طريقة جديدة لنموذج اعتلال الدماغ الصدمة المزمن في ذبابة الفاكهة

الهدف العام من هذا الإجراء الجديد هو إلحاق إصابات دماغية مؤلمة مغلقة في ذبابة الفاكهة ، ذبابة الفاكهة ، لإنشاء نموذج جديد للاعتلال الدماغي الرضحي المزمن. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن ، مثل كيفية تحفيز الصدمة المتكررة على تنكس الخلايا العصبية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر التأثيرات المتكررة للقوة القابلة للتعديل على رأس الذبابة مباشرة دون التسبب في تلف أجزاء أخرى من جسم.

العرض التوضيحي في العالم الحقيقي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم تجميع الجهاز وخطوات تحميل الذبابة ، لأن رأس ذبابة الفاكهة صغير جدا ومن المهم تطبيق التأثير على الرأس فقط. لجعل الجهاز المستخدم في إقناع أو ضرب ذباب الفاكهة ، أولا ، قم بعمل الجزء المؤثر من الجهاز. قم بإزالة المكبس من حقنة توبركولين من البولي كربونات سعة مليلتر واحد ثم قم بقص البرميل عند علامة مليلتر واحد.

بالنسبة للاصطدام، استخدم حاجز الهباء الجوي الموجود على طرف ماصة سعة 200 ميكرولتر. يجب أن يكون طول هذا الاصطدام ثلاثة ملليمترات وقطره أربعة ملليمترات. بعد ذلك ، قم بتعبئة الاصطدام في برميل المحقنة مع الجانب المسطح باتجاه الفوهة.

لتوفير القوة ، قم بتوصيل برميل المحقنة بمنظم تدفق ثاني أكسيد الكربون. يجب أن يكون لدى المنظم مفتاح تبديل On Off والتحكم الجيد في معدل تدفق الغاز. بعد ذلك ، قم بتثبيت البرميل عموديا على حامل حديدي ، بحيث يسقط الاصطدام في قاع البرميل.

بعد ذلك ، اصنع حامل الذبابة. ابدأ بطرف ماصة سعة 200 ميكرولتر. اقطع طرف الماصة خمسة ملليمترات من الطرف الصغير لعمل فتحة قطرها 8 ملليمترات.

سوف يتناسب رأس الذبابة مع هذا الثقب ، لكن الصدر لن يفعل ذلك. أخيرا ، قم بعمل حامل الذبابة وجهاز الاصطدام. أولا ، قم بقطع طرف ماصة سعة مليلتر واحد على بعد 44 ملم من الفتحة الصغيرة.

ثانيا ، قم بقص طول ستة ملليمترات من غطاء الإبرة لحقنة سعة مليلتر واحد. ثم ادفع الاثنين معا. قم بتخدير أنثى بالغة تبلغ من العمر يومين باستخدام ثاني أكسيد الكربون.

من وسادة ثاني أكسيد الكربون ، استخدم فرشاة دقيقة لنقل الذبابة برفق إلى الحامل. ثم اضغط برفق على الحامل حتى يبرز الرأس من الحافة. من خرطوم يتعرض ، استخدم إبرة حقنة واحدة مليلتر ضعيفة لثنيها برفق داخل الحافة.

من الأهمية بمكان الحفاظ على جسم الذبابة ، وخاصة جزء الفم ، داخل الحامل. خلاف ذلك ، قد تموت الذبابة من تلف الأعضاء الداخلية أو من عدم القدرة على تناول الطعام. بعد ذلك ، اضبط ضغط الغاز على 100 كيلو باسكال واضبط التدفق حسب الحاجة.

بمجرد تحميل الذبابة ، اربط الحامل ببرميل المحقنة باستخدام الموصل ، بحيث يكون رأس الذبابة متجها لأسفل. بعد ذلك ، باستخدام مفتاح التبديل ، أرسل دفعة من الغاز التي تحرك الاصطدام لضرب الذبابة مرة واحدة ومرة واحدة فقط. الآن ، افصل حامل الذبابة وقم بتفريغ الذبابة مرة أخرى على وسادة ثاني أكسيد الكربون.

ادهن الذبابة في قارورة فارغة حتى تتعافى. احتفظ بذبابة واحدة لكل قارورة. يستغرق التعافي بضع دقائق فقط.

كرر العملية لاختبار أربعة ذباب لكل مجموعة تجريبية. يجب أن تستغرق معالجة مجموعتين ، اختبار واختبار خديف ، من 20 إلى 30 دقيقة فقط. تعامل مع الوسادة تماما مثل الاختبار ، باستثناء عدم تضمين حاجز الهباء الجوي في أنبوب الاصطدام.

