تحديد التردد المثبط الأمثل للخلايا السرطانية باستخدام حقول علاج الورم (تفيلدس)

الهدف العام لنظام التطبيق في المختبر TTFields هو التحقق من تأثيرها على الخلايا السرطانية من أنواع مختلفة من الأورام، لتوجيه الإدارة السريرية ل TTFields وتحسين نتائج العلاج. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تحديد تأثير معلمات TTField المختلفة على الخلايا السرطانية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتحديد تردد TTField الأكثر فعالية قبل السريري الذي يمنع نمو خط خلايا سرطانية معين ، والذي يمكن تطبيقه في النهاية على البشر.

من خلال تعديل طفيف لهذه التقنية، من الممكن اختبار فعالية العلاج المشترك ل TTField وطرق العلاج الأخرى، مثل عوامل العلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي. ستظهر الإجراء يارا بورات ، باحثة من فريقنا. للبدء، قم بتركيب أطباق TTFields ذات الأغطية على طبق أساسي وقم بإعداد ثمانية أطباق إضافية سيتم استخدامها لزراعة خلايا التحكم.

ضع غطاء معقم بحجم ملليمترين في قاع كل طبق. بعد ذلك ، قم بتعليق خمسة أضعاف 10 إلى الخلايا الرابعة U-87 MG في مليلتر واحد من وسط DMEM. يعتمد العدد المناسب من الخلايا المطلية في كل طبق على خصائص خط الخلية المستخدم.

من الأهمية بمكان معايرتها قبل التجربة لتجنب فرط نمو الخلايا. Pipet 200 ميكرولتر من تعليق الخلية على كل غطاء بحيث تتشكل قطرة على سطحها ، وتغطي الأطباق بأغطيةها. احتضان جميع الأطباق عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون طوال الليل للسماح للخلايا بالالتصاق.

بمجرد توصيل الخلايا ، قم بشفط الوسائط من الغطاء باستخدام ماصة سعة 200 ميكرولتر ، ثم قم بسحب ملليلترين من وسط النمو الكامل بعناية على كل طبق. اضغط برفق بطرف ماصة معقم على حواف الغطاء لتحرير أي فقاعات هواء عالقة أسفل الشريحة. بعد ذلك، احتضن الخلايا عند 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى يبدأ العلاج ب TTFields.

لبدء علاج TTFields، قم بإزالة الصفيحة الأساسية من الحاضنة 37 درجة مئوية وضعها في حاضنة مبردة لثاني أكسيد الكربون. ستحدد درجة حرارة الحاضنة المبردة شدة المجال الكهربائي. من المهم استخدام الشدة المناسبة، والتي تعتمد على حساسية الخلية ل TTFields.

ثم قم بتوصيل موصل أنثى كبل مسطح بلوحة القاعدة وقم بتشغيل مولد TTFields. افتح البرنامج المخصص لنظام تطبيق TTFields في المختبر. بعد تحديد دراسة جديدة عن طريق إدخال أسماء التجربة والمجرب ، اضبط التردد ودرجة الحرارة المستهدفة لكل طبق.

انقر فوق زر البدء لبدء علاج TTFields في البرنامج، وتحقق مما إذا كانت جميع الأطباق تظهر باللون الأزرق الفاتح على الشاشة، مما يؤكد اتصالها الصحيح. لإعادة الاتصال ، اضغط برفق على الطبق لأسفل وقم بتدويره ببطء ذهابا وإيابا حتى يظهر الطبق باللون الأزرق الفاتح على الشاشة. بعد 24 ساعة من العلاج ، أوقف التجربة في البرنامج بالنقر فوق إيقاف مؤقت.

افصل موصل الكابل المسطح عن لوحة القاعدة ثم ضع لوحة القاعدة في خزانة التدفق الصفحي ، ثم قم بإزالة لوحة القاعدة مع الأطباق وخلايا التحكم المزروعة في الظروف القياسية من حاضناتها. استبدل الوسط في جميع الأطباق بوسط نمو كامل طازج ، ثم ضع خلايا التحكم في حاضنة 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون وأعد اللوحة الأساسية إلى الحاضنة المبردة. أعد توصيل لوحة القاعدة بالمولد.

استمر في العلاج بالنقر فوق الزر متابعة. بمجرد اكتمال العلاج ، قم بإنهاء التجربة بالنقر فوق الزر "إنهاء التجربة" في البرنامج ، ثم احفظ البيانات التي تم تحميلها من النظام. بعد إيقاف تشغيل مولد TTFields، افصل الكبل المسطح عن لوحة القاعدة وقم بإزالة النظام من الحاضنة.

اضغط لأسفل وقم بتدوير الطبق الخزفي عكس اتجاه عقارب الساعة لفصله عن لوحة القاعدة. بعد ذلك، انقل أغطية TTFields المعالجة والتحكم إلى أطباق بتري المعقمة التي تحتوي على وسط طازج لمزيد من التقييم. لتقييم تأثير علاج TTFields، قم بإزالة الوسط من كل طبق يحتوي على غطاء ، ثم أضف 0.5 مل من 0.25٪ تريبسين / EDTA ، واحتضن الأطباق عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى تنفصل الخلايا عن سطح الغطاء.

قم بتحييد التربسين باستخدام 0.5 مل من وسط النمو الكامل ، وأعد تعليق الخلايا عن طريق سحب التعليق برفق لأعلى ولأسفل. أخيرا ، عد الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي. تظهر هنا نتائج فحص التردد الذي تم إجراؤه في خلايا A2780، مما يكشف عن التأثير المعتمد على التردد ل TTFields على نمو الخلايا المدروسة وقدرتها على الاستنساخ.

لوحظت أبرز فعالية العلاج عند تطبيق تردد 200 كيلو هرتز. تم التحقيق في فعالية علاج TTFields الذي تم إجراؤه بشدتين مختلفتين في خلايا OVCAR-3. تظهر الدراسة علاقة واضحة بين الكثافة المطبقة ونتيجة العلاج ، مع زيادة النشاط المثبط للنمو لكثافة الحقل الأعلى.

بغض النظر عن شدة المجال المطبقة، لوحظ أقوى تأثير لمعالجة TTFields عند تردد 200 كيلو هرتز. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من 30 دقيقة في اليوم. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تجنب انسكاب الوسائط والحفاظ على توازن الأطباق عند نقلها من الحاضنة إلى الغطاء والعودة.

بعد تطبيق TTField، يمكن إجراء طرق أخرى، مثل قياس التدفق الخلوي أو تحليل بروتين الألانين أو الفحص المجهري المناعي الفلوري من أجل إجراء مزيد من التحقيق في نتائج العلاج والآلية الكامنة وراء النشاط المرصود. تستخدم هذه التقنية لتحديد ترددات TTFields المثلى التي سيتم تطبيقها في البيئات السريرية لأنواع مختلفة من السرطانات. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تخطيط وتنفيذ تجارب TTFields في المختبر.

لا تنس أن العمل مع خطوط الخلايا البشرية يمكن أن يكون خطيرا ، ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات ، مثل القفازات والملابس الواقية أثناء تنفيذ هذا الإجراء.