وهناك طريقة لاختبار تأثير الإشارات البيئية على سلوك التزاوج في ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر

الهدف العام من هذا الفحص السلوكي هو تحديد تأثير قوائم الانتظار البيئية على السلوكيات الإنجابية ، مثل الخطوبة والتزاوج. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأحياء السلوكي وعلم الوراثة الأوروبية. مثل استنتاج العوامل الوراثية والبيئية على السلوكيات الإنجابية والآليات التي تخفف من تلك السلوكيات.

توفر هذه التقنية السرعة والمرونة في اختبار مجموعة واسعة من قوائم الانتظار البيئية التي تؤثر على التكاثر. وذلك مع عدد كبير جدا من التكرارات. سيوضح الإجراء جينكي جورتر ، طالب دراسات عليا من مختبري.

ابدأ التجربة بتحضير لتر واحد من وسط الذبابة الغنية. صب لترا واحدا من ماء الصنبور في دورق زجاجي سعة لترين مع قضيب تحريك مغناطيسي. ووضع الدورق على لوح ساخن مغناطيسي.

استمر في التقليب وقم بتشغيل الحرارة حتى 300 درجة مئوية حتى تصل درجة حرارة الغليان. قم بتشغيل التقليب حتى 500 دورة في الدقيقة وأضف المكونات إلى الماء المغلي. انتظر حتى تصبح الخميرة رغوة بقوة.

ثم اخفض درجة حرارة اللوح الساخن إلى 120 درجة مئوية. بعد 10 دقائق ، اخفض الصفيحة الساخنة إلى 30 درجة مئوية. ونترك الخليط يقلب حتى يبرد إلى 48 درجة مئوية.

راقب درجة الحرارة عن طريق إدخال مقياس حرارة مباشرة في الطعام. قم بإذابة جرامين من Tegosept إلى 10 ملليلتر من 96٪ من الإيثانول. يمزج الخليط مع خمسة ملليلتر من حمض البروبيونيك المولي مع الدرق.

يقلب لمدة ثلاث دقائق. سخني إبرة إلى الاحمرار في موقد بنسن. واخترق حفرة قطرها 0.3 سم على الجانب العلوي من طبق بتري بلاستيكي 3.5 سم × 1.0 سم.

عند تحضير وسط الطعام ، بمركبات ذات رائحة ، قم أولا بإدخال 30 ميكرولتر من المركب المطلوب في الطبق لمدة 1/2 من الأطباق التجريبية. اترك 1/2 الأطباق الأخرى فارغة للمقارنة. باستخدام ماصة مصلية سعة خمسة ملليلتر ، اسكب ثلاثة ملليلتر من وسط الطعام ، وتغطي قاع الطبق.

قم بتغطيته بقطعة قماش قطنية لمنع التلوث والسماح للوسط بالتصلب لمدة ساعة واحدة ، في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، ضع غطاءا على الأطباق وأغلق الأغطية على الجانبين. قم بإعداد سدادات صغيرة لغشاء البارافين لتغطية فتحات الأطباق عن طريق لف قطع من فيلم البارافين إلى لفات بسمك نقطة صفر بسمك سنتيمترين.

ثم قم بتقطيعها إلى شرائح صفرية خمسة سنتيمترات. قم بقطع فتحتين صغيرتين في الحاجز لتناسب بشكل مريح تركيبات الحاجز الشائكة. تناسب أغطية زجاجات مفتوحة بأربعة نقاط خمسة سنتيمترات مع نقطة صفر ثلاثة بسمك سنتيمترين من السيلوكون.

قم بتوصيل الأنبوب PVC الصغير بكلا المنفذين اللذين يخرجان من الزجاجة وبواحد فقط من المداخل التي تدخل الزجاجة. بعد ذلك ، قم بتوصيل أنبوب زجاجي بمخرج كل زجاجة ثقافة YPD ، باستخدام أنابيب صغيرة. املأ الأنبوب بالألياف الزجاجية.

والأتوكلاف قبل الاستخدام. لف الأغطية والأنابيب المجهزة بورق الألمنيوم. وقم بالتعقيم لمدة 25 دقيقة عند 120 درجة مئوية وضغط بار واحد.

