Name: الجاذبة الإرواء كطريقة لتصور الأوعية الدموية في أمبيستوما ميكسيكانوم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: تعلم تصور الأوعية الدموية في Ambystoma mexicanum باستخدام تقنية صبغ DiI الشحمية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة إعادة التوعية في الأنسجة المتجددة لفهم قدرات التجدد الحيوي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا البحث من قبل مستشفى بريغهام والمرأة ومارس دايمس. ويود المؤلفون أن يشكروا جميع أعضاء مختبر وايتيد على دعمهم ومشورتهم.

تم إجراء جميع التجارب أكسيولوتل وفقا ل بريغهام ومستشفى المرأة (بو) المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام اللجنة. 1. إعداد تجربة الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أكسولوتل الكبار في حاوية بلاستيكية مليئة 0.1٪ تريكين حل (MS222) لمدة 15-20 دقيقة أو حتى تخدير تماما. تأكد من أن الحاوية مليئة ما يكفي من محلول تريكين بحيث يتم المغمورة تماما أكسولوتل. ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية رعاية الحيوان المؤسسية. في بو، يعتبر أكسولوتل تخدير كامل عندما يفشل اختبار قرصة القدم، وهذا يعني أنه لا يوجد حركة الانعكاسية عندما يتم تقلص القدم بلطف. الحذر: على الرغم من تريكين هو مخدر تستخدم خصيصا للكائنات المائية، وينبغي تجنب ملامسة الجلد مباشرة مع الحل تريكين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محطة نضح أكسولوتل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الوسادة ماصة على شقة، سطح مستو مع الجانب ماص مواجهة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حفرة في إطار رغوة البوليسترين الذي هو الحجم المناسب والشكل ل أكسولوتل تخدير لوضعها في موقف ضعيف. وضع الإطار على وسادة ماصة. ملاحظة: يمكن وضع بعض المناشف الورقية الإضافية مباشرة تحت الإطار لمزيد من الامتصاصية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل مضخة تحوي مع أنابيب نضح. تعيين المضخة إلى معدل تدفق 0.7 مل / دقيقة، وتتدفق في اتجاه عقارب الساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني 0.7x و 5٪ الجلوكوز في خليط 1: 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج 10 مل من محلول مخفف مع 200 ميكرولتر من حل الأسهم ديي في أنبوب مخروطي 50 مل. كاب ومزيج من انعكاس. تغطية هذا الأنبوب مع رقائق الألومنيوم ورقة لحماية حل العمل من التعرض للضوء. ملاحظة: يجب تغيير الأحجام وفقا لحجم أكسولوتل نسبيا. هذه القيم هي حوالي 15 سم أكسولوتل (طول الذيل إلى الذيل). انيمالس من هذا الحجم قد لا تكون قد وصلت إلى النضج الجنسي الكامل حتى الجنس الحيوان قد لا يتم تحديدها في هذا الوقت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء أنبوب مخروطي 50 مل مع برنامج تلفزيوني 0.7x. ملاحظة: سيتم استخدام برنامج تلفزيوني لتشكيل الحلقة و إكسولانغيناتيون أكسولوتل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق إبرة فراشة 27 قياس إلى نهاية خروج أنابيب نضح. أضعاف أجنحة فراشة على بعضها البعض ومكان في موقف المشبك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع نهاية حرة من أنابيب نضح في أنبوب مخروطي 50 مل مليئة برنامج تلفزيوني 0.7X وتشغيل مضخة نضح حتى يتم تعبئة كامل أنابيب مع الحل. وقفة المضخة مرة واحدة يتم ملء أنابيب بأكملها مع برنامج تلفزيوني. ملاحظة: تأكد من أنابيب خالية من فقاعات الهواء في جميع الأوقات، وهذه سوف تسبب صمة الهواء في أكسولوتل ومنع نضح الكامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع منشفة ورقية في العفن على شكل أكسولوتل في إطار رغوة البوليسترين. باستخدام ماصة نقل، نقع منشفة مع الحل تريكين. ملاحظة: قطع مربع صغير في منتصف سحب الورقإل للسماح لتصريف السوائل أثناء إجراء التروية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مستحلب أكسولوتل مستلق على منشفة ورقية داخل إطار رغوة البوليسترين. </li></ol></li></ol> 2. فتح الصدر أكسولوتل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط الجراحية لقرصة الجلد على طول المحور المركزي للصدر أكسولوتل، فقط تحت خط الكتفين. اسحب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مشرط لجعل شق صغير حيث تم سحب الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة التصحيح مربع من الجلد على صدره من أجل الكشف عن اثنين من لوحات الغضروف. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الجلد لفتح نافذة على التجويف الصدري كبيرة بما فيه الكفاية لرؤية بوضوح القلب وحوالي 5 ملم من الشريان الأورطي المتفرعة من القلب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمزيق الأنسجة الضامة بعناية باستخدام ملقط أو مقص مغلقة من أجل تجنب قطع أي الأوعية الدموية الرئيسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع كل لوحة الغضروف بشكل فردي باستخدام ملقط ومكوس لهم ثإيث مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قرصة بعناية التامور مع ملقط، سحب ما يصل، وثقب ذلك باستخدام مقص جراحي. وينبغي أن يكون هذا شق عميق فقط بما فيه الكفاية لثقب التامور رقيقة جدا، وينبغي أن تكون كبيرة بما يكفي للسماح لإزالة التامور. الحرص على عدم قطع القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بدقة التامور لفضح القلب والشريان الأبهر. ملاحظة: باستخدام ماصة نقل، دافق بشكل دوري تجويف الصدر والخياشيم مع حل تريكين للحفاظ على المنطقة واضحة والحفاظ على تخدير أكسولوتل. </li></ol> 3. إرواء أكسولوتل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع موقف المشبك مع إبرة فراشة تحميل بجانب إطار رغوة البوليسترين، بحيث يمكن بسهولة التلاعب في ذراع المشبك لإدراج الإبرة في الشريان الأبهر أكسولوتل. نقطة طرف الإبرة نحو الجانب منقاري من الحيوان خلال الإدراج والحفاظ على موازية الإبرة إلى الشريان الأبهر لتجنب ثقب ذلك من خلال المرجعبوسيت الجانب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة تحوي. وينبغي أن يستمر برنامج تلفزيوني 0.7X في التدفق من خلال الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج الإبرة في الشريان الأبهر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرك الملقط تحت القوس الأبهر وسحب ما يصل قليلا للسماح لسهولة الوصول إليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مناورة مجموعة إبرة المشبك مثل أن الإبرة يمتد على طول الشريان الأبهر، لافتا نحو الرأس. إدراج الإبرة أثناء استخدام ملقط للدعم وراء الشريان الأبهر. ملاحظة: يجب إدراج إبرة عميقة بما فيه الكفاية في الشريان الأورطي للتأكد من أنها لن تنزلق خلال نضح. قد يكون هذا حوالي 5 ملم ل 15 سم أكسولوتل. تأكد من أن الإبرة هو تماما في خط مع الشريان الأبهر لتجنب ثقب كامل من السفينة. من خلال-- من خلال-- ثقب من خلال يمكن أن يسبب نزيف هائل ونقصان معدلات نجاح نضح. يمكن تأكيد الإدراج الناجح عن طريق توسيع مرئية من أتريا القلب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بسرعة تمزيق أتريوم واحد مع الخيال العلميسسورس والسماح الدم لاستنزاف. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دافق مع حل تريكين لمنع تراكم الدم وتشكل الجلطة في تجويف الصدر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي أكسولوتل مع حوالي 20-30 مل من برنامج تلفزيوني. الحيوان يجب أن تتغير من الضوء الوردي في اللون إلى الأبيض في نضح ناجحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقفة مضخة تحوي ونقل نهاية خالية من الأنابيب في أنبوب 15 مل من حل الجاذبة. إعادة تشغيل المضخة، ورعاية لتجنب خلق أي فقاعات الهواء في الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي أكسولوتل مع الأسهم العمل بأكمله من الجاذبة. ملاحظة: في نضح ناجحة، و أكسولوتل مع تغيير اللون إلى الوردي مشرق من الجاذبة. وهذا سيكون أكثر وضوحا في الخياشيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقفة مضخة بعد نضح مع الجاذبة كاملة ووضع نهاية حرة من الأنابيب إلى 4٪ بارافورمالدهيد (بفا) حل لإصلاح الأنسجة. إعادة تشغيل مضخة وإرواء لا يقل عن 10 مل من بفا. الحذر: بفا هو سامة ويجب التعامل معها و ديسبوسيد من المناسب. يجب ارتداء القفازات ونظارات السلامة، ويجب أن تكون الحلول داخل غطاء الدخان. إرواء من أكسولوتل مع بفا لإصلاح نتائج الأنسجة في وفاة الحيوان. </li></ol> 4. إنهاء الإرواء والتصور التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف مضخة تحوي وإزالة الإبرة من الشريان الأبهر أكسولوتل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أكسولوتل على لوحة من البلاستيك. ملاحظة: استخدام نصف طبق بتري كبير يعمل بشكل جيد ويسمح لصب كمية صغيرة من تريكين أو برنامج تلفزيوني على أكسولوتل للحفاظ على بشرتها الرطب وتحسين جودة التصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخلص من جميع المواد المستخدمة في صناديق النفايات المناسبة. تنظيف الأدوات الجراحية مع الايثانول 70٪، وتطهير باستخدام معقم الزجاج حبة بين الحيوانات، وتعقيم عن طريق التعقيم بعد الإجراء. تدفق أنابيب مع الحل بس ومن ثم استنزاف، تجف تماما، وتخزين لمزيد من الاستخدام. </li></ol> 5. التصور بيرفوسد أكسولوتل <oل&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أكسولوتل تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف الأضواء كما التصور من الأوعية الملوثة الجاذبة هو عائق من الضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأخضر مضان مرشح تصفية الانبعاثات (على سبيل المثال إت-CY3) مع المجهر متحد البؤر لتصور الأوعية الدموية من أكسولوتل. استخدام ضوء الإثارة من الطول الموجي 545 نانومتر. ملاحظة: للحصول على صورة ذات جودة عالية، يمكن استخدام المعلمات التالية: التعرض ل 1.1 ثانية، وكسب 1X، والتشبع من 1.0، والتكبير 2X. </li></ol>

