نموذج الفأر المهندسة وراثيا لسرطان القولون والمستقيم المتفرقة

ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحقيق عدوى الغدية القطاعية في القولون في نموذج فأر معدل وراثيا. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان القولون والمستقيم ، لأنها توفر نموذجا ممتازا لدراسة بيولوجيا وعلاج سرطان القولون والمستقيم. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن أي مختبر لديه خبرة صغيرة في جراحة القوارض يمكنه استخدام هذا النموذج لإنتاج أورام موضعية للقولون قابلة للتكرار ويمكن الوصول إليها بسهولة.

ابدأ بوضع فأر مخدر في وضع ضعيف ووضع المرهم على عيون. قم بلصق الماوس في وضع آمن ثم تأكد من المستوى المناسب من التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم. قم بعمل شق خط الوسط بطول 15 ملم تقريبا في جلد أسفل البطن.

بعد ذلك ، استخدم الملقط لإمساك عضلات جدار البطن وشق العضلات بعناية بالمقص لفتح تجويف البطن. بعد تحديد القولون البعيد ، قم بإمساك الأنسجة بعناية بمشبك دقيق على بعد حوالي 15 ملم بالقرب من فتحة الشرج. بعد ذلك ، أدخل أنبوب تفلون مرن عبر الشرج يدفع الأنبوب بعناية حتى يصل إلى الانسداد اللمعي.

قم بتغليف الأنبوب بقنية قياس 30. قم بتوصيل حقنة قياسية سعة ملليلتر واحد بالقنية واغسل القولون بعدة ملليلتر من المحلول الملحي العادي حتى يتم تفريغ كل البراز. بمجرد أن يصبح القولون البعيد فارغا ، استبدل الأنبوب الملحي بأنبوب تفلون جديد واستخدم مشبك ثان لسد القولون على بعد حوالي ثلاثة ملليمترات من المشبك الأول.

باستخدام حقنة ثانية سعة مليلتر واحد مزودة بقنية قياس 30 ، قم بحقن 50 إلى 80 ميكرولترا بعناية من 0.25٪ trypsin-EDTA في جزء القولون المثبت. يجب أن ينتفخ القولون بدرجة كافية لتفتيت الحاجز المخاطي دون ثقب جزء الأنسجة المثقوب. بعد 10 دقائق ، قم بإزالة المشبك البعيد.

بعد ذلك ، قم بإزالة أنبوب التربسين واغسل القولون البعيد ب 500 ميكرولتر من المحلول الملحي العادي. بعد إدخال أنبوب تفلون جديد ، قم بتثبيت القولون مرة أخرى وقم بتضخيم الأنسجة ب 50 إلى 80 ميكرولترا من محلول الفيروسات الغدية. بعد 30 دقيقة ، قم بإزالة المشابك والأنبوب وأغلق جدار البطن ب 6-0 خيوط تشغيل سريعة الامتصاص.

أغلق الجلد بمشابك الجرح الجراحي وراقب على وسادة تسخين حتى يتعافى تماما. لمراقبة نمو الورم عن طريق تنظير القولون ، ضع الحامل للورم المخدر في وضع ضعيف على وسادة تسخين وأدخل المنظار عبر الشرج في الأمعاء. قم بنفخ الهواء برفق تحت التحكم البصري لتوسيع القولون.

بعد ذلك ، ادفع المنظار بعناية للأمام حتى يمكن تحديد آفة مخاطية في القولون البعيد مع حفظ كل صورة بالمنظار عند الحصول عليها للتقييم اللاحق. عندما يتم الحصول على جميع الصور ، قم بإزالة المنظار ببطء وضع الماوس على وسادة تسخين 38 درجة مئوية حتى يتعافى تماما. يمكن مراقبة الأورام بسهولة وبشكل متكرر عن طريق تنظير القولون دون إجهاد كبير على.

تتشابه مظاهر المرض إلى حد بعيد مع سرطان القولون والمستقيم البشري حيث أصيبت أولا بالأورام الغدية تليها في النهاية تطور السرطان الغدي في القولون البعيد. اعتمادا على النمط الجيني الشرطي للحيوانات ، تنتقل الأورام أيضا إلى الصفاق والكبد. إذا تم استخدام أليل الفلورسنت cre-reporter ، فيمكن التعرف بسهولة على مظاهر الورم عن طريق التعبير عن البروتين الفلوري الذي قد يكون ساطعا بدرجة كافية ليتم تصوره في وضح النهار اعتمادا على أليل المراسل.

من الناحية النسيجية ، فإن 95٪ من الأورام النامية هي أورام غدية تشبه إلى حد كبير سرطان القولون والمستقيم البشري وتتميز بمجموعة كاملة من تطور الورم من الورم الحميد غير الجراحي إلى السرطان الغدي الذي يغزو الهياكل المحيطة. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 50 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إيلاء اهتمام خاص لضعف القولون في جميع الأوقات.

يؤدي الانثقاب حتما إلى التهاب الصفاق والإنتان ويتطلب إنهاء حقنة شرجية. لا تنس أن العمل مع الفيروس الغدي يتطلب تدابير أمان من المستوى الثاني للسلامة البيولوجية لأن الفيروس يمكن أن يكون خطيرا.