تقييم السلوك العصبي في نموذج ماوس لإصابة في الدماغ التاكسج الدماغية حديثي الولادة

الهدف العام لجراحة إصابات الدماغ لحديثي الولادة نقص التأكسج ، تليها الاختبارات المعرفية والحركية ، هو الحصول على نموذج فأر لدراسة مثل هذه الإصابات وتلف الدماغ ذي الصلة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول إصابات الدماغ نقص التأكسج الإقفارية عند حديثي الولادة، مثل كيفية تأثير هذه الإصابات على الوظائف الحركية والمعرفية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها معروفة وشائعة الاستخدام.

وهو أيضا نموذج قبل السريري للشلل الدماغي والسكتات الدماغية حديثي الولادة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأنه يصعب تحديد الشريان السباتي الأيمن من جانب واحد. سيظهر الإجراء ، جنبا إلى جنب مع ، يون كيوم شين ، طالب دراسات عليا من مختبرنا.

بعد تخدير ما لا يقل عن خمسة صغار فأر من P-seven ، ضع جروا تحت مجهر تشريح مع رفع البطن. ثم نظف الرقبة بالكحول. لبدء الجراحة ، استخدم المقص لعمل شق 0.7 ملم في الرقبة.

بعد ذلك ، قم بإزالة الأنسجة الدهنية بعناية ، باستخدام ملقط ، حتى ينكشف الشريان السباتي الأيمن أحادي الجانب. بعد ذلك ، باستخدام خياطة 5-0 ، قم بربط الشريان السباتي الأيمن من جانب واحد. الآن ، قم بخياطة الشق في الرقبة ب 5-0 نايلون ، وقم بتعقيم الشق.

بعد ذلك ، اسمح للجرو بالتعافي في غرفة نقص الأكسجين بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مع فتح الغطاء لمدة ساعة تقريبا. ضع فأرا آخر تم التلاعب به جراحيا في غرفة نقص الأكسجين للتعافي. بمجرد أن تستيقظ الجراء تماما ، أغلق غطاء الغرفة وقلل من مستويات الغاز لتهيئة ظروف نقص الأكسجين.

بعد 90 دقيقة من نقص الأكسجة ، أعد الجراء المصابة في الدماغ إلى أقفاصهم. بعد أسبوع ، قم بإعداد الجراء للجراحة ، كما كان من قبل ، للبحث عن دليل على الإصابة. قم بعمل شق في فروة الرأس لتحديد آفة الدماغ في المنطقة الخلفية الجانبية من نصف الكرة الأيمن.

ابحث في الجمجمة شبه الشفافة بحثا عن دليل على إصابة قشرية وإصابة في الحصين. وبالتالي ، صنف الجراء على أنها ضوابط مصابة أو غير مصابة. بعد الفحص ، أغلق فروة الرأس بخياطة ، وقم بتعقيم الشق.

عندما يبلغ عمر الفئران ستة أسابيع ، قم بتقييم ذاكرتها بناء على تعلم وتجنب الحافز الخصمي. استخدم جهازا تجاريا من جزأين وخطوة من خلال جهاز تجنب سلبي لهذه المهمة. للبدء ، ضع الماوس في المقصورة الساطعة في الصندوق لمدة 30 ثانية.

بعد ذلك ، افتح الباب بين المقصورات ، وسجل زمن انتقال لدخول المقصورة المظلمة. انتظر ما يصل إلى 300 ثانية لأداء المهمة. عندما تكون جميع أطراف الفأر الأربعة داخل المقصورة المظلمة بالكامل ، أغلق الباب.

بعد ذلك ، قم بإعطاء صدمة كهربائية للقدم 1/2 مللي أمبير لمدة ثانيتين ، وأعد الماوس إلى قفصه. بعد 24 ساعة ، كرر الاختبار. هذه المرة ، اسمح للماوس بالانتقال إلى الغرفة المظلمة لمدة 300 ثانية كاملة ، ولا تصدم الماوس.

قم بإجراء اختبار المشي على السلم على الفئران البالغة من العمر ستة أسابيع للتمييز بين الاضطرابات الدقيقة في الوظيفة الحركية ، باستخدام كل من التحليلات النوعية والكمية. أولا ، قم بإعداد جهاز السلم ، ثم قم بإعداد كاميرا فيديو لتسجيل حركات أطراف الماوس على الجهاز. بعد ذلك ، ضع الماوس على لوحة البدء ، وابدأ في التسجيل باستخدام كاميرا الفيديو.

