بروتوكول لقياس مفاعليه جديلة في نموذج الفئران من اضطراب استخدام الكوكايين

في هذا البروتوكول ، يقيس تفاعل الإشارة دافع للبحث عن الكوكايين بعد الغياب عن الإدارة الذاتية للكوكايين. يحدث تفاعل الإشارة عندما يتعرض الجرذ مرة أخرى للسياق والإشارات المرتبطة سابقا بتوصيل الكوكايين عن طريق الوريد. تفاعل جديلة هو مقياس لخطر الانتكاس.

بروتوكول تفاعل الإشارة الموصوف هنا هو وسيلة ما قبل السريرية لاختبار الانتكاسة المعدلة للعلاجات الدوائية بالإضافة إلى التحقيق في العوامل الوراثية والبيئية التي تساهم في خطر الانتكاس. هذه مهمة فعالة لسلوك البحث عن المخدرات التي تتوافق مع العديد من خصائص تعاطي المخدرات البشرية والانتكاس. تم تحسين المعلمات الرئيسية مثل جرعة الكوكايين وحجم التسليم ومدة التسريب لتحديد صلاحية المرحلة والقوة الإنتاجية الانتقالية.

بالنسبة لهذا البروتوكول ، استخدم ذكور فئران Sprague Dawley التي يبلغ عمرها حوالي ثمانية إلى تسعة أسابيع والتي تأقلمت مع غرفة المستعمرة لمدة سبعة أيام على الأقل. خلال فترة التأقلم ، قم بإيواء الفئران في أزواج والتعامل معها يوميا طوال الدراسة. توفير وصول غير محدود إلى الطعام في أقفاص منازلهم طوال جميع مراحل الدراسة.

قم بزرع قسطرة الوريد الوداجي باستخدام الطريقة التي حددها Kmiotek والمتعاونون في فيديو JoVE الخاص بهم ، ثم قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي لمجموعات العلاج بالمحلول الملحي أو الكوكايين. للتدريب ، جداول برنامج الإدارة الذاتية للكوكايين كما هو موضح في بروتوكول النص. جهز غرف التدريب بأذرعين للاستجابة قابلة للسحب ، وضوء تحفيز فوق كل ذراع استجابة ، ومصباح منزلي مقابل الرافعات.

توصيل الكوكايين أو المحلول الملحي من مضخات التسريب بالحقنة خارج المقصورة. استخدم 23 إبرة قياس متصلة بالمحاقن وأنابيب البولي إيثيلين المغلفة بمقود زنبركي معدني متصل بقسطرة الفئران. يتم توصيل الكوكايين أو المحلول الملحي بعد ضغط الرافعة النشط ، ولكن ليس بعد ضغط الرافعة غير النشط.

قم بتغيير الحلول يوميا. استخدم مخففات الكوكايين الطازجة في كلوريد الصوديوم المعقم 0.9٪ المصمم خصيصا لوزن كل فأر. قم بتحميل ما لا يقل عن ثمانية ملليلتر من المحلول في حقنة كل فأر.

ابدأ بتدريب الفئران على جدول FR1 للتعزيز والتقدم إلى جدول FR5 بعد ثلاثة أيام متتالية من سبعة حقن في الساعة مع تقليب أقل من 10٪ في العدد الإجمالي للحقن في الجلسة الواحدة. من الضروري تحليل بيانات سلوك الإدارة الذاتية على أساس يومي لتحديد وقت تقدم إلى FR5 والتحقق من فقدان سالكية القسطرة. تتمثل إحدى أهم خطوات البروتوكول في مراقبة الإدارة الذاتية خلال أول 14 يوما من التدريب لضمان إدارة ذاتيا بشكل طبيعي.

إذا انخفضت الإدارة الذاتية بشكل كبير ، فمن المحتمل أن تكون قسطرة الفئران قد فقدت المباحية. في بداية الجلسة ، تأكد من عدم وجود فقاعات في المحقنة. قم بتوصيل المحقنة بأنبوب البولي إيثيلين وأدخلها في مضخة التسريب.

اضبط المحقنة بعناية بحيث يتم توزيع المحلول بالتساوي وبشكل كامل في أنبوب البولي إيثيلين. بعد ذلك ، قم بتوصيل الفئران بنظام التوصيل وضعها في غرف التكييف القياسية الخاصة بها الموجودة في مقصورات تهوية مخففة للصوت مع مراوح. الاتساق طوال التجربة أمر حيوي.

