تقنية المناظير لجمع المسلسل من الكبد والغدد الليمفاوية مساريقي في قرود المكاك

الهدف العام من هذا الإجراء بالمنظار طفيف التوغل هو تحسين تقييم آثار النقل الميكروبي من الجهاز الهضمي عن طريق جمع الغدد الليمفاوية المساريقية وخزعات الكبد في نقاط زمنية متعددة مع تحسين رفاهية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا فيروس نقص المناعة البشرية حول العواقب المناعية للعدوى ونقل الميكروبات على الغدد الليمفاوية المساريقية والكبد ، وأمراض هذه الأنسجة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بأخذ العينات في نقاط زمنية متعددة في دراسة ذات تأثير ضئيل على أو على المعلمات التي يتم تقييمها.

يمكن أن توفر هذه الطريقة عينات حاسمة لتعزيز فهمنا لفيروس العوز المناعي البشري. يمكن تطبيقه أيضا على النماذج الأخرى التي يكون فيها التهاب الجهاز الهضمي ونقل الميكروبات مهمين. سيقوم بالإجراء الدكتور جيريمي سميدلي والدكتور كاسي موتس ، الجراحان البيطريان في مركز أبحاث الرئيسيات الوطني بواشنطن.

بعد تحضير المكاك للجراحة كما هو موضح في بروتوكول النص ، قم بتغطيته بستارة معقمة. بعد ذلك ، باستخدام ستارة كاميرا معقمة ، قم بتغطية الكاميرا الرقمية بإحكام وتوصيلها بالبرج. قم بتوصيل المنظار الصلب برأس الكاميرا.

ثم قم بتوصيل كابل ضوء معقم بالنطاق الصلب وقم بتوصيله بمصدر الضوء. أخيرا ، قم بتركيب أنبوب نفخ معقم على جهاز النفخ. لبدء تنظير البطن ، ضع شفرة مشرط 15 على بعد سنتيمتر إلى سنتيمتر تقريبا على يسار السرة وقم بعمل شق طعنة بطول 5 ملم تقريبا في الجلد يصل إلى عضلات البطن.

باليد غير المهيمنة ، ارفع جدار البطن على الجانب الجمجمي من الجرح. ثم باستخدام اليد الأخرى ، أدخل من خلال الشق طرف إبرة الأفروس بزاوية رأس. أمسك إبرة التقوس من العمود وادفعها بقوة حتى تنقر عبر جدار البطن وتقل المقاومة ضد الإبرة في تجويف البطن.

ثم قم بتوصيل أنبوب ثاني أكسيد الكربون2 بالإبرة وافتح محبس لإطلاق الغاز في تجويف البطن. قم بإنشاء صفاق رئوي عن طريق الوصول إلى ضغط يصل إلى 10 إلى 12 ملم من الزئبق. الآن بعد أن تم نفخ البطن بالكامل ، ضع شفرة المشرط 15 فوق البطن القحفي الأيسر ، ما يقرب من سنتيمترين إلى أربعة سنتيمترات الذيلية إلى الضلع الأخير ، وقم بعمل شق جلدي من خمسة إلى سبعة ملليمترات تقريبا.

بعد ذلك ، أدخل من خلال القطع مجموعة قنية المبزل بخمسة ملليمترات. أدخل التجميع على عمق من سنتيمتر إلى سنتيمترين ، وقم بتوجيهه بحوالي 45 إلى 60 درجة ذيلية. ثم بحركة دوارة ، حرك القنية للأمام لتصل إلى عمق 1.5 إلى ثلاثة سنتيمترات لربط القنية في البطن.

بعد ذلك ، قم بإزالة المبزل. افصل أنبوب النفخ عن إبرة التقوس وبعد ذلك ، قم بإيقاف تشغيل المحبس. قم بتوصيل الأنبوب بالقنية وافتح المحبس للحفاظ على التهاب الرئة.

بمجرد التحقق من الحفاظ على الضغط بنجاح ، قم بإزالة إبرة التقوس بعد ذلك ، من خلال القنية ، أدخل المنظار الصلب في تجويف البطن. تحت سيطرة الكاميرا ، قم بتعميق شق الجلد المتبقي بعد إزالة إبرة التقوس ، وقطع عضلات البطن والصفاق.

أخيرا ، ضع مع رفع القدمين عند حوالي 15 إلى 30 درجة فوق الرأس. لجمع خزعة من العقدة الليمفاوية المساريقية ، أدخل مسبارا صلبا في تجويف البطن من خلال الشق المحضر. ضع المسبار بين الثرب والأمعاء ، وبحركة لطيفة تشبه الكنس ، اكشف الأمعاء من الثرب لتصور المساريق المخفي أدناه.

استمر في تحريك المسبار من الاتجاه الذيلي إلى اتجاه الجمجمة لدفع الثرب بعيدا عن مجال الجراحة. ثم باستخدام المسبار ، حرك القولون الهابط نحو جدار البطن. افحص المساريق باستخدام المسبار لتحديد موقع الغدد الليمفاوية المساريقية الموجودة على طول الأوعية القولونية والأوعية المساريقية.

بمجرد تحديد العقدة الليمفاوية ، استبدل المسبار الموجود في تجويف البطن بملقط من ماريلاند وامسك المساريق المجاور للعقدة. اسحب المساريق باتجاه الشق وقم بإزالة المنظار من القنية. ثم قم بإيقاف تشغيل مادة النفخ واترك محبس القنية مفتوحا لإطلاق الغاز من البطن ، مما يخفف من الداخل الخارجي.

