موسع لأخذ العينات من السوائل البطانة المخاطية للتحديد الكمي للمناعة-الوسيط في فيفو مجرى الهواء العلوي في مستويات

الهدف العام من طريقة أخذ عينات من سائل البطانة المخاطية هو دراسة البصمة المناعية المحلية لمجرى الهواء دون الحاجة إلى إجراءات التحفيز. تتيح لك هذه الطريقة دراسة الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الجهاز التنفسي لدى الأطفال مثل الالتهابات والربو والحساسية. تتمثل مزايا الطريقة في أنه يمكنك قياس مستويات منخفضة جدا من الوسطاء المناعيين في الغشاء المخاطي لمجرى الهواء غير المحفز في الجسم الحي.

توضيح الإجراء من قبل الدكتور وولسك. لجمع عينات حديثي الولادة، قم أولا بقص شريطين على الأقل ثلاثة × 15 ملم من صفائح ترشيح البوليستر الهيدروكسيل الليفية. بعد ذلك ، ضع حديث الولادة على السرير ولاحظ أي أعراض لعدوى مجرى الهواء.

بعد ذلك، استخدم الملقط لإدخال قطعة واحدة من ورق الترشيح حوالي سنتيمترا واحدا في الجزء الأمامي من المحارة السفلية لكل فتحة أنف للرضيع وإعطاء ماء السكر لحديثي الولادة للراحة حسب الحاجة. لاحظ أي عطس أو بكاء مستمر أو رعاف يحدث خلال فترة أخذ العينات. بعد دقيقتين من الامتصاص ، انقل أوراق الترشيح إلى أنبوب مكتوب عليه لتخزينها الفوري عند سالب 80 درجة مئوية.

ستظهر الإجراء التجريبي ليزبيث روزهولم ، فنية في مختبري. لقياس الوسيط المناعي لمجرى الهواء ، ضع ما يصل إلى 10 عينات من سالب 80 درجة مئوية على الجليد وسجل أرقام التعريف الخاصة بها. عندما يتم إذابة العينات، اغمر كل من ورقتي الترشيح لكل موضوع في 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت الطازج لكل ورق ترشيح، مع استكمال قرص واحد كامل لمثبط البروتياز لكل 25 مل من محلول المخزون العازلة.

انقل العينات إلى شاكر الألواح بسرعة 400 دورة في الدقيقة لمدة خمس دقائق. انقل المخزن المؤقت وأوراق الترشيح إلى أكواب مرشحات أنبوب أسيتات السليلوز الفردية. قم بالطرد المركزي للعينات لجمع مستخلص الأنف المصفى في الجزء السفلي من أنابيب الطرد المركزي الدقيقة.

ثم قم بإزالة الأكواب وضع الأنابيب على الثلج. بعد ذلك ، قم بنقل 150 ميكرولتر من مستخلص الأنف إلى آبار فردية من ألواح تخزين ملزمة منخفضة البروتين وقم بتخزين الألواح عند سالب 80 درجة مئوية حتى التحليل. بعد ذلك ، قم بقياس تركيز الوسطاء المناعيين الأنفية المعنيين بواسطة مصفوفة متعددة الإرسال تعتمد على التلألؤ الكيميائي الكهربائي عالية الحساسية وفقا لبروتوكولات الفحص القياسية.

في هذا التحليل التمثيلي ل 620 حديث الولادة ، أظهر معظم الوسطاء المناعيين الذين تم قياسهم مستوى منخفضا من الكشف. كانت مستويات جاما IFN أقل من حد الكشف الأدنى في ما يقرب من نصف العينات ، بينما كانت مستويات بيتا TNF alpha و CCL4 و TGF أقل من حد الكشف الأدنى في أقل من 1٪ من العينات. كان من الواضح تعدد الخطيات القوي لمستويات الوسيط المكتشفة البالغ عددها 20 ، كما يتضح من الخريطة الحرارية.

في حديثي الولادة المصابين بفيروس البيكورنا بدون أعراض ، لوحظ وجود ملف تعريف منظم للخطر بشكل رئيسي للوسطاء المناعيين من النوع 1 مما يشير إلى دور مسبب للمناعة لاستعمار البكتيريا والفيروسات في الجزء الأول من الحياة. كما تم تحديد الارتباط بين وجود الأشقاء في الأسرة عند الولادة ، والاستجابة المناعية المخاطية الموجهة من النوع 1 من النوع 17 مع دليل على ارتباط هذه الظاهرة بتأثير فتيلة مناعي في الرحم يرتبط عكسيا بالوقت منذ آخر ولادة. بالإضافة إلى ذلك ، تميز الأطفال المولودون لأمهات يتلقين مكملات عالية مقابل دواء وهمي بزيادة التنظيم في وسطاء مناعي محددين ، مما يشير إلى أن فيتامين دال يعزز استجابة مناعية مضادة للبكتيريا مستقلة عن تلك التي يسببها الفيروس أو البكتيريا أو الأشقاء أو تأتب الأم.

يمكن أيضا استخدام طريقة أخذ العينات المجهرية هذه من خلال منظار القصبات ، مما يسمح بدراسة الوسطاء المناعيين في الشعب الهوائية السفلية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية قياس الوسطاء في الغشاء المخاطي لمجرى الهواء غير المحفز في الجسم الحي عند الأطفال حديثي الولادة والأطفال الأكبر سنا.