بإسكان الجرو بمفرده لعمل تسجيلات لمدة عشر دقائق تقريبا حتى يصبح الجرو على دراية بالبيئة. قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية بمكبر للصوت ، وقم بتوصيل مكبر الصوت بمحول AD متصل بجهاز كمبيوتر. احرص على عدم تشابك هذه الروابط.

بعد ذلك ، في وحدة الحصول على البيانات ، حدد معدل أخذ عينات لا يقل عن 10 ، 000 هرتز للتسجيل ، وتحقق من نقل البيانات بشكل صحيح. جمع تسجيل أساسي. بعد أخذ تسجيل أساسي ، قم بحقن الجرو داخل الصفاق بحمض الكاينيك للحث على نوبات الصرع.

بعد خمس عشرة دقيقة من الحقن ، راقب وسجل إفرازات الصرع. احفظ البيانات الرقمية وقم بتحليلها باستخدام برنامج معالجة الإشارات. الكشف عن مستوى القدرة لمكونات التردد المختلفة في مخطط كهربية الدماغ لحديثي الولادة باستخدام تحليل طيف القدرة.

احسب الطاقة من الأطر الزمنية للدقيقة الواحدة عن طريق إيجاد جذر متوسط السعة التربيعية من واحد إلى مائة هرتز ، وهو نطاق EEG. بعد عشر دقائق من حقن حمض كاينيك ، تم تسجيل أنماط تصريف مخطط كهربية الدماغ المتكررة والصخرية. كانت النوبات الأكثر شيوعا المسجلة هي النوع الرمعي المنشط.

استمرت مدة منشط الإيكتال حوالي خمس عشرة ثانية. ولوحظ أيضا أن التصريفات المنشطة أعقبتها رشقات نارية رمعية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية زرع أقطاب كهربائية والحصول على تسجيلات مخطط كهربية الدماغ عالية الجودة من ص8 إلى ص 15 صغار الفئران حديثي الولادة.

بمجرد حشدها ، يمكن إجراء عملية زرع عنق الرحم في أقل من عشر دقائق اعتمادا على مدى تعقيد الجراحة.