May 20th, 2017
تصف هذه الدراسة العمليات الجراحية والتقنيات التجريبية لإجراء قياس المثانة مستيقظا في الماوس تتحرك بحرية. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يوفر أدلة تجريبية لدعم الأمثل لها والتوحيد القياسي.
الهدف العام من هذا الإجراء الجراحي المجهري هو زرع أنبوب داخل المثانة في المثانة البولية وتسجيل وظيفة المسالك البولية السفلية في فأر مستيقظ. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الحصول على بيانات تجريبية قابلة للتكرار من قياس المثانة المستيقظة واختبار وظيفة المثانة في نماذج الفئران السليمة والمريضة. الهدف الرئيسي من هذه التقنية هو توفير طريقة موحدة تعتمد على البيانات التجريبية لإجراء قياس المثانة في نموذج الفأر.
لتحضير الأنبوب للزرع ، قم أولا بقطع قطعة من أنبوب pe10 يبلغ طولها سبعة سنتيمترات ، وتقدم ببطء أحد طرفيه نحو اللهب المكشوف لإنشاء توهج ، وسحب الأنبوب بسرعة بمجرد تطور التوهج. ثم استخدم إعداد الحرارة المنخفضة على مسدس الغراء لتطبيق ثلاث قطرات من الغراء الساخن لجميع الأغراض على بعد 4.5 و 5 و 5.5 سم من الطرف المتوهج للأنبوب. استخدم المقص لتقليم المخالفات من فقاعات الغراء.
ضع الغراء الساخن على أحد طرفي إبرة قياس 30 ، والتي سيتم استخدامها لتوصيل أنبوب pe10 بعد زرعه. بعد ذلك ، تأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم وتطبيق المرهم على عيون. بعد تعقيم الجزء العلوي من الظهر وأسفل البطن بالكحول والبيتادين ، قم بعمل شق 1.5 سم بين القشرة ، وضع في وضع ضعيف فوق وسادة تسخين 37 درجة مئوية مغطاة بستائر معقمة تحت مجهر تشريح.
الآن قم بعمل شق في جلد البطن السفلي بمقدار 1.5 سم في خط الوسط. يتبعه شق مطابق عبر اللفافة على طول الخط الآلبا والعضلات لكشف القبة والنصف العلوي من المثانة البولية. الحفاظ على رطوبة أحشاء البطن مع محلول ملحي فسيولوجي دافئ ، قم بتدوير على جانبه للوصول إلى الشق الموجود في مؤخرة العنق
.ادفع إرقاء ضيق تحت الجلد من خلال الشق لبدء قناة تحت الجلد على الظهر والاستمرار على طول جانب. بمجرد وصول طرف الأداة إلى أسفل القفص الصدري ، أدر الطرف نحو خط الوسط في داخل البطن واستمر في تقدم الإرقاء حتى يتعرض الطرف عند شق البطن تحت الطبقة العضلية. بمجرد أن يكون طرف الإرقاء داخل الشق ، اضغط على الجلد فوق الكتف وقم بتطبيق الجر للمساعدة في تثبيت حتى يظهر طرف الأداة عند شق البطن.
الآن استخدم hemostat لفهم الطرف غير المتوهج للأنبوب وسحب المرقئ ببطء ، وسحب نهاية الأنبوب من الشق الموجود في مؤخرة العنق وضبط الطرف المتوهج للأنبوب بحيث يقع مباشرة فوق قبة المثانة. قم بتثبيت المثانة بلفافة صغيرة من الأنسجة الخالية من الوبر. ضع خياطة أحادية 6-O مربوطة بشكل فضفاض وغير قابلة للامتصاص أعلى قبة المثانة.
باستخدام اليد غير المهيمنة والملقط الدقيق المنحني رقم سبعة من دومون ، أمسك قبة المثانة واستخدم إبرة قياس 21 في اليد المهيمنة لإجراء بضع المثانة في قمة القبة. قم بفحص بضع المثانة برفق باستخدام زوج مغلق من ملقط صغير منحني رقم خمسة للتأكد من أن القسطرة يمكن أن تمر بسهولة عبر الفتحة ووضع الطرف المتوهج لقسطرة pe10 في المثانة ، مما يدفع التوهج لأسفل إلى عنق المثانة حتى لا ينزلق أثناء تأمينه. مع وضع ربطة الشعيرات الأحادية أمام الأنبوب ، شد خياطة 6-O حول قبة المثانة والأنابيب في أعلى مكان ممكن على المثانة لتجنب تقليل سعة المثانة بشكل مصطنع.
بدلا من ذلك ، ضع خياطة خيط محفظة فضفاضة على قبة المثانة ، وقم بإجراء بضع المثانة كما هو موضح للتو ، وأدخل الطرف المتوهج للقسطرة في الثقب. ثم اربط الخيط حول القبة والأنبوب كما هو موضح للخياطة المسطحة. في كلتا الحالتين ، احرص على تأمين الأنبوب دون التسبب في إصابة جسيمة لجدار المثانة.