<ol><li>Giuvarasteanu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+electron+microscopy+of+vascular+corrosion+casts+-+standard+method+for+studying+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Rom+J+Morphol+Embryo%22%5BJournal%5D)">Scanning electron microscopy of vascular corrosion casts - standard method for studying microvessels.</a> Rom J Morphol Embryo. 48 (3), 257-261 (2007).</li>
<li>Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+perfusion+of+carbon+black+ink+allows+reliable+visualization+of+cerebral+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravascular perfusion of carbon black ink allows reliable visualization of cerebral vessels.</a> J Vis Exp. (71), e4374(2013).</li>
<li>Minnich, B., Lametschwandtner, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23328838"> Scanning electron microscopy and vascular corrosion casting for the characterization of microvascular networks in human and animal tissues.</a> Microscopy: Science, Technology, Applications, and Education. 1, 29-39 (2010).</li>
<li>Honig, M., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.formatex.info/microscopy4/29-39.pdf"> DiI and DiO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends Neurosci. 13, 333-335 (1989).</li>
<li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+carbocyanine+dyes+allow+living+neurons+of+identified+origin+to+be+studied+in+long-term+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent carbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in long-term cultures.</a> J Cell Biol. 103 (1), 171-187 (1986).</li>
<li>Schwartz, M., Agranoff, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outgrowth+and+maintenance+of+neurites+from+cultured+goldfish+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Outgrowth and maintenance of neurites from cultured goldfish retinal ganglion cells.</a> Brain Res. 206 (2), 331-343 (1981).</li>
<li>Li, Y., Song, Y., Zhao, L., Gaidosh, G., Laties, A. M., Wen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+labeling+and+visualization+of+blood+vessels+with+lipophilic+carbocyanine+dye+DiI%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Direct labeling and visualization of blood vessels with lipophilic carbocyanine dye DiI.</a> Nat Protoc. 3 (11), 1703-1708 (2008).</li>
<li>Kuo, T. H., Kowalko, J. E., DiTommaso, T., Nyambi, M., Montoro, D. T., Essner, J. J., Whited, J. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4895330/">Evidence of TALEN-mediated gene editing of an endogenous locus in axolotl.</a> Regeneration. 2 (1), 37-43 (2015).</li>
<li>Brockes, J. P., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appendage+Regeneration+in+Adult+Vertebrates+and+Implications+for+Regenerative+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Appendage Regeneration in Adult Vertebrates and Implications for Regenerative Medicine.</a> Science. 310 (5756), 1919-1923 (2005).</li>
<li>Smith, A. R., Wolpert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerves+and+angiogenesis+in+amphibian+limb+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nerves and angiogenesis in amphibian limb regeneration.</a> Nature. 257 (5523), 224-225 (1975).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