تأكد من أن الفيديو يظهر الساقين في تركيز جيد. عندما يلمس الماوس اللوحة الأخيرة من جهاز السلم ، أوقف التسجيل. بعد ذلك ، حرك الماوس مرة أخرى إلى لوحة البداية ، وسجل الماوس وهو يعبر الجهاز مرة أخرى.

قم بذلك ما مجموعه أربع مرات لكل ماوس في كل تاريخ تجريبي. في وقت لاحق ، عند تحليل الفيديو ، احسب يدويا عدد الزلات التي قام بها كل طرف أثناء تشغيل الفيديو بسرعة 1/10. عندما ينزلق أحد الأطراف بين القضبان ، فإن هذا يشكل زلة.

عندما يبلغ عمر الفئران ستة أسابيع ، قم بتقييم قوة قبضتها. استخدم مقياس إجهاد الدفع / السحب ، المجهز بسلك مثلث قطره ملليمترين ، وكلها مثبتة على لوحة. ضع الماوس على اللوحة ، مع إمساكه من ذيله.

ثم اسمح للفأر بالوصول إلى السلك المعدني بأطرافه الأمامية. بمجرد أن تمسك الفئران بالسلك ، اسحب ذيله برفق حتى يحرر قبضته. سيسجل الجهاز قوة الذروة على السلك بالجرام.

كرر هذا الاختبار خمس مرات قبل إعطاء الماوس قسطا من الراحة. أثناء اختبار قوة القبضة ، هناك حركات ملحوظة للأداء الدقيق. حاول العثور على هذه الحركات على مدى خمس محاولات قبل إراحة الماوس ، لمدة دقيقة واحدة على الأقل لتقليل إجهاد العضلات.

بعد أن يستريح الماوس لمدة دقيقة واحدة على الأقل ، كرر السلسلة المكونة من خمس محاكمات مرة أخرى. بعد ذلك ، امنح الماوس قسطا آخر من الراحة ، وقم بإجراء السلسلة مرة أخيرة ليوم الاختبار هذا. من البيانات ، استخدم متوسط أكبر ثلاث درجات إما للطرف الأمامي أو لكلا الطرفين الأماميين للتحليل.

بعد حصاد أدمغة المصابة بنقص الأكسجة ونقص التروية البالغة من العمر 14 أسبوعا ، تم تقييم الأدمغة شكليا على أنها لا تعاني من إصابة قشرية أو إصابة خفيفة أو إصابة خطيرة. تم فحص نفس بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي قبل أسبوع ، وهو ما كان أيضا كاشفا للغاية. حتى الدماغ الطبيعي شكليا أظهر إصابة خفيفة في الحصين.

في عمر ستة أسابيع ، بعد خمسة أسابيع من الإصابة ، تم تقييم الفئران بمهام سلوكية مختلفة. كانت الفئران المصابة بنقص الأكسجة ونقص التروية ضعيفة إدراكيا في مهمة التجنب السلبي على مدار 24 ساعة. نظرا لتلف نصف الكرة الأيمن فقط ، أظهرت الفئران وظائف حركية نصفي.

وقد تم الكشف عن ذلك من خلال الاختلاف في النسبة المئوية للانزلاقات على الدرجات المستعرضة للسلم لكل طرف أمامي. علاوة على ذلك ، نظرا لأن قوة القبضة تشمل القشرة الحركية في الدماغ ، فقد أظهرت مجموعات الإصابات الطبيعية والقشرية اختلافات في قوة القبضة. لم يلاحظ أي فرق بين الضوابط العادية والفئران غير المصابة بشكل قاطع ، لكن الفئران المصابة كانت ضعيفة بشكل واضح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية ربط الشريان السباتي الأيمن من جانب واحد لتوليد فئران مصابة بنقص التأكسج والإقفار لحديثي الولادة وكيفية إجراء التحليل السلوكي للمتابعة. من المهم ملاحظة أنه حتى في حالة عدم وجود ضرر مرئي في الدماغ القشري بعد سبعة أيام من الإصابة ، قد يكشف التصوير بالرنين المغناطيسي عن إصابة في الحصين. أيضا ، من المهم أن تتذكر علاج الجراء بلطف وإكمال الجراحة في أسرع وقت ممكن.

الجراء لها قشرة ضعيفة جدا ورقيقة ، لذا كن حذرا جدا.