لتتبع حركات الذبابة في طبق بتري ، أولا ، املأ طبقا يبلغ طوله ستة سنتيمترات بمطاط مطاط من السيليكون الشفاف لإنشاء ساحة التتبع. اترك فجوة ثلاثة ملليمترات بين السيليكون والغطاء حتى يتمكن الذباب من المشي بحرية في الفجوة ، ولكن لا يطيران. تحت ساحة التتبع ، لديك خلفية بيضاء.

بعد ذلك ، قم بتخدير أربعة ذباب من نفس مجموعة العلاج ووضعها في الساحة. دع الذباب يتأقلم لمدة ساعة مع الساحة ، والتي يجب أن تكون مضاءة بالكامل وعند حوالي 22 درجة مئوية. ليس أكثر سخونة من درجة حرارة الغرفة.

بعد ساعة ، استخدم كاميرا جهاز مقترنة بالشحن موضوعة فوق الساحة لتسجيل نشاط الذبابة لمدة خمس دقائق. بعد التسجيل لمدة خمس دقائق ، قم بتخدير الذباب في الساحة وإعادته إلى قارورة منزلية جديدة. ثم تخلص من الساحة.

في وقت لاحق ، قم بتحليل التسجيلات باستخدام برنامج Ctrax المتاح مجانا. يقوم هذا البرنامج بإنشاء بيانات تتبع ، والتي يمكن تصديرها بتنسيق متوافق مع لغة قابلة للبرمجة ، مثل تنسيق MATLAB. من البيانات ، احسب المسافة المقطوعة لكل إطار ، ومتوسط مسافة المشي لكل ذبابة ، ومتوسط المسافة المقطوعة لكل ذبابة.

للحصول على دلالة إحصائية ، توقع اختبار حوالي 100 ذبابة لكل مجموعة علاج. لإنشاء نموذج اعتلال دماغي رضحي مزمن ، تم تحليل فعالية إصابة واحدة مغلقة الرأس يسببها الجهاز المؤثر بسرعات مختلفة باستخدام إناث كانتون إس البالغات من العمر يومين. تم الاحتفاظ بضغط الغاز عند 100 كيلو باسكال.

أظهر الذباب الذي تعرض لضربة واحدة بأعلى معدل تدفق تم اختباره ، عيوبا خارجية ضئيلة. على الرغم من عدم وجود دليل واضح على الأضرار الخارجية ، إلا أن الإصابات بمعدل تدفق 15 لترا في الدقيقة كانت مميتة بشكل حاد ، مما أدى إلى بقاء أقل من 10٪ على قيد الحياة في غضون 24 ساعة. زاد البقاء على قيد الحياة مع انخفاض معدلات التدفق.

تم تحقيق البقاء على قيد الحياة بنسبة مائة بالمائة بخمسة لترات في الدقيقة أو أقل ، لذلك تم اختيار خمسة لترات في الدقيقة كمعيار للنموذج. بعد الضرب مباشرة ، استعاد الذباب حركته تدريجيا في غضون أربع دقائق. كان الشفاء من الوشم أسرع بحوالي دقيقة.

تم استخدام تتبع الحركة بعد الاصطدام بمساعدة الفيديو لقياس وظيفة القاطرة. خلال اليومين التاليين للتأثير ، عادت الحركة ببطء إلى طبيعتها. يتماشى هذا الدليل على الشفاء التدريجي مع التعافي من الاعتلال الدماغي الرضحي المزمن لدى البشر.

لتقييم الآثار طويلة المدى ، تم تطبيق بروتوكول إصابات الدماغ الرضحية المتكررة من خمس ضربات على مدى خمسة أيام. بعد عشرين يوما من العلاج ، تمت مقارنة حركة الأعضاء الباقين على قيد الحياة في كل مجموعة ومن الواضح أن المجموعة المعالجة كانت تمشي أقل. كما انخفض عمر المجموعة المعالجة بشكل كبير ، حيث بلغ متوسط 26 يوما مقارنة ب 37 يوما للضوابط.

بعد تطويرها ، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال إصابات الدماغ الرضحية المتكررة الخفيفة لاستكشاف الآليات المسببة للأمراض في النموذج الحيواني الكلاسيكي ذبابة الفاكهة السوداء. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر حماية خرطوم والصدر والبطن من التأثير المباشر لحاجز الهباء الجوي.