إذا تم أخذ الكثير من الأنسجة ، تقليل سعة المثانة. إذا تم أخذ القليل جدا ، فسوف يتسرب الاتصال. لاختبار ختم وموضع الأنبوب في المثانة ، قم بتوصيل حقنة أنسولين سعة 0.5 ملليلتر مزودة بإبرة قياس 30 بالطرف البعيد من الأنبوب واملأ المثانة ببطء ب 0.1 إلى 0.2 مل من كلوريد الصوديوم 0.9٪ حتى تظهر قطرة في فتحة مجرى البول.
إذا كان الختم غير مكتمل ، فقم بلف ذيول الخياطة حول المثانة وإعادة ربطها. ثم إفراغ المثانة عن طريق الشفط. إذا لم يحدث تسرب في القبة ، فقم بتدعيم المثانة بزوج من الملقط الصغير المنحني واسحب الأنبوب برفق حتى يستقر التوهج على داخل قبة المثانة.
أعد اختبار الختم باستخدام الطريقة الموضحة سابقا. قم بقص ذيول الخيط ، وإزالة لفة الأنسجة ، وإعادة المثانة إلى وضعها الطبيعي. ثم استخدم خياطة 6-O لإغلاق جدار البطن في طبقتين.
وقم بتدوير برفق على بطنه. أدخل الجزء تحت الجلد من المرساة المعدنية في الشق داخل المنظار ، واستخدم شعيرات أحادية 6-O لتأمين الأنبوب والتثبيت بخياطة مرتبة عمودية. تأكد من بقاء فقاعة الغراء فوق الجلد وتحته لمنع الأنبوب من الانسحاب وقطع الأنبوب على ارتفاع سنتيمترين تقريبا فوق الجلد.
ثم أدخل سدادة قياس 30 برفق في نهاية الأنبوب لمنع تسرب البول. قبل إجراء القراءة ، استخدم أنبوب pe50 لتوصيل مضخة التسريب ومحول الضغط والدوران قياس 22. ثم ضع التجربة المخدر في وضع الانبطاح وقم بإزالة قابس القياس 30.
قم بتوصيل الحبل بالمرساة ، وحرك قسطرة المثانة في نهاية pe50 ، واستخدم الغراء الساخن لتشكيل ختم محكم للماء. ضع الماوس على أرضية السلك. وابدأ التسجيل.
ثم عندما يتعافى من التخدير ويستقر ضغط المثانة ، ابدأ في ضخ 0.9٪ كلوريد الصوديوم بمعدل 0.6 مل في الساعة. عادة ، في اليوم الثاني بعد إدخال القسطرة ، يتطور تورم شديد تحت المخاطية يشغل نصف المقطع العرضي للمثانة مما يؤدي إلى انسداد التجويف. في اليوم الخامس ، يتم حل الوذمة تماما تاركة المناطق تحت المخاطية تتسلل إلى الخلايا الالتهابية التي غزت جزئيا العضلات
يرتبط أكبر مدى لتورم الأنسجة الذي لوحظ في اليومين الثاني والثالث بالتفريغ السلوكي المقابل مع التي تظهر ضعفا كبيرا في وظيفة المثانة في هذه النقاط الزمنية. كما هو متوقع من البيانات النسيجية ، يتم تطبيع تردد الإفراغ بحلول اليوم الخامس بعد الجراحة. يتميز الضغط داخل المثانة في مستيقظ يتحرك بحرية مع الحد الأدنى من القطع الأثرية الحركية بضغط أساسي يتراوح من 10 إلى 15 سم من الماء والذي قد يظل دون تغيير أو قد يزداد تدريجيا بما لا يزيد عن 10 سنتيمترات من الماء أثناء دورة التعبئة.
متبوعا بزيادة ضغط نمط النبض المفاجئ وانخفاضه أثناء الإفراغ. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تقليل الضرر الذي يلحق بالمثانة للحفاظ على فسيولوجيا الأنسجة.
بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل قياس المثانة أحادية الدورة للإجابة على أسئلة إضافية حول سعة المثانة الوظيفية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية زرع أنبوب جراحيا في المثانة البولية واستخدام مقياس المثانة المستيقظ لتقييم وظيفة المسالك البولية السفلية في الفئران.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تصف هذه الدراسة إجراءً دقيقًا للجراحة المجهرية لزرع أنبوب داخل المثانة في مثانة فأر مستيقظ. يهدف هذا الأسلوب إلى توحيد الحصول على بيانات تجريبية قابلة للتكرار للقياس المثاني أثناء الاستيقاظ.
Standardized microsurgical techniques for awake cystometry in mouse models enable reproducible assessment of lower urinary tract function, supporting target validation in urology drug discovery. By minimizing movement artifacts and establishing post-operative recovery timelines, this method improves predictive confidence in bladder physiology studies. It facilitates mechanistic de-risking of therapeutic candidates affecting urinary continence, bladder capacity, or voiding patterns in preclinical pipelines.
This method fits within the discovery continuum from target validation through preclinical efficacy testing, particularly for urological indications where bladder function is a key biomarker.