تقييم التناوب العفوي، التعرف على الكائن الرواية وتسلسل الأطراف في الماوس المعدلة وراثيا نماذج من اميلويد β وتاور الاعتلال العصبي

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس السلوكيات غير الطبيعية الشائعة في نماذج الفئران لمرض الزهايمر بطريقة موحدة من أجل فحص المركبات التي قد يكون لها آثار مفيدة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال اكتشاف الأدوية قبل السريرية لمرض الزهايمر مثل ما إذا كان المركب فعالا أو كيف يمكن أن يعمل المركب. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تراقب عددا من السلوكيات المختلفة باستخدام نهج مرحلي حساس ومحدد.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للعلاجات الفعالة لمرض الزهايمر ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على نماذج الفئران الأخرى للخرف أو الخلل الوظيفي المعرفي مثل الخرف الجبهي الصدغي أو إصابات الدماغ الرضحية أو التوحد. قبل استخدام المتاهة Y ، قم بتنظيفها جيدا بمنديل مبيض غير معطر. ثم امسحها بنسبة 70٪ من الإيثانول واشطفها بالماء.

قم بإعداد نظام الحصول على البيانات أو كاميرات الفيديو لتتبع الفئران بشكل صحيح أثناء تشغيلها للمتاهة. خلال هذه العملية ، سجل صورة لعصا قياس في المتاهة لمعايرة المسافات التي توجد فيها. الآن ، انقل قفص الماوس برفق شديد إلى طاولة على مقربة من المتاهة.

أخرج الماوس من القفص وضعه برفق في ذراع واحد من المتاهة Y المواجهة للمركز. ثم ابتعد بدرجة كافية عن المتاهة بحيث لا يستطيع الماوس رؤيتك وابدأ تسجيل الفيديو على الفور. سجل الماوس لمدة 10 دقائق.

بعد 10 دقائق ، قم بإزالة الماوس برفق وأعده إلى قفص منزله. قبل الشروع في استخدام الماوس التالي ، اغسل المتاهة Y جيدا مرة أخرى باستخدام إجراء الغسيل المكون من ثلاث خطوات. قبل هذا الاختبار ، اغسل ساحة الحقل المفتوح تماما كما فعلت مع متاهة Y.

قبل يوم واحد من التعرض للكائن ، اعتاد الفئران على الساحة. تأكد من أن نظام التتبع يعمل. وقم بمعايرة المسافات باستخدام عصا القياس كما كان من قبل.

أيضا في برنامج وضع العلامات ، حدد زوايا الساحة. الآن ، ضع قفص الفأر برفق على طاولة قريبة من الساحة. قم بإزالة الماوس وضعه برفق في وسط الساحة.

ثم ابدأ التسجيل بسرعة واسمح للماوس باستكشاف الساحة لمدة نصف ساعة. تأكد من الابتعاد عن أنظار ولا تزعجه أثناء الاختبار. بعد جلسة التعود ، أعد الفئران إلى قفصها المنزلي.

ونظف الساحة جيدا كما كان من قبل قبل قبل تعويد الماوس التالي. بعد ساعتين إلى ثلاث ساعات ، قم بتنفيذ مرحلة العينة من اختبار الذاكرة. قم بتعديل الساحة عن طريق وضع كائنين متطابقين بداخلها محاذاة بالتساوي مع جدار واحد.

قم بإصلاح الأشياء في مكانها باستخدام معجون متصاعد. في البرنامج ، قم بتدوين مواضع الكائنين بالإضافة إلى زوايا الساحة. اغسل الأشياء والساحة كالمعتاد قبل تقديم الماوس.

قم بإجراء الاختبار مثل جلسة التعود على وضع الماوس في الساحة المواجهة للأشياء. الآن ، دع الماوس يستكشف الساحة لمدة 15 دقيقة فقط. بعد ساعتين إلى ثلاث ساعات ، قم بإجراء المرحلة النهائية من اختبار الذاكرة.