اغمس رأس ماصة معقمة سعة 100 ميكرولتر في إحدى مستعمرات الخميرة من صفيحة YPD Agar وقم بإسقاطها في زجاجة YPD السائلة المتوسطة المعقمة المعقومة. قم بتغطية هذه الخميرة وزجاجة YPD السائلة المتوسطة ، بالإضافة إلى زجاجة تحكم متوسطة YPD ، بدون خميرة ، مع أغطية معقمة ، مثبتة داخل مخرج. لمنع تلوث وسط YPD بالكائنات الحية الدقيقة ، قم بتوصيل الأنبوب الصغير بمرشح حقنة معقمة بأربعة خمسة ميكرومتر من نقطة الصفر ، مع دفع بلاستيكي على موصل أنبوب الحاجز ، باتجاه الفلتر.

وبرغي على موصل الحاجز البلاستيكي يترك الفلتر. ثم قم بتوصيل الأنبوب بمدخل زجاجة ثقافة YPD. ضع الزجاجات على ألواح مغناطيسية منفصلة.

وحرك المحلول عند 100 دورة في الدقيقة ، في درجة حرارة الغرفة ، لمدة 24 ساعة قبل بدء التجربة. قم بتوصيل مداخل كلتا الزجاجتين بأنبوب متصل بالهواء المضغوط. تأكد من توصيل مخرج زجاجة الخميرة التجريبية بأنبوب ينفث رائحة الخميرة خارج الغرفة التجريبية ، لمنع التداخل مع التجربة.

قم بتوصيل الأنابيب البلاستيكية بجانب مخرج الأنبوب الزجاجي ، وقم بتوجيهها نحو الفتحات السفلية لصندوق التجربة. باستخدام مقسم على شكل حرف T ، بقطر خارجي أكبر من أو يساوي نقطة الصفر خمسة سنتيمترات ، وقطع قصيرة من الأنابيب البلاستيكية الصغيرة ، قم بتوصيل ماصتين مصليين بكل من المنفذين على كلا الجانبين. ألصق الماصات بشكل مسطح على ورقة بيضاء أسفل الكاميرات ، في الصندوق الفولاذي.

استخدم ماصة الفم لوضع أنثى تجريبية واحدة في طبق بتري صغير عند ZT ستة. واسمح للذبابة بالتأقلم مع ساحة التزاوج لمدة ساعة واحدة. بعد ساعة واحدة ، في ZT سبعة ، انقل ذكرا من النوع البري إلى طبق بتري.

وانقر فوق بدء المراقبة لمدة 24 ساعة. بالنسبة لتجربة مضخة الهواء ، ضع الطبق بطريقة بحيث يتم توصيل مخرج الماصة بفتحة مدخل ساحة التزاوج. لتحليل سلوك التزاوج للزوجين ، حدد ملف فتح جميع الصور ، في برنامج عرض الصور.

وتصفح صفحتها بترتيب زمني. اكتب التاريخ ورقم التجربة ورقم الطبق ووقت البدء في جدول بيانات داخل الصف نفسه. خذ وقت بدء كل ساحة من لحظة وضعها تحت كاميرا الويب.

سجل الطابع الزمني من الصور. حدد وقت بدء كل جماع في نفس الصف ، في ورقة الانتشار. احسب التزاوج على أنه حادث ، عندما يركب الذكر الأنثى ويظل الزوجان قرطاسية معتدلة وفي نفس الموقف ، لمدة خمسة إطارات متتالية على الأقل.

يظهر تحليل هواء الخميرة ، المنفصل عن وسط الطعام ، أن الزوجين المتزاوجين لا يستجيبان لروائح الخميرة عندما لا توجد خميرة في وسط الطعام. لكنهم يزيدون من وتيرة التزاوج في هواء الخميرة عندما تضاف الخميرة أيضا إلى وسط الطعام. يزداد تقبل الإناث عند وجود حمض الخليك.

ولكن فقط عندما يكون البيبتون موجودا في الوسط ، مما يدل على أن الذباب يحتاج إلى استشعار الأحماض الأمينية وحمض الخليك في وقت واحد ، لزيادة وتيرة التزاوج. بمجرد إتقانها ، يمكن إعداد هذه التقنية في ست ساعات. ويمكن إجراء التحليل السلوكي في خمس ساعات ، إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.