التصور من الأوعية الدموية من أكسولوتل يمكن أن يتحقق بنجاح عن طريق نضح مع صبغ كاربوسيانين محبة للدهون، الجاذبة. في هذه الدراسة، ونحن تصف بروتوكول رواية لنضح من أكسولوتل مع الجاذبة باستخدام مضخة تحوي. وتبين لنا أيضا التصور اللاحق من الأوعية الدموية أكسولوتل باستخدام المجهر متحد البؤر الفلورسنت. وكان هذا البروتوكول التكيف من القوارض بروتوكول نضح الجاذب ينظر في لي وآخرون. 7 ، ولكن الاختلافات الرئيسية بين القوارض و أكسولوتل يتطلب تنقيح البروتوكول لتناسب...

تصور الأوعية الدموية يلعب دورا حيويا في فهم بنية ووظيفة الكائنات الحية عبر العديد من الأنواع. ابتداء من القرن ال 16 مع ليوناردو دا فينشي، وقد تم دراسة النماذج والرسوم البيانية من الدورة الدموية 1 . باستخدام الشمع والقوالب المطاطية، تم بيرفوسد الأنسجة لخلق نماذج ثلاثية الأبعاد من الأوعية الدموية، مما سمح لدراسة أورغانوجينيسيس والمرضية 1 ، 2 . تم تلوين الراتنجات والشمع مع الأصباغ مثل الهند الحبر أو القرمزي الأحمر للسماح لتصورها سهلة 1 ، 2 . ومع ذلك، تسببت هذه التقنيات العديد من القضايا لأن اللزوجة العالية منعت نضح كامل من الأنسجة من الفائدة 1 . كما أصبح الحقل أكثر تطورا، واستخدام المجاهر متحد البؤر والإلكترون دخلت حيز اللعب، ونقل تيشنيق نضح<html> إيس بعيدا عن قوالب الزهر نحو بيرفوسيونس السائل من الأوعية الدموية، وبعضها سمح للنضح والتصوير من الأوعية الدموية دون تدمير الأنسجة الأولية 3 . دي، صبغ كاربوسيانين الفلورسنت، هو واحد من مثل وصمة عار الذي يسمح لنضح الحيوانات دون الأضرار التي لحقت أنسجة الأوعية الدموية. الأصباغ كاربوسيانين هي الأصباغ محبة للدهون التي تدمج في أغشية الخلايا عند الاتصال. هذه الأصباغ تسمح لتلطيخ سهلة وحظية من الخلايا البطانية الوعائية، والتي يمكن بعد ذلك أن ينظر إليها تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت. تتحرك الجاذبة عن طريق الانتشار الجانبي في غشاء الدهون من الخلايا، كما هو مبين في وضع العلامات وتعقب الخلايا العصبية 4 . كيميائيا، وسلاسل ألكيل اثنين من الجاذبة تعطي الصبغة تقارب عالية لأغشية الخلايا، في حين أن اثنين من حلقات مترافق من فلوريوكروم الذي هو المسؤول عن انبعاث الطول الموجي الأحمر عندما متحمس من الفلورسنت الضوء الأخضر مرشحات&gt; 4. وقد استخدمت الجاذبة في العديد من القدرات، بما في ذلك وضع العلامات الناجحة للغشاء البلازما وعلى حد سواء أنتيروغريد والوراء إلى الوراء في الخلايا العصبية 5 ، 6 . وقد استخدمت سابقا الجاذبة في بروتوكولات نضح في حين تصور الأوعية الدموية من الفئران 7 . أكسولوتلس ( أمبيستوما ميكسيكانوم ) هي السلمندرات التي تعيش حصرا في البحيرات المالحة بالقرب من مكسيكو سيتي، المكسيك. وقد أصبحت هذه الحيوانات نموذجا هاما لفهم عمليات التجدد لأنها يمكن أن تجدد أطرافه الكاملة والذيل (بما في ذلك الحبل العصبي)، وأجزاء من القلب والأعضاء الداخلية الأخرى، وأجزاء من العين والبالغين 8 ، 9 . بالإضافة إلى ذلك، مع التطبيق الأخير من الأدوات الجينية في أكسولوتلس، نظرة غير مسبوقة في الجزيئات والخلايا التي تقود هذه العمليات من الممكن الآن 8 . نجاح ريجينالتموينية من طرف كامل يتطلب عملية إعادة التوعي واسعة النطاق، والتي قد تلعب دورا هاما في تجديد بعد مجرد الوظائف التقليدية للأوعية الدموية في توفير الأكسجين والمواد المغذية. فهم إعادة التوعي في سياق تجديد الأنسجة أمر حتمي. وقد سبق تصور الأوعية الدموية أكسولوتل باستخدام الهند الحبر، وبينما كانت النتائج مثيرة للاهتمام، لم يتم إعادة النظر في هذه العملية في العقود اللاحقة 10 . سعينا إلى تكييف بروتوكول نضح الجاذبة وضعت لاستخدامها في الثدييات للسماح لنضح كاملة والتصور من الأوعية الدموية أكسولوتل 7 . يصف هذا البروتوكول الخطوات التي اتخذت لإرواء بنجاح وبعد ذلك تصور الدورة الدموية أكسولوتل مع تقنية تلطيخ الجاذبة. هذا الإجراء سوف يسمح لتصور دقيق من الأوعية الدموية براءات الاختراع في الأنسجة التماثل، وكذلك في تجديد الأنسجة، ويوفر طريقة جديدة ل فيسواليزاتيون وتحليل عملية إعادة التوعي في أكسولوتل.