ثم اسحب المساريق من خلال الشق. أمسك المساريق الخارجي بالملقط لضمان الوصول من خلال الشق. جس المساريق أو راقبه لتحديد العقدة الليمفاوية التي يجب أن تظهر على شكل عقيدة أكثر صلابة أو منطقة رمادية.

بعد ذلك ، باستخدام مرقئ المنحني ، قم بعمل فتحة من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات في المساريق المجاور للعقدة ، وقم بتشريح أي مرفقات بالأنسجة. إذا لزم الأمر ، قم بربط الأوعية الدموية بخياطة أحادية غير قابلة للامتصاص 4-0 ، وباستخدام المشرط ، قم بتشريح العقدة الليمفاوية. ثم ضع الخزعة في وسط RPMI 1640 على الجليد.

أخيرا ، حرر المساريق وقم بنفخ البطن مرة أخرى لتمكين سحب الأنسجة إلى تجويف البطن. أعد الجدول إلى الوضع الأفقي. لجمع خزعة الكبد ، أدخل قنية ملولبة في تجويف البطن من خلال الشق المستخدم لجمع العقدة الليمفاوية.

ثم باستخدام القنية ، انزلق في النطاق الصلب الموجه نحو تجويف البطن القحفي لتصور الكبد. تحت سيطرة الكاميرا ، أدخل ملقط الخزعة من خلال القنية المستخدمة سابقا لنفخ تجويف البطن. ضع الملقط أسفل هامش فص الكبد المحدد بحيث يواجه فكيهما الأنسجة ، وافتح الملقط للسماح للهامش بالسقوط في الفكين.

بعد ضبط موضعها ، أغلق الملقط وحافظ على الضغط لمدة 20 إلى 30 ثانية تقريبا. ثم قم بإزالة العينة عن طريق سحب الملقط برفق عبر القنية. ضع الخزعة في وسط RPMI على الثلج.

أخيرا ، تأكد من عدم ملاحظة أي نزيف في موقع الخزعة ، وأغلق الشقوق. يتم تقديم هنا الغلة الخلوية التي تم الحصول عليها من العقدة الليمفاوية المساريقية وخزعات الكبد التي تم جمعها من أنثى ميكاك صحية في نقطتين زمنيتين مختلفتين. كما هو متوقع ، أسفرت خزعات العقدة الليمفاوية عن عدد أكبر بكثير من الخلايا المعزولة عند مقارنتها بخزعات الكبد.

بغض النظر عن الأنسجة المصدر ، كان أكثر من 85٪ من الخلايا المعزولة قابلة للحياة. ثم تم تحليل عينات الخلايا المعزولة بحثا عن CD45 + الكريات البيض و CD45 + CD3 + الخلايا الليمفاوية. كان لدى الغدد الليمفاوية المساريقية ترددات أكبر من الخلايا الليمفاوية CD45 + و CD3 + الخلايا الليمفاوية عند مقارنتها بالخلايا المشتقة من الكبد.

أظهر التوصيف التفصيلي للمجموعات المعزولة أن الغدد الليمفاوية المساريقية تحتوي على نسب أعلى بكثير من خلايا CD3 + T وخلايا CD4 + T ، بالإضافة إلى عدد مرتفع من خلايا CD8 + T. على العكس من ذلك ، تم إثراء الكبد بشكل كبير في CD14 + الكريات البيض. أظهر كلا العضوين وفرة مماثلة من خلايا CD20 + B.

بمجرد إتقانها ، يمكن تنفيذ هذه التقنية في 30 إلى 40 دقيقة. عادة ما يتم استرداد من التخدير ، وتنشط وتتأكل في غضون ساعتين ، وتكون الشقوق صغيرة جدا بحيث يصعب رؤية جانب القفص. عند محاولة هذا الإجراء ، من المهم الحفاظ على في حالة جسم تسهل النجاح.

يمكن أن تكون دهون المساريق الكبيرة عقبة صعبة لأنها تحجب العقد وتزيد من قابلية القلي والنزيف. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الفصد ، وخزعة العقدة الليمفاوية الطرفية ، وتنظير الجهاز الهضمي العلوي والسفلي وخزعة المستقيم من أجل تقييم الاستجابات المناعية الجهازية والمخاطية ، وحالة الميكروبات والحواجز الظهارية ، بالإضافة إلى الأحمال الفيروسية. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مختبرنا لاستكشاف التجمعات الميكروبية في الالتهاب طوليا في أنسجة المكاك التي كانت متاحة في السابق فقط عن طريق التشريح.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج فيروس نقص المناعة البشرية ، حيث أن نقل الميكروبات هو سبب رئيسي للالتهاب الذي يؤدي إلى التسبب في فيروس نقص المناعة البشرية. يمكن أن يوفر تقييم هذا بطريقة متسلسلة أهدافا محتملة ويسمح بتقييم التدخلات العلاجية. لا تنس أن العمل مع أي مكاك مصابة بالفيروسات يمكن أن يكون خطيرا للغاية.

يجب أن تتوفر الاحتياطات مثل التدريب المناسب على المخاطر البيولوجية بما في ذلك فيروس هربس المكاكيسين 1 ، ومعدات الحماية الشخصية المناسبة ، ومجموعات اللدغات والخدش ، والمتابعة الطبية المناسبة.