الجاذبة الإرواء كطريقة لتصور الأوعية الدموية في أمبيستوما ميكسيكانوم

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصور الأوعية الدموية في قنافذ البحر. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الطب التجديدي حول تعقيدات إعادة التوعي للأنسجة المتجددة في قنافذ البحر. الميزة الرئيسية لتقنية تصور الأوعية الدموية هذه هي أنه يمكن تصوير جميع الأوعية الدموية في بسهولة على مجهر فلوري قياسي.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لتجديد أطراف قنافذ البحر ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على الأنسجة الأخرى ، مثل الذيل أو القلب أو العينين أو الخياشيم أو الأعضاء الأخرى. قبل فتح صدر قنافذ البحر ، تأكد أولا من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم. بعد ذلك ، استخدم الملقط الجراحي لقرص الجلد على طول المحور المركزي للصدر ، أسفل خط الكتفين مباشرة.

باستخدام مشرط ، قم بعمل شق حيث يتم سحب الجلد لأعلى وإزالة رقعة مربعة من الجلد فوق الصدر للكشف عن صفيحتين غضروفيتين. بعد ذلك ، افتح نافذة فوق التجويف الصدري وقم بتمزيق النسيج الضام بعناية دون قطع أي أوعية دموية رئيسية. استخدم الملقط لرفع كل صفيحة غضروفية على حدة ، واستئصال كل لوحة بمقص جراحي.

اضغط بعناية على التامور المكشوف بالملقط. سحب الأنسجة لأعلى وثقبها بالمقص الجراحي ، بعمق كاف لإزالة التامور دون إصابة القلب. بعد ذلك ، قم بإزالة التامور برفق لكشف القلب والشريان الأورطي ، لرؤية القلب بوضوح عند حوالي خمسة ملليمترات من الشريان الأورطي ، متفرعا من القلب.

لنشر قنافذ البحر ، ضع حامل مشبك بإبرة فراشة محملة بجوار إطار رغوة البوليسترين ، بحيث يمكن التلاعب بذراع المشبك بسهولة لإدخال الإبرة. قم بتشغيل مضخة تمعجية لمسح 0.7x PBS عبر أنبوب المضخة وتوجيه طرف الإبرة نحو الجانب المنقاري. حرك الملقط تحت قوس الأبهر واسحبه لأعلى قليلا.

بعد ذلك ، قم بمناورة تركيبة مشبك الإبرة ، بحيث تمتد الإبرة على طول الشريان الأورطي باتجاه رأس ، وأدخل الإبرة حوالي خمسة ملليمترات في الشريان الأورطي ، مع الحفاظ على الملقط خلف الشريان الأورطي للحصول على الدعم. يمكن تأكيد الإدخال الناجح من خلال تضخم مرئي في أذينين القلب. قم بتمزيق الأذين بسرعة واترك الدم يجف.

ثم قم ببث قنافذ البحر بحوالي 20 إلى 30 مل من PBS. بعد التروية الناجحة ، يجب أن يتغير من اللون الوردي الفاتح إلى الأبيض. عندما يتم دمج كل PBS ، أوقف المضخة التمعجية مؤقتا وحرك الطرف الحر للأنبوب ، إلى أنبوب سعة 15 مليلتر من محلول ديل.

أعد تشغيل المضخة ، مع الحرص على تجنب تكوين فقاعات في الأنبوب وزرع بمخزون Dil العامل بالكامل. في التروية الناجحة ، سيتغير قنافذ البحر إلى اللون الوردي الفاتح الذي سيكون أكثر وضوحا في الخياشيم. عندما يتم اختراق كل Dil ، أوقف المضخة مؤقتا وضع الطرف الحر للأنبوب في محلول بارافورمالدهايد بنسبة 4٪.

ثم أعد تشغيل المضخة وقم ببث ما لا يقل عن 10 مل من المثبت. عندما يتم إعطاء كل بارافورمالدهايد ، أوقف المضخة وقم بإزالة الإبرة. انقل قنافذ البحر إلى طبق بلاستيكي ، وضع الطبق على مرحلة المجهر الفلوري.

ثم ، مع إطفاء الأنوار ، حدد مرشحا يسمح بإثارة Dil ، الذي ينبعث منه ضوء برتقالي أحمر. بعد التروية الناجحة ، تظهر بقعة ديل كإشارة دخول حمراء في جميع أنسجة قنافذ البحر ، بما في ذلك الذيل والأطراف والخياشيم والعينين. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في ساعة واحدة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر الحرص على عدم تمزق الأوعية الدموية الرئيسية أو القلب أثناء فتح تجويف الصدر وإدخال الإبرة بما يتماشى مع الشريان الأورطي لمنع الثقوب ومن خلالها. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الاستعدادات الهيكلية للإجابة على أسئلة إضافية. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الطب الحيوي لاستكشاف الأوعية الدموية لأنواع مختلفة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء نضح قلبي من قنافذ البحر باستخدام صبغة الكربوسيانين ، Dil. لا تنس أن العمل بالإبر وبارافورمالدهيد يمكن أن يكون خطيرا للغاية وأن الاحتياطات ، مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة ، يجب دائما اتخاذ أثناء تنفيذ الإجراء.