نموذج استئصال^ال ماوس 5/6 الذي يستحث عضلة يوريمي التجريبية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إعداد نموذج استئصال جزئي بسيط للفأر بخمسة سادسة مع ربط عمودي بمعدل بقاء أفضل من النماذج التقليدية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الكلى المزمنة حول التطور والعلاج العلاجي المحتمل لاعتلال عضلة القلب اليوريمي. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها نموذج حيواني سهل وقابل للتكرار باستمرار يحاكي أمراض أمراض الكلى المزمنة لدى المرضى من البشر.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة بسبب الكلى والأوعية الدموية والحالب الأصغر حجما في الفأر. ابدأ بتأكيد المستوى المناسب من التخدير من خلال عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم ووضع مادة التشحيم على عيون الفأر. ضع الماوس على وسادة تدفئة وأدخل مقياس حرارة المستقيم للحفاظ على درجة حرارة الجسم حوالي 37 درجة مئوية أثناء العملية.

ثم ضع على جانبه الأيمن واحلق الشعر فوق منطقة الجراحة. قم بإزالة أي شعر متبقي باستخدام كريم مزيل للانكاحل وتطهير الجلد المكشوف بمحلول بولي هيدروكسي و70٪ إيثانول. قم بمحاذاة بياضات الأوتوكلاف الجراحية فوق موقع الجراحة.

وقم بعمل شق قطني بطول سنتيمتر واحد تقريبا عبر الجلد والأنسجة العضلية. باستخدام المشرط والملقط ، افصل العضلات واللفافة لكشف الكلية اليسرى. بعد ذلك ، استخدم ملقطا حادا صغيرا لسحب الدهون حول الكلى برفق لاستخراج الكلى من تجويف البطن.

ندف النسيج الضام والغدة الكظرية برفق من الطرف العلوي للكلية باتجاه البواب الأوسط للعضو حيث تدخل الأوعية الدموية وتخرج من الأنسجة الكلوية. اعزل الحالب حول النصف السفلي من الكلى داخل النسيج الضام ، وافصل النسيج الضام برفق عن الكلى للتأكد من عدم ربط الحالب من الضروري فصل النسيج الضام بعناية حتى لا يتلف الحالب ولا ينزف.

عزل الحالب حول النصف السفلي من الكلى داخل النسيج الضام. بعد ذلك ، استخدم ثلاث خيوط خياطة حريرية صفرية لربط الكلية على بعد حوالي 0.4 سم من الجزء العلوي ، باتجاه منتصف البواب و 0.4 سم من الجزء السفلي باتجاه البواب. عند شد الغرز ، استخدم توترا كافيا للتأثير على تدفق الدم إلى الجزء البعيد من الكلى دون التسبب في نزيف على أي من الجانبين.

إذا لم يلاحظ أي نزيف بعد دقيقتين ، فأعد الكلية برفق إلى موقعها التشريحي الأصلي ، واستخدم أربع خيوط صفرية وثلاث خيوط صفرية لإغلاق طبقات العضلات والجلد على التوالي. بعد ذلك ، ضع مرهما مضادا حيويا على منطقة الجراحة وقم بإسكان الفأر بشكل فردي بمصباح حراري ومراقبته حتى التكسير القصي. بعد سبعة أيام من الربط القطبي ، قم بكشف الكلية اليمنى كما هو موضح للتو.

استخدم ملقطا غير حاد لتنظيف الدهون المحيطة والأنسجة الضامة ، ووضع خيوط حريرية ثلاثية صفرية حول الشريان الكلوي والوريد. ندف النسيج الضام والغدة الكظرية برفق من الطرف العلوي للكلية باتجاه البواب الأوسط. قم بإزاحة الحالب برفق من الطرف السفلي من الأنسجة ، وفك جميع الأوعية معا دون التسبب في نزيف.

بعد ذلك ، حرك عقدة ربط فضفاضة باتجاه جانب الشريان الأورطي البطني ، والثانية الرباط الفضفاض باتجاه جانب الكلى. واربط ربط الشريان الأورطي البطني بعقد مزدوجة. عقدة صلبة ستغير لون الكلية اليمنى.

اربط عقدة الرباط الثانية بعقد مزدوجة ، مع ترك مسافات بين العقد حتى يمكن قطع الأوعية ، وقطع الأوعية الكلوية. بعد إزالة الكلى ، أغلق طبقات العضلات والجلد كما هو موضح للتو. ثم جفف الكلى بشاش معقم وقم بوزن الأنسجة الكلوية المحصودة.

بعد أربعة أسابيع من الجراحة ، أظهرت الفئران التي أجريت استئصال الكلية الجزئي زيادة كبيرة في مستويات السيكتاتين C والكرياتينين ونيتروجين اليوريا في الدم في البلازما مقارنة بحيوانات الجراحة الوهمية. كما يتضح استئصال الكلية الجزئي الذي حفز فقر الدم ، كما يتضح من انخفاض مستويات الهيماتوكريت بشكل ملحوظ في المقيدة بالقطبي. يشار إلى تضخم القلب والخلل الانبساطي في الفئران المصابة بالكلية جزئيا من خلال زيادة نسبة القلب إلى وزن الجسم وتحليل تخطيط صدى القلب عبر الصدر الذي يكشف عن زيادات كبيرة في سمك الجدار الخلفي والأمامي ، ومؤشر أداء عضلة القلب ، ومؤشر كتلة البطين الأيسر.

يتضح التليف القلبي بوساطة استئصال الكلية الجزئي أيضا من خلال الزيادات في تعبير الكولاجين من النوع 1 في متجانسات البطين الأيسر ومجانسات الكلى المتبقية اليسرى. علاوة على ذلك ، يلعب الإجهاد المؤكسد دورا مهما في اعتلال عضلة القلب اليوريمي التجريبي ، مما يحفز بشكل كبير تعديل كربنيل البروتين المباشر لبروتينات متعددة وتنشيط كيناز التيروزين الورمي الأولي في متجانسات البطين الأيسر. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 40 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التحقق من معدل تنفس وضبط الأيزوفلوران حسب الاقتضاء. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء تجارب أخرى مثل مقارنة تأثيرات علاجات دوائية معينة على التعافي من استئصال الكلية الجزئي للإجابة على الأسئلة التقليدية حول العلاجات العلاجية المحددة ذات الأهمية. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال أمراض الكلى المزمنة لاستكشاف أمراض وفحص الأدوية المحتمل في اعتلال عضلة القلب اليوريمي.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إعداد نموذج استئصال الكلية الجزئي في الماوس.