مقايسة تثبيط (مرحبا) هيماجلوتينيشن أمثل لقياس الأجسام المضادة الخاصة بالإنفلونزا التتر

البروتوكولات المقدمة تصف كيفية القيام مقايسة تثبيط hemagglutination كمياً التتر الأجسام المضادة الخاصة بالإنفلونزا من عينات المصل من المستلمين لقاح الإنفلونزا. الفحص الأول يحدد التركيزات المثلى مستضد الفيروسية بواسطة hemagglutination. الفحص الثاني يوضحها التتر الأجسام المضادة الخاصة بالإنفلونزا بتثبيط هيماجلوتينيشن.

الهدف العام من اختبار تثبيط التخثر هذا هو قياس عيار الأجسام المضادة ضد فيروسات معينة ذات أهمية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال اللقاحات حول المناعة والحماية بوساطة اللقاح داخل مختلف المجموعات السكانية وعبر مختلف الفئات العمرية والمرضى. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها دقيقة وأنها تسمح بتحديد العيار السريع لوجود الأجسام المضادة المعادلة.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لعيارات الأجسام المضادة البشرية ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أنظمة أخرى ، مثل عيار الأجسام المضادة لمصل الفئران ، وكذلك المواد الطاففية المزروعة. ابدأ بتسمية 96 لوحة ميكروتيتر بئر بالمعلومات التجريبية المناسبة. ثم أدر اللوحة في الاتجاه الرأسي واستخدم ماصة متعددة القنوات لإضافة 25 ميكرولترا من PBS إلى كل بئر، باستثناء البئر الأول من صف المعايرة بالتحليل الحجمي الخلفي السفلي.

أضف 50 ميكرولترا من محلول المستضد المحضر حديثا ذي الأهمية إلى البئر الأول من صف المعايرة بالتحليل الحجمي الخلفي، متبوعا بإضافة 25 ميكرولترا من عينات المصل المعالجة بتقنية RDE إلى الآبار الأولى من الصفوف العشرة الأولى. أضف 25 ميكرولترا من المصل المناسب إلى البئر الأول من الصف الحادي عشر كعنصر تحكم إيجابي. نقل 25 ميكرولترا من البئر الأول من كل صف إلى آبارها المتتالية لإجراء تخفيفات متسلسلة مزدوجة.

الماصة لأعلى ولأسفل من 10 إلى 15 مرة لكل خطوة تخفيف، مع التخلص من 25 ميكرولترا الأخيرة من الآبار الأخيرة. بعد ذلك، أضف 25 ميكرولترا من محلول المستضد إلى كل بئر من الصفوف من واحد إلى 11 و25 ميكرولترا من PBS فقط إلى كل بئر من صف المعايرة بالتحليل الحجمي الخلفي. اضغط على الطبق بعناية 10 مرات على الجوانب الأربعة للخلط.

ثم غطي الطبق لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة ، أضف 50 ميكرولترا من محلول خلايا الدم الحمراء إلى كل بئر واخلط الطبق بمزيد من النقر. ثم قم بتغطية اللوحة مرة أخرى واحتضان خلايا الدم الحمراء وفقا للأنواع المستخدمة كما هو موضح في الجدول.

بعد إضافة خلايا الدم الحمراء إلى اللوحة ، التزم بوقت الحضانة المناسب لنوع الدم المستخدم في الفحص. ستؤدي الحضانة القصيرة جدا أو الطويلة جدا إلى تفسير غير صحيح للنتائج. في نهاية الحضانة ، قم بتقييم التخثر الدموي عن طريق إمالة اللوحة 90 درجة لمدة 25 ثانية وقم بتمييز نتائج كل بئر ، بينما لا تزال اللوحة مائلة ، على مخطط مطبوع للوحة البئر 96.

في هذه التجربة، تم تقييم استجابة الأجسام المضادة الناجمة عن اللقاح في 26 متطوعا أصحاء تلقوا لقاحا معطلا ثلاثي التكافؤ للأنفلونزا يحتوي على الإنفلونزا A/H1N1/California/2009 وA/H3N2/Texas/2012 وB/Massachusetts/O2/2012 قبل موسم الإنفلونزا في 24 2015. لوحظت استجابة مناعية تفاعلية متصالبة لسلالات فيروس A/H3N2/Switzerland/2013 وA/H3N2/Texas/2012، مع انخفاض معتقد في المتوسط الهندسي لمعايرة تثبيط التخثر الدموي والحماية المصلية المستحثة ضد الأنفلونزا A/H3N2/Switzerland/2013 مقارنة بالنزلة الوافدة A/H3N2/Texas/2012. بعد التطعيم ، زادت عيار الأجسام المضادة ضد كلتا السلالتين ، على الرغم من عدم وجود سلالة A / H3N2 / Switzerland / 2013 في اللقاح.

يوضح الهيماجلوتينين الفيروسي إمكانية تعتمد على الأنواع لتضخم كريات الدم الحمراء. من المثير للاهتمام أن دم خنزير غينيا لا يتضخم بشكل صحيح مع الأنفلونزا B ودم الديك الرومي لديه القدرة على تضخم الدم مع عيارات عالية وتفاعل متقاطع منخفض. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في غضون ثلاث ساعات إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر المصل باستخدام RDE لتعطيل أي مثبطات غير محددة وارتباط غير محدد أثناء تضخم الدم. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل ELISA للإجابة على أسئلة إضافية حول دور الغلوبولين المناعي الفردي الخاص بمسببات الأمراض. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال المناعة الفيروسية لتعزيز فهمنا للمناعة المرتبطة باللقاح لدى المرضى الأصحاء والذين يعانون من كبت المناعة ضمن مختلف الفئات العمرية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء اختبار تثبيط التخثر الدموي لتحديد عيارات الأجسام المضادة الخاصة بسلالة الأنفلونزا على نطاق واسع. لا تنس أن العمل مع المستضدات الفيروسية ودم وعينات المصل البشري يمكن أن يكون خطيرا للغاية وأن الاحتياطات مثل العمل في مختبر BSL2 يجب دائما اتخاذ الاحتياطات أثناء تنفيذ هذا الإجراء.