آثار متمكنة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) على عملية الشفاء من الأوتار أخيل مقطعة للفئران: وصف منهجية

الهدف العام من هذا الإجراء هو مراقبة آثار حقنة واحدة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، أو PRP ، على المقاومة وعملية الشفاء من أوتار العرقوب التي تم تقطيعها جراحيا في نقاط زمنية مختلفة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة سريعة حول المجال العضلي الهيكلي حول آفات الأوتار. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الإجراءات الجراحية والميكانيكية الحيوية وإجراءات تقدم البلازما الغنية بالصفائح الدموية موحدة جيدا.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنيات إلى استخدام البلازما الغنية بالصفائح الدموية في البشر ، لأن هذه الأنواع من الآفات وعملية التئام الأوتار متشابهة بين الفئران والإنسان. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لإعداد البلازما الغنية بالصفائح الدموية لإصابات العضلات والعظام ، إلا أنه يمكن أيضا تطبيق تقنية الحقن هذه على أنظمة أخرى ، مثل أمراض القلب أو الجلد. يعد العرض المرئي للطريقة مهما للغاية ، لأن الخطوات الجراحية والميكانيكية الحيوية تتطلب قابلية استنساخ متسقة من أجل الحصول على أفضل النتائج.

ابدأ بوزن الفئران ووضع علامات على الأذن. بعد التأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم ، ضع قطرات الماء على قرنيات وقم بإزالة الشعر من الطرف الخلفي الأيسر. قم بتطهير الجلد المكشوف بتخفيف من 1 إلى 10 من محلول إيزو بيتادين وضع على وسادة تسخين 20 درجة مئوية تحت مجهر تشريح في وضع الاستلقاء الجانبي ، مع وضع الطرف الخلفي الأيسر في الوضع العلوي.

أمسك مخلب الطرف الخلفي الأيسر بالملقط وقم بعمل شق جلدي جانبي من 20 إلى 25 ملم حول وتر العرقوب. باستخدام مقص ناعم ، قم بتشريح اللفافة لفضح مركب وتر العرقوب وإزالة وتر أخمص. اقطع وتر العرقوب بشكل عرضي ، على بعد خمسة ملليمترات قريبة من إدخاله العقبي ، وقم بإزالة جزء طوله خمسة ملليمترات.

ثم استخدم خيوطا قابلة للامتصاص واستمر في الغرز لإغلاق اللفافة والجلد ، وضع الجرذ تحت مصدر حرارة مع المراقبة حتى الشفاء التام. أثناء تعافي المتلقية ، اجمع 20 مل من الدم الكامل من قلب فأر متبرع واحد لكل تجريبي في أنابيب فردية تحتوي على 3.2٪ سترات الصوديوم المخزنة. للحصول على البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، قم بالطرد المركزي للدم واستخدم ماصة نقل بلاستيكية لحصاد المرحلة العلوية المحتوية على البلازما الغنية بالصفائح الدموية بعناية في أنبوب بلاستيكي ثان.

حدد حجم البلازما الغنية بالصفائح الدموية التي تم جمعها وقياس عدد الصفائح الدموية على محلل أمراض الدم. جهاز الطرد المركزي للبلازما الغنية بالصفائح الدموية مرة أخرى ونقل المادة الطافية بعناية إلى أنبوب بلاستيكي جديد. يجب أن يكون الحجم المتبقي في أنبوب PRP حوالي 2/3 من الحجم المطلوب لتحقيق 2.5 مرة 10 إلى الصفائح الدموية السادسة لكل ميكرولتر.

بعد ذلك ، أعد تعليق حبيبات الصفائح الدموية برفق مع سحب العينات. قم بقياس عدد الصفائح الدموية لهذه البلازما الغنية بالصفائح الدموية المركزة ، مع إضافة الحجم المناسب من البلازما الفقيرة بالصفائح الدموية الذاتية للوصول إلى التركيز المستهدف حسب الضرورة. قم بتنشيط الصفائح الدموية ب 50 ميكرولتر من كلوريد الكالسيوم لكل مليلتر من البلازما الغنية بالصفائح الدموية لمدة ساعة تقريبا في درجة حرارة الغرفة.