في هذه الجلسة ، احتفظ بكائنا مألوفا في نفس الموقع وقم بإزالة الكائن المألوف الآخر ، واستبدله بكائن جديد تم تقديمه حديثا. اترك مسافة كافية بين الجدران والأشياء حتى تتمكن الفئران من استكشاف الأشياء بحرية من جميع الزوايا. وكما كان من قبل ، قم بتأمين الأشياء بالمعجون.

عبر جميع مجموعات الاختبار في الدراسة ، تأكد من وجود توازن في المواضع للأشياء الجديدة والمألوفة. قم بإجراء الجلسة النهائية مثل الجلستين الأخريين ولكن قم بتسجيل سلوك الماوس لمدة 10 دقائق فقط. إشباع الأطراف هو اختبار حركي وظيفي يحدد العجز في وظيفة القشرة الشوكية.

في هذا الاختبار، استخدم جهازا محمولا لتسجيل الجلسة بأكملها بالفيديو. ابدأ بوضع قفص المنزل على طاولة نظيفة وتوثيق معرف ، ثم قم بإزالة الفأر برفق من قفصه واحتفظ به معلقا من الذيل لمدة خمس إلى 10 ثوان مع تركيز الفيديو على حركات مخلب الخلفي والأمامي. يتطلب التعامل مع الماوس حتى لا يحاول الهروب ممارسة.

بعد التقاط خمس ثوان على الأقل من الفيديو ، أعد الماوس إلى قفصه المنزلي. وأعد القفص إلى الرف. ثم قم بتنظيف الطاولة قبل تكرار الإجراء على الماوس التالي.

في وقت لاحق ، قم بتسجيل السلوك في مقاطع الفيديو على مقياس من صفر إلى أربعة. باستخدام اختبار المتاهة Y ، كشف خط فأر معدلة وراثيا قديما يظهر أمراضا شبيهة بمرض الزهايمر عن عيب التناوب التلقائي المتوقع. على النقيض من ذلك ، أظهر خط فأر نموذجي آخر لمرض الزهايمر زيادة في التناوب التلقائي الذي كان بسبب فرط النشاط الشديد والصور النمطية في الخط.

تتداخل هذه السلوكيات بشكل كبير مع قياس التناوب التلقائي. في اختبار الكائن الجديد ، يمكن تقييم فرط النشاط والسلوكيات النمطية الأخرى أثناء التعود خلال مرحلة العينة ، تم قياس استكشاف كل كائن على حدة لتحديد دون تحيز الكائن.

تظهر الدوائر المفتوحة التي أظهرت تحيزا وتم استبعادها من مرحلة الاختبار. تم تحليل مرحلة الاختبار بثلاث طرق مختلفة. عندما كان إجمالي الوقت الاستكشافي قابلا للمقارنة عبر المجموعات ، تم تحليل وقت الاستكشاف الخام لكل كائن.

عندما تم استكشاف المجموعات المقارنة لفترات زمنية مختلفة ، تم استخدام تفضيل الجدة أو مؤشر التمييز لتسجيل الاختبار. لوحظ إشباق الأطراف ، وهو ليس مقياسا معرفيا ، في العديد من نماذج فأر الذيل المعدلة وراثيا. يلخص هذا السلوك بعض العجز الحركي الوظيفي الذي لوحظ في المرحلة المتأخرة من مرض الزهايمر.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التعامل مع الفئران برفق وتقليل أي اضطرابات في بيئة الاختبار مثل الضوضاء العالية أو الروائح الجديدة. باتباع هذا الإجراء ، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل متاهة المياه المكانية أو تكييف الخوف السياقي من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل ما إذا كان المركب يؤثر على وجه التحديد على وظيفة الحصين. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية فحص فعالية المركبات في نماذج الفئران لمرض الزهايمر باستخدام اختبار المتاهة Y واختبار التعرف على الأشياء الجديد واختبار إمساك الأطراف.