ضع دائما فأرا في نفس الغرفة واحتفظ بالرافعة النشطة على نفس الجانب داخل تلك الغرفة. على مدار 14 جلسة يومية مدتها 180 دقيقة ، تتمتع الفئران بحرية الوصول إلى الرافعات وستتعلم بسهولة الرافعة التي توفر التحفيز بشرط أن يعمل النظام. كل مشغل للرافعة النشطة على جدول زمني ثابت من واحد يطلق 0.1 ملليلتر من المحلول على مدى ست ثوان ويضيء في نفس الوقت ضوء القفص وضوء التحفيز فوق الرافعة النشطة.

هناك تأخير لمدة ثانية واحدة قبل إصدار الحل. بعد كل توصيل للكوكايين أو المحلول الملحي ، يتم إلغاء تنشيط ضوء التحفيز ومضخة التسريب لمدة 20 ثانية يظل خلالها ضوء المنزل مضاء والضغط على الرافعة لا يفعل شيئا سوى تسجيله. عندما ينطفئ الضوء ، يتم إعادة تنشيط الرافعة.

أي تشغيل للرافعة غير النشطة لا ينتج عنه أي عواقب مجدولة. في نهاية تلك الجلسة التي استمرت 180 دقيقة ، استخدم حركات بطيئة ودقيقة لإزالة الجرذ الذي يحتمل أن يكون عدوانيا من الغرفة. ثم اغسل القسطرة.

بين الجلسات ، قم بتنظيف الغرف بعناية. امسح كل سطح بمحلول إيثانول بنسبة 70٪. في نهاية الجلسات التدريبية ، ضع الفئران في الامتناع القسري عن ممارسة الجنس لمدة 30 يوما دون الوصول إلى غرفة العامل.

استمر في التعامل مع الفئران بشكل يومي ومراقبة الصحة العامة. بعد فترة الامتناع الطويلة ، اترك الفئران 60 دقيقة في الغرفة الفعالة متبوعة مباشرة بحصاد الدماغ. بالنسبة لهذه الجلسة، قم بتشغيل البرنامج المجدول لتفاعل الإشارة.

بترتيب أوقات بدء الجلسة لإتاحة الوقت لحصاد الأدمغة بين الجلسات. الأهم من ذلك ، قم بتشغيل المضخة بدون توصيل المحقنة بحيث تظل الإشارة السمعية للمضخة جزءا من المنبه دون توصيل المادة. ابدأ هذه الجلسة كالمعتاد مع الجرذ في غرفة الإدارة الذاتية التي تم تدريبه فيها.

في هذا الاختبار ، عندما يتم الضغط على الرافعة النشطة التي تم توصيل الكوكايين أو المحلول الملحي مسبقا ، يتم تسليم الإشارات فقط وفقا لجدول FR1. الرافعة غير النشطة لا تزال لا تفعل شيئا. سجل جميع العروض التقديمية ، ومكابس الرافعة النشطة سابقا ومكابس الرافعة غير النشطة بالإضافة إلى زمن الوصول إلى الضغط على الرافعة الأولى.

باستخدام البروتوكول الموصوف ، تم إجراء دراسة وتم نقل الفئران بشكل فردي من FR1 إلى FR5 لأنها استوفت المعايير. في المجموعة التي تدار للكوكايين ، زادت الفئران تدريجيا من عدد الحقن حتى وصلت إلى المعيار ، ثم تم نقلها من FR1 إلى FR5. تم جمع مقاييس إخراج متعددة من اختبار تفاعل جديلة الكوكايين.

على سبيل المثال ، ضغطت الفئران التي كانت تدار الكوكايين ذاتيا سابقا على الرافعة النشطة سابقا أكثر بكثير من الفئران التي تدار بنفسها بالمحلول الملحي. مقياس إخراج مهم آخر هو زمن الوصول إلى الضغط من المستوى الأول. عندما يلاحظ تغيير في هذا ، قد يكون متوترا جسديا أو لديه دافع منخفض للإدارة الذاتية للكوكايين.

يمكن استخدام مهام السلوك الحركي لتقييم التغيرات في الصحة البدنية والتمييز بين الضعف الحركي والتغيرات التحفيزية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تدريب الفئران على إعطاء الدواء ذاتيا ، والحفاظ على سالكية القسطرة أثناء الإدارة الذاتية ، وتقييم تفاعل الإشارة إلى الإشارات المرتبطة بالمخدرات بعد الامتناع عن ممارسة الجنس كمقياس لخطر الانتكاس. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر برمجة البرنامج بعناية ، والتعامل مع بشكل صحيح ، وغسل القسطرة الوريدية بانتظام.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن للمرء تقييم الآليات الخلوية والجزيئية التي تدفع تفاعل إشارة الكوكايين بالإضافة إلى اختبار الأدوية الدوائية المحتملة التي تعدل تفاعل إشارة الكوكايين.