ثم قم بتحميل الصفائح الدموية في حقنة سعة مليلتر واحد مزودة بإبرة قياس 21 وحقن 50 ميكرولترا من الصفائح الدموية مباشرة في موقع خياطة كل. عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة ، احلق الطرف الخلفي الأيسر لحيوان التجربة المخدر ، ووضع الجرذ تحت مجهر تشريح كما هو موضح للتو. أمسك المخلب بالأصابع ، وقم بعمل شق 10 ملم في موقع الجراحة لفضح العضلة ثلاثية الرؤوس.

لإزالة وتر العرقوب ، قم بقطع عظم العقبي بشكل عرضي ، من خمسة إلى 10 ملليمترات بعيدا عن ملحقه وتشريح قطعة من العضلة ثلاثية الرؤوس كبيرة بما يكفي لتناسب الفك بالتبريد. استخدم الملقط لوضع العينة على الفور في الفك العلوي للفك المبرد وإغلاق الجهاز. ضع الفك المبرد عموديا في آلة اختبار عالمية ، وقم بتثبيت عظم العقبي بين المشابك السفلية.

لحساب مساحة المقطع العرضي ، ضع الكاميرات بشكل عمودي على بعضها البعض. أضف النيتروجين السائل إلى كل من حوضي الفك العلوي لتجميد العضلات إلى مستوى من حيث الحجم أكثر صلابة من الوتر ، حتى لا تتشوه أثناء اختبار الشد. عندما تصل منطقة التجميد إلى حدود المشبك المعدني ، اضبط معدل إزاحة الماكينة بسرعة ثابتة تبلغ ملليمتر واحد في الثانية حتى التمزق ، وابدأ اختبار الشد ، باستخدام جهاز كمبيوتر لتسجيل قوة الشد القصوى بالنيوتن.

لحساب الاختلافات في مناطق المقطع العرضي لأوتار الشفاء ، قم بتطبيع قوة الشد النهائية إلى مساحة وحدة تمثل الإجهاد الميكانيكي الذي تعاني منه الأنسجة. ثم عندما يتمزق الوتر ، قم بتجميد عينات الأوتار الممزقة في النيتروجين السائل وتخزينها عند سالب 80 درجة مئوية حتى استخراج الحمض النووي الريبي وتحليل RTPCR. في هذه التجربة التمثيلية ، كانت هناك حاجة إلى قوة أكبر للحث على تمزق الأوتار في المجموعة المحقونة بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية مقارنة بالمجموعة الضابطة المعالجة بالمحلول الملحي في كل نقطة زمنية تم اختبارها ، مما يشير إلى عملية شفاء أكثر قوة أو خصائص ميكانيكية أفضل داخل المعالجة بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية.

على الرغم من أن مجموعة البلازما الغنية بالصفائح الدموية أظهرت تشتت داخل المجموعة أعلى من المجموعة المالحة ، فقد تم تحديد مساحة المقطع العرضي للأوتار لتكون أكبر في المجموعة المحقونة بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية في اليومين 15 و 30 بعد تحريض الآفة. علاوة على ذلك ، كشف تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان عن وجود أعلى للكولاجين الليفي ، وهو مكون رئيسي في مورفولوجيا الأوتار وقوتها ، في المعالجة بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية في اليومين الخامس و 15 ، مع شدة مماثلة من التلوين لوحظت في كلتا المجموعتين بحلول اليوم 30 بعد الحقن. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث آفات قياسية للفئران ، وأخذ عينات من الوتر لتقييم عملية الشفاء بعد حقن البلازما الغنية بالصفائح الدموية.