<table><tbody><tr><td>المضخة التمعجية&nbsp;</td><td>مارشال العلمي&nbsp;</td><td>RD-RP1</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب التروية</td><td>Excelon Lab & 436901705 الأنابيب المفرغة</td><td></td><td>مقاس S1A</td></tr><tr><td>27g إبرة فراشة</td><td>EXELint المنتجات الطبية</td><td>26709</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>AmericanBio</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>AmericanBio</td><td>7747-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&nbsp;</td><td>AmericanBio</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>AmericanBio</td><td>10049-21-5</td><td></td></tr><tr><td>الماء</td><td></td><td></td><td></td>المقطر</tr><tr><td>HCl</td><td>AmericanBio</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>ThermoFischer</td><td>A2494001</td><td></td></tr><tr><td>1،1 & prime ؛ -Dioctadecyl-3،3،3 &prime ؛ ، 3 &prime ؛ - رباعي ميثيل إندوكاربوسيانين بيركلورات</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>468495</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول (100٪ حجم / حجم)</td> <td>سيجما ألدريتش</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>الجلوس الجراحية &nbsp ؛</td><td>Medline</td><td>MDG0748741</td><td></td></tr><tr><td>إطار رغوة</td><td></td><td></td> البوليسترين <td>أي مربع رغوة البوليسترين مع قنافذ البحر على شكل قنفذ &nbsp; قطع</td></tr><tr><td>مقص جراحي</td><td>Medline</td><td>DYND04025</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel&nbsp;</td><td>Medline</td><td>MDS15210</td><td></td></tr><tr><td>الوسادة السفلية الماصة</td><td>Avacare Medical</td><td>PKUFSx</td><td></td></tr><tr><td>المناشف الورقية ماصة</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>نقل قياسية يمكن التخلص</td><td>منها Fisherbrand</td><td>50216954</td><td></td></tr><tr><td>حامل</td><td>المشبك Adafruit</td><td>291</td><td></td></tr><tr><td>إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سولفونات</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>E10521</td><td>تريكايين مسحوق</td></tr><tr><td>قنافذ البحر</td><td></td><td></td><td></td>البالغة</tr><tr><td>MgSO4</td><td>AmericanBio</td><td>10034-99-8</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>C1016-100G</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr> خزانات <tr><td>بلاستيكية</td><td></td><td></td><td>أحجام متفاوتة مناسبة لقنافذ</td></tr> البحر<tr><td>بارافورمالدهايد</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>مجهر إبسولوتل</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>لايكا</td><td>لايكا</td> فلتر الفلورسنت لايكا <td>M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>ET-CY3</td><td>لايكا</td><td>M205FA / M165FC</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

