Name: إينتراسبلينيك زرع خلايا الكبد بعد ظهرت جزئيا في إيماءة. الفئران مشمولان (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: تعلم تقنية استئصال جزئي للكبد وزراعة الخلايا الكبدية داخل الطحال في فئران NOD.SCID. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة علاجات الفشل الكبدي الحاد وتطور العلاجات الخلوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل المنحة الأساسية الواردة من إدارة التكنولوجيا الأحيائية، "حكومة الهند" إلى "المعهد الوطني لعلم المناعة"، نيودلهي. الدكتور بهاتاشارجى العنوان الحالي هو شعبة من أمراض الجهاز الهضمي والكبد والتغذية ومستشفى لوس أنجليس في الأطفال.

الإجراءات الواردة في هذا البروتوكول أقرتها "لجنة الأخلاقيات الحيوان المؤسسية" "المعهد الوطني لعلم المناعة"، نيودلهي. هو الرقم المرجعي التسلسلي للموافقة هيئة الطاقة الذرية رقم 319/13.
ملاحظة: هناك موارد ممتازة في الجراحة العامة إجراءات20 وبروتوكوﻻت معينة لجراحة القوارض21. لأولئك الذين يقومون جراحة الحيوان للمرة الأولى، ينصح بالممارسة على نطاق واسع الإجراءات الجراحية في الدمى قبل التشغيل على الحيوانات.
1-إعداد
<ol><li>قبل التجربة، تبقى عقيمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) أو المالحة جاهزة.</li>
	<li>تجميع مجموعة جراحة تتضمن مقص وملقط مسنن وملقط الأنسجة، القطن، براعم القطن، وخيوط النايلون وأصحاب إبرة صغيرة مختلفة. اﻷوتوكﻻف أدوات الجراحة. ينبغي إيلاء عناية خاصة إذا كان موافقة جهاز المناعة-للخطر. يتم تضمين الماوس مشمولان في البروتوكول.</li>
	<li>تنفيذ الإجراء التجريبي كاملة، من إعداد لنهاية عملية جراحية، وفي السلامة الأحيائية الفئة الأولى مجلس الوزراء.</li>
	<li>وزن إيماءة. مشمولان الماوس من 6-8 أسابيع قبل الجراحة. وتستخدم الفئران وزنها بين 14-18 ز في هذه الدراسة.</li>
	<li>حلاقة منطقة البطن الوسطى و hypochondriac العلوي للماوس مع الشعر المتقلب. تطبيق إزالة كريم بالتساوي في جميع أنحاء المنطقة مع ملعقة لإزالة الشعر المشذبة الشعر. إزالة الشعر بلطف بمساعدة قطعة من القطن المعقم الرطب بعد 2-5 دقائق.</li>
	<li>ضع الماوس في قاعة isoflurane وفتح صمام اسطوانة الأكسجين. الحفاظ على تدفق الأكسجين بمعدل 4 لتر في الدقيقة والتبخر إيسوفلوراني 4% للحث على التخدير.<ol>
<li>تأكد من أنه قد تم تخديره الماوس بشكل صحيح بأصبع لطيف معسر.</li>
	</ol>
</li>
	<li>وضع مجلس الوزراء مجلس جراحة داخل السلامة الأحيائية. ضع الحيوان على متنها الجراحة، مثل الجزء البطني من الماوس هو مواجهة ويوضع الجزء الأمامي من الماