التصوير المقطعي التماسك البصري: التصوير الماوس العقدة الشبكية خلايا في فيفو

الهدف العام من هذه التجربة هو استخدام التصوير المقطعي للاتساق البصري أو OCT للحصول سريعاً على تقييم دقيق لسماكة الشبكية. يمكن لتقنية OCT أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال طب العيون مثل اعتلال العصب البصري. وتكمن الميزة الأساسية لهذه التقنية في كونها طريقة غير باضعة للكشف عن التغيرات الهيكلية في الخلايا العقدية لشبكية الفأر.

تعتبر هذه التقنية مثيرة للاهتمام حقاً لأنها طريقة غير جراحية وآمنة وموثوقة لاختبار تأثير العلاج في اعتلال العصب البصري. للبدء، قم أولاً بضبط إعدادات ذراع المرجع بما يتناسب مع العدسة، ثم قم بتشغيل وحدة إمداد الطاقة والكمبيوتر.

عندما يصبح الكمبيوتر جاهزاً، قم بتشغيل برنامج التصوير. أنشئ دراسة سريرية جديدة وأضف البروتوكولات المطلوبة. انتقل إلى قسم فحص المريض وقم بتعيين الإعدادات الافتراضية للفحص.

انقر فوق "إضافة مريض" (add patient) في قسم فحص المريض لإضافة مريض جديد وإدخال معلومات المريض ذات الصلة. ثم انقر فوق "إضافة فحص" (add exam)، و"بدء الفحص" (start exam)، وأضف عمليات المسح المسبقة الضبط من القائمة لاختيار البروتوكول المطلوب، بدءاً بالعين التي سيتم قياسها أولاً. وقبل 15 دقيقة على الأقل من الحصول على البيانات، قم بتقطير نقاط من مادة 10%phenylephrine بدرجة حرارة الغرفة في كل عين لجميع الفئران التي سيتم اختبارها.

بعد ذلك، قم بإزالة الكاشف الزائد ووضع قطرات من tropicamide بتركيز 0.5% في درجة حرارة الغرفة. وقبل عملية التصوير بنحو خمس دقائق، قم بتحريض التخدير العام. ومباشرة بعد ذلك، ضع 0.4%oxybuprocaine hydrochloride في كل عين، مع ترك المحلول لمدة ثلاث ثوانٍ لتخدير العينين وتثبيتهما.

بعد ذلك، قم بإزالة القطرات وكرر عملية وضع phenylephrine بتركيز 10% وtropicamide بتركيز 0.5%. وعندما يتسع الحدقتان بشكل كافٍ للتصوير، قم بترطيب العينين بقطرات عين لزجة تعتمد على الجليكول لتوفير ترطيب للقرنية، ولف الفأر في قطعة من الشاش الجراحي للحفاظ على دفئه. وباستخدام إسفنجة أو فتيلة قطنية، ضع طبقة رقيقة من جل عيني مدعم بـ hypromellose بتركيز 0.3% على كل عين.

أثناء القيام بذلك، ابعد الرموش والشوارب جانباً. ضع الفأر في الكاسيت بحيث يكون الرأس مستقيماً وموجهاً للأمام، ثم ضع قضيب العض في فمه بحذر. ضع لفة قطنية تحت جانب الحيوان من جهة العين التي يتم فحصها.

بعد ذلك، مع إبقاء طرف التصويب المثبت بمشبك على عدسة الفأر المخصصة، قم بتدوير برغي المترجم z عكس اتجاه عقارب الساعة لتقريب العدسة من العين. قم بضبط موضع الفأر مسبقاً عن طريق تدوير وإمالة الكاسيت وتدوير شريط العض وبراغي المترجم x حتى يتم وضع العين التجريبية للنظر مباشرة في العدسة. عندما يتم محاذاة المحور البصري للعينين والعدسة، اختر المسح الأول في الفحص.

انقر فوق "بدء التصويب" واستخدم برغي المترجم المحوري z لتحريك الشبكية رأسيًا في اللوحة اليسرى وأفقيًا في اللوحة اليمنى. ومن خلال تدوير الكاسيت، حرك رأس العصب البصري للأعلى أو للأسفل لجعله في منتصف اللوحة اليمنى. استخدم برغي شريط التثبيت لتسوية الشبكية داخل اللوحة اليمنى، ثم أدر الكاسيت لوضع رأس العصب البصري في منتصف اللوحة اليسرى.

بعد ذلك، استخدم برغي المترجم المحوري (x-translator screw) لموازنة الشبكية داخل اللوحة اليسرى، ومع مراعاة الوظيفة الأساسية لكل مُعدِّل، قم بضبط موضع الشبكية بشكل إضافي لتحقيق تمركز مثالي على رأس العصب البصري. عندما تصبح الشبكية في وضعها الصحيح، انقر فوق "بدء اللقطة" (start snapshot) لبدء المسح بالتصوير المقطعي للاتساق البصري في المجال الطيفي. لا تنسَ حفظ المسح والتقرير.

قم بتعديل التمركز إذا لزم الأمر. عند اكتمال المسح، اسحب العدسة وقم بوضع العين الثانية كما تم توضيحه للتو. بعد الانتهاء من مسح العين الثانية، أخرج الفأر من الكاسيت، وضع جل عيني يحتوي على 0.3% hypromellose في كل عين، ثم ضع الفأر على لوحة تسخين مع المراقبة حتى التعافي التام.

للتركيز على الخلايا العقدية الشبكية، استخدم الماكرو الخاص بأداة تصوير الشبكية بالرنين المغناطيسي (MRI retina tool) المصممة لبرنامج Image J. افتح أداة تصوير الشبكية بالرنين المغناطيسي، وقم بتعديل أداة تحديد المضلع (polygon selection tool)، ثم حمّل الصورة المطلوبة. انقر على M لبدء القياس، ثم انقر على E لضبط الموضع الأفقي. اختر الكاسيت الأول في نافذة مدير منطقة الاهتمام (region of interest manager) التي فُتحت حديثاً.

انقر على المضلع الأزرق، ثم انقر على حدود الطبقة المقاسة في الصورة لضبط موضع الكاسيت الأول. اختر الكاسيت الثاني من نافذة مدير المنطقة ذات الأهمية (region of interest manager) وقم بضبط الكاسيت الثاني. بعد ذلك، انقر على R لإعادة قياس الشبكية وعرض النتائج في نافذة القياسات.

على الرغم من أن جودة مسح OCT في المجال الطيفي ليست بجودة صورة المقطع العرضي للشبكية، إلا أن OCT يسمح برؤية المزيد من الطبقات. يمكن قياس طبقات الشبكية بسهولة في مسح OCT، وهي تشمل طبقة الألياف العصبية الشبكية وطبقات الخلايا العقدية، والطبقة النووية الداخلية، والطبقة الضفيرية الخارجية، والطبقة النووية الخارجية، وطبقات القطع الداخلية والخارجية، وظهارة صبغة الشبكية، والمشيمية، مما يتيح إجراء دراسة معقدة للشبكية بأكملها. إن قياس OCT لسماكة الشبكية الموضح هنا، يشير إلى أن إناث الفئران الطافرة جينياً في OPA1 والتي تعاني من ضعف بصري تظهر زيادة تدريجية في سماكة مجمع الخلايا العقدية وطبقات الألياف العصبية للشبكية المحيطة بالحليمة البصرية.

تُظهر مقارنة لسمك ألياف العصب الشبكي في طبقة الخلايا العقدية باستخدام فرجار قياس قياسي وآخر مُصنّع يدويًا، أن الفرجار القياسي يقيس سمكًا أقل بكثير مما يقيسه الفرجار المُصنّع يدويًا، وذلك لأن الفرجار القياسي أكثر سمكًا ويصعب وضعه على حدود طبقة رقيقة. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إنجازها في غضون 15 دقيقة إذا نُفذت بشكل صحيح. وبعد تطويره، مهد التصوير المقطعي للاتساق البصري (OCT) الطريق للباحثين في مجال طب العيون لتحليل التغيرات الهيكلية في شبكية فأر المختبر.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء وتحليل تصوير OCT للخلايا العقدية في شبكية العين لدى الفئران.