الجاذبة الإرواء كطريقة لتصور الأوعية الدموية في<em&gt; أمبيستوما ميكسيكانوم</em

DiI Perfusion as a Method for Vascular Visualization in Ambystoma mexicanum

وقد استخدمت تقنيات الإرواء لعدة قرون لتصور تداول الأنسجة. أكسولوتل (أمبيستوما ميكسيكانوم) هو نوع من السمندل الذي برز كنموذج أساسي لدراسات التجدد. لا يعرف إلا القليل عن كيفية إعادة التوعي يحدث في سياق التجدد في هذه الحيوانات. هنا نحن الإبلاغ عن طريقة بسيطة لتصور الأوعية الدموية في أكسولوتل عن طريق نضح من 1،1&#39;-ديوكتاديسي 3،3،3 &#39;، 3&#39;-تيتراميثيليندوكاربوسيانين البيركلورات (الجاذبة). الجاذبة هو صبغ كاربوسيانين محبة للدهون التي تدرج في غشاء البلازما من الخلايا البطانية على الفور. يتم الإرواء باستخدام مضخة تحوي بحيث يدخل الجاذبة الدورة الدموية من خلال الشريان الأبهر. خلال نضح، وتدفق صبغ من خلال الأوعية الدموية أكسولوتل ودمجها في طبقة ثنائية الدهون من الخلايا البطانية الوعائية عند الاتصال. الإجراء نضح يستغرق حوالي ساعة واحدة لمدة 8 بوصة أكسولوتل. مباشرة بعد نضح وايث داي، و أكسولوتل يمكن تصور مع المجهر متحد البؤر الفلورسنت. ينبعث مؤشر الجاذب الضوئي الضوء في نطاق أحمر برتقالي عندما متحمس مع مرشح الفلورسنت الأخضر. هذا الإجراء نضح الجاذبة يمكن استخدامها لتصور بنية الأوعية الدموية من أكسولوتلس أو لإظهار أنماط إعادة التوعي في تجديد الأنسجة.

<html> مع تلطيخ الجاذبة، والأوعية الدموية من أكسولوتل يمكن تصور بسهولة. الأوعية الدموية من الحيوانات بيرفوسد مع صبغ محبة للدهون هي مرئية على الفور تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت. الشكل 1-1-1.5 هو تمثيل تخطيطي لبروتوكول نضح. بعد نضح مع صبغ وردي مشرق، سوف بيرفوسد بيرفوسد بنجاح تظهر الوردي. باستخدام مرشح الفلورسنت الأخضر على المجهر متحد البؤر سوف تظهر الانبعاثات الحمراء للشبكة الأوعية الدموية. يحدث تلطيخ ...

باستخدام محبة للدهون 1،1&#39;- ديوكتاديسي -3،3،3 &#39;، 3&#39;-تيتراميثيليندوكاربوسيانين البركلورات (الجاذبة) تقنية تلطيخ، أمبيستوما ميكسيكانوم يمكن أن يخضع نضح الأوعية الدموية للسماح لتصور سهلة من الأوعية الدموية.

