تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

الهدف الأساسي من هذا المقال المرئي هو تقديم تعليمات بصرية مفصلة توضح كيفية تشريح بنكرياس الفأر. ستكون هذه التعليمات مفيدة للباحثين الذين يدرسون نماذج الفئران للأمراض البنكرياسية البشرية والذين يحتاجون إلى استئصال بنكرياس الفأر عن طريق التشريح لإجراء التحليل النسيجي أو التوصيف الأيضي. كما يوفر المقال المرئي تعليمات مفصلة لإجراء جمع دم نهائي باستخدام عملية ثقب القلب.

تظهر في الصورة طاولة عمليات تحتوي على المستلزمات المطلوبة. وتشمل هذه المستلزمات وعاءً زجاجياً واحداً بغطاء، وأنبوب فالكون (falcon tube) سعة 15 mL واحداً، ومقصاً جراحياً واحداً، وزجاجة عصر واحدة تحتوي على 70%ethanol، ولوحين من الفوم، وملقطين، وحقنتين مقاس 21 gauge سعة 1 mL، وأنبوبي فالكون (falcon tube) سعة 50 mL، وأنبوب طرد مركزي واحداً، وأنبوب حفظ تجميدي (cryo-vial) واحداً، وأربع ضمادات جراحية، وعشرة دبابيس، وموزعاً للمناديل المعقمة، وحاوية للأدوات الحادة. كما تظهر طاولة ما بعد العمليات مع المستلزمات المطلوبة.

وتشمل هذه الأدوات ميزانًا تحليليًا واحدًا، ووعاء ديوار سعة أربعة لترات من النيتروجين السائل، ووعاء ديوار ضحلاً واسع الفوهة، وحامل أنابيب ميكرو طافٍ، وزوجًا واحدًا من مقصات جراحية، وملقطين، وخمس قوارير تجميد، وموزعًا للمناديل المعقمة. ولإجراء القتل الرحيم، يوضع الفأر أولاً في جرة زجاجية تحتوي على قطعة شاش مشبعة ببضع قطرات من isoflurane، ثم تُغطى بالغطاء حتى يفقد الفأر وعيه، وهو ما يستغرق عادةً حوالي دقيقة واحدة. بعد ذلك، يُخرج الفأر من الجرة الزجاجية ويُجرى اختبار قرص القدم للتأكد من أن الفأر لا يشعر بأي انزعاج.

إذا فشل اختبار قرص القدم، يتم إرجاع الفأر إلى الجرة الزجاجية وإعادة وضع الغطاء حتى يمكن إجراء اختبار قرص القدم بنجاح. ضع الفأر على ظهره وثبت أطراف الفأر على لوح الرغوة الجراحي وبلل الجانب البطني للفأر بـ 70% ethanol. اقرص الفراء بالقرب من فتحة الإحليل باستخدام الملقط واسحبه قليلاً إلى الأعلى.

قم بإجراء شق عبر التجويف البطني، بدءاً من فتحة الإحليل، صعوداً عبر الخط الناصف وصولاً إلى الذقن. وبالقرب من نقطة بداية الشق الأولي، أمسك أحد جانبي الفراء وأجرِ شقاً آخر نحو الأسفل وبشكل قطري باتجاه القدم الخلفية. كرر هذه العملية بنفس الطريقة على الجانب المقابل.

حدد موقع القلب لإجراء عملية ثقب القلب النهائية. وللقيام بذلك، أمسك عظم القص بالملقط واقطع في الحجاب الحاجز. اقطع بسرعة للأعلى عبر القفص الصدري وأزل الجزء المقطوع للكشف عن القلب النابض.

بمجرد تحديد موقع القلب، قم بإزالة التأمور وأجرِ عملية ثقب القلب النهائية باستخدام المحقنة. ولجمع الدم بشكل مثالي، استخدم مكبس الإبرة لمحاكاة حركة ضخ القلب وتجنب سحب الدم بسرعة كبيرة. ثم أفرغ الدم في أنبوب جهاز الطرد المركزي وتخلص من المحقنة في حاوية الأدوات الحادة.

بعد إجراء ثقب القلب، يتم تنفيذ القتل الرحيم عن طريق إزالة الملحقات التي تربط القلب. حدد موقع المعدة في الجانب الأيسر من الفأر. يظهر البنكرياس كنسيج منتشر بلون أفتح يتصل بالمعدة والاثني عشر وعلى طول الأمعاء الدقيقة والغليظة كما يتصل بالطحال.

ابدأ بفصل البنكرياس برفق عن المعدة والاثني عشر باستخدام الملقط. استمر في فصل البنكرياس عن الأمعاء الدقيقة بدءًا من أقسام الصائم واللفائفي وصولاً في النهاية إلى الأعور والأمعاء الغليظة. عند الأعور، أعد وضع الملقط وواصل فصل البنكرياس على طول ما تبقى من القولون باتجاه المستقيم.

في هذه المرحلة، من الملائم قص وإزالة المقطع الممتد من المعدة إلى منطقة القولون التي تسبق المستقيم مباشرةً. حدد موقع البنكرياس والطحال الملتصق به، ثم حرك البنكرياس نحو الجانب الأيمن للفأر.

اقطع الروابط المتبقية بين البنكرياس والتجويف الصدري لفصل البنكرياس والطحال الملتصق به تماماً. أخرج البنكرياس وبسطه لفحصه. وإذا لزم الأمر، يمكن إزالة أعضاء أخرى في هذه المرحلة.

بعد عملية الاستخراج، تُنقل العينات إلى منطقة ما بعد الجراحة. يتم وزن كل عضو ثم وضعه في الأنبوب المبرد (cryo-vial) المخصص له. قم بتسجيل أي تشوهات ملحوظة.

بمجرد وضع الأعضاء في أنابيب التجميد، ضعها في حامل الأنابيب الدقيقة العائم ثم في وعاء ديوار الذي يحتوي على النيتروجين السائل. بعد التجميد السريع، يجب تخزين العضو في درجة حرارة 80- درجة مئوية للتخزين طويل الأمد. يجب تعقيم جميع أدوات التشريح المستخدمة باستخدام المناديل المعقمة.

يجب إغلاق أنبوب فالكون المبطن بالقطنة الجراحية المبللة بالإيزوفلوران. ينبغي استبدال القطنة الجراحية الموجودة على اللوح الرغوي بقطنة جراحية جديدة. كما يجب التخلص من أجزاء الفأر التي لم يتم جمعها وفقاً لسياسة التخلص من الحيوانات المتبعة في المنشأة.

يجب التعامل مع العناصر التالية وفقاً لذلك. وبمجرد تخزين هذه العناصر بشكل صحيح، يمكن إجراء مجموعة متنوعة من التجارب، والتي تشمل على سبيل المثال لا الحصر، المجهر الفلوري، وعلم الأنسجة بصبغتي الهيماتوكسيلين والإيوزين، والكيمياء النسيجية المناعية، ومطيافية الكتلة، ومطيافية الرنين المغناطيسي النووي. وبما أن البنكرياس عضو أساسي للنشاط الأيضي وإنتاج الإنسولين، فإن هذا الإجراء يسمح بالحفاظ على الخصائص الفسيولوجية.

من خلال عزل البنكرياس، يمكن إجراء تحليلات مستقبلية على العينة. تتيح هذه العملية مقارنة ودراسة التفاعلات من أنسجة أخرى داخل الكائن الحي نفسه، وفي الإطار الزمني ذاته.