Perfusion techniques have been used for centuries to visualize the circulation of tissues. Axolotl (Ambystoma mexicanum) is a species of salamander that ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصوير الأوعية الدموية في حيوان الأكسولوتل. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال الطب التجديدي حول تعقيدات إعادة التوعي للأنسجة المتجددة في الأكسولوتل. الميزة الرئيسية لتقنية تصوير الأوعية الدموية هذه هي إمكانية تصوير جميع الأوعية الدموية في الحيوان بسهولة باستخدام مجهر فلوري قياسي.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة متعمقة في تجديد أطراف سمندل المكسيك (axolotl)، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً على أنسجة أخرى، مثل الذيل أو القلب أو العينين أو الخياشيم أو أعضاء أخرى. قبل فتح صدر سمندل المكسيك، تأكد أولاً من مستوى التخدير المناسب عن طريق قرص الإصبع. بعد ذلك، استخدم ملقطاً جراحياً لقرص الجلد على طول المحور المركزي للصدر، أسفل خط الكتفين مباشرةً.باستخدام المشرط، قم بإجراء شق حيث يتم سحب الجلد إلى الأعلى، ثم أزل رقعة مربعة من الجلد فوق الصدر للكشف عن صفيحتين غضروفيتين. بعد ذلك، افتح نافذة فوق التجويف الصدري وقم بتمزيق النسيج الضام بعناية دون قطع أي أوعية دموية رئيسية. استخدم الملاقط لرفع كل صفيحة غضروفية على حدة، ثم استأصل كل صفيحة باستخدام مقص جراحي.أمسك غشاء التأمور المكشوف بعناية باستخدام الملقط. اسحب النسيج للأعلى واثقبه بالمقص الجراحي، بعمق كافٍ لإزالة التأمور دون إصابة القلب. بعد ذلك، قم بإزالة التأمور برفق للكشف عن القلب والشريان الأورطي، لرؤية القلب بوضوح عند حوالي خمسة مليمترات من الشريان الأورطي، المتفرع من القلب.لتروية حيوان سمندل المكسيك (axolotl)، ضع حامل مشبك مع إبرة فراشة جاهزة بجانب إطار من رغوة البوليسترين، بحيث يمكن تحريك ذراع المشبك بسهولة لإدخال الإبرة. قم بتشغيل مضخة تمعجية لضخ 0.7x PBS عبر أنابيب المضخة ووجه طرف الإبرة نحو الجانب المنقاري. مرر الملقط أسفل القوس الأبهري واسحبه للأعلى قليلاً.بعد ذلك، قم بتحريك مجموعة مشبك الإبرة بحيث تمتد الإبرة على طول الشريان الأبهر باتجاه رأس الحيوان، وأدخل الإبرة لمسافة خمسة مليمترات تقريبًا في الشريان الأبهر، مع إبقاء الملقط خلف الشريان الأبهر للدعم. يمكن تأكيد نجاح الإدخال من خلال ملاحظة تضخم في أذيني القلب. قم بتمزيق أحد الأذينين بسرعة للسماح بتصريف الدم.بعد ذلك، قم بإجراء تروية للسمندل المكسيكي (axolotl) باستخدام حوالي 20 إلى 30 ملي لتر من PBS. بعد إتمام التروية بنجاح، يجب أن يتغير لون الحيوان من الوردي الفاتح إلى الأبيض. عندما يتم تروية كل كمية PBS، أوقف المضخة التمعجية وانقل الطرف الحر للأنبوب إلى أنبوب سعة 15 ملي لتر يحتوي على محلول Dil.أعد تشغيل المضخة، مع الحرص على تجنب تكوين فقاعات في الأنابيب، وقم بتروية الحيوان بكامل مخزون Dil العامل. في عملية التروية الناجحة، سيتغير لون حيوان الأخلوتل إلى اللون الوردي الزاهي الذي سيكون أكثر وضوحاً في الخياشيم. وعند الانتهاء من تروية كل كمية Dil، أوقف المضخة مؤقتاً وضع الطرف الحر من الأنابيب في محلول paraformaldehyde بتركيز 4%.بعد ذلك، أعد تشغيل المضخة وقم بتروية 10 milliliters على الأقل من المثبت. وعند الانتهاء من إعطاء كامل كمية الـ paraformaldehyde، أوقف المضخة وانزع الإبرة. انقل حيوان الـ axolotl إلى طبق بلاستيكي، ثم ضع الطبق على منصة مجهر فلوري.بعد ذلك، ومع إطفاء الأنوار، اختر مرشحًا يسمح باستثارة صبغة Dil، والتي تبعث ضوءًا برتقاليًا أحمر. بعد عملية تروية ناجحة، تظهر صبغة Dil كإشارة دخول حمراء في جميع أنسجة سمندل المكسيك (axolotl)، بما في ذلك الذيل والأطراف والخياشيم والعينين. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إكمالها في غضون ساعة واحدة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر توخي الحذر لتجنب تمزيق الأوعية الدموية الرئيسية أو القلب أثناء فتح التجويف الصدري، وإدخال الإبرة في خط مستقيم مع الأبهر لمنع حدوث ثقوب نافذة. وبعد اتباع هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى، مثل التحضيرات الهيكلية، للإجابة على أسئلة إضافية. وقد مهدت هذه التقنية، بعد تطويرها، الطريق للباحثين في المجال الطبي الحيوي لاستكشاف الأوعية الدموية في أنواع مختلفة.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء تروية قلبية لحيوان الأخلوتل باستخدام صبغة الكربوسيانين، Dil. لا تنسَ أن العمل بالإبر والبارافورمالدهيد يمكن أن يكون خطيراً للغاية، وأنه يجب دائماً اتخاذ الاحتياطات، مثل ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة، أثناء تنفيذ الإجراء.

dii-perfusion-as-method-for-vascular-visualization-ambystoma

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تتيح تقنية Landis المعدلة القياس المزدوج للتوصيل الهيدروليكي للأوعية الدقيقة الفردية في المساريق للفئران العادية والمعدل وراثيا تحت ظروف التحكم والاختبار باستخدام تقنيات التروية الدقيقة. يوفر طريقة ملائمة لتقييم الآليات التي تنظم نفاذية الأوعية الدقيقة والتبادل عبر الأوعية الدموية في ظل الظروف الفسيولوجية.

تروية دقيقة التقنية المعنية بالتحقيق في تنظيم Microvessel النفاذية في الفئران مساريق

يوضح هذا البروتوكول طريقة القائم على مضان لتصور الأوعية الدموية وتحديد مدى تعقيدها في القيطم الاستوائية . الأوعية الدموية يمكن تصويرها بعد دقائق من حقن صبغة الفلورسنت في قلب الضرب من الجنين بعد التلاعب الجيني و / أو الدوائية لدراسة التنمية القلب والأوعية الدموية في الجسم الحي .

التصور والتحليل الكمي من الأوعية الدموية الجنينية في<em&gt; زينوبوس تروبيكاليس</em

نقدم هنا البروتوكولات تخطيط صدى القلب للحصول على الصور ثنائية الأبعاد وثلاثية الأبعاد لقلب ينبض من السمندر أكسولوتل (ميكسيكانوم أمبيستوما)، أنواع نموذجية في إنعاش القلب. تسمح هذه الأساليب لتقييم وظيفة القلب بدقة عالية الزمانية المكانية الطولية.

تخطيط صدى القلب ثنائي الأبعاد وثلاثي الأبعاد في أكسولوتل (ميكسيكانوم أمبيستوما)

يصف هذا المقال بروتوكولا سريعا لوصف الاوعيه الدموية في الأسماك تيليست عن طريق التروية القلبية من المخفف في المثبت ، وذلك باستخدام الميداكا (اوريزيز لا تيبس) كنموذج والتركيز علي الدماغ والانسجه النخامية.

وضع العلامات علي الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية باستخدام Perfusion القلب مع المثبت

يوصف بروتوكول للضخ الموضعي للجسم السفلي للماوس ، بما في ذلك المثانة والبروستاتا والأعضاء الجنسية والعظام والعضلات وبشرة القدم.

إنشاء الدائرة المغلقة في الموقع perfusion من أعضاء البطن السفلي وأطراف هند في الفئران

يصف هذا البروتوكول نموذجا فريدا ذا صلة سريرية لأمراض الشرايين الطرفية يجمع بين التخثر الكهربائي للشريان الفخذي والوريد مع إعطاء مثبط سينثاز أكسيد النيتريك للحث على الغرغرينا الخلفية في فئران FVB. ثم يتم استخدام التروية DiI داخل القلب للتصوير عالي الدقة ثلاثي الأبعاد للأوعية الدموية لوسادة القدم.

تصوير ثلاثي الأبعاد عالي الدقة للأوعية الدموية لوسادة القدم في نموذج غرغرينا Murine Hindlimb

يظهر هنا بروتوكول فعال لنضح الدم السريع لإعداد عينات الأنسجة من الضفادع الأفريقية ذات المخالب لدراسات النسخ والبروتينات.

التروية الدموية السريعة الفعالة في Xenopus

يقدم هذا البروتوكول نموذجا ذا صلة من الناحية الفسيولوجية للورم على الرقاقة لإجراء أبحاث السرطان البشري الأساسية والتحويلية عالية الإنتاجية ، وتطوير فحص الأدوية ، ونمذجة الأمراض ، ومناهج الطب الشخصي مع وصف لإجراءات التحميل والصيانة والتقييم.

إنشاء نموذج فسيولوجي للأورام الدقيقة الوعائية البشرية لأبحاث السرطان

يقدم هذا البروتوكول طريقة سريعة للتصوير الكمي للأوعية الدموية ثلاثية الأبعاد باستخدام الفحص المجهري الفلوري للصفائح الضوئية. يتم إثبات فعالية الطريقة باستخدام نظام الشريان المقوس البلعومي لنموذج جنين الفرخ ، مع تحديد القوى الديناميكية الدموية عبر ديناميكيات السوائل الحسابية.

تصوير سريع عالي الدقة لأوعية الصغيرة للدراسات الكمية

يحتوي هذا البروتوكول على وصف شامل لنهج خطوة بخطوة لنموذج فأر نافذة جمجمة مزمنة وميكروفوعية وعائية محسن للتصوير بمجهر ثنائي الفوتون في الجسم الحي باستخدام مجهر بوليسترين فلوري.

نموذج الفأر للانسداد الميكروأوعية الدموية للمجهر ثنائي الفوتون في الجسم الحي باستخدام مجهر البوليسترين الفلورية

تعلم تصور الأوعية الدموية في Ambystoma mexicanum باستخدام تقنية صبغ DiI الشحمية. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة إعادة التوعية في الأنسجة المتجددة لفهم قدرات التجدد الحيوي.

الجاذبة الإرواء كطريقة لتصور الأوعية الدموية في

استكشف المزيد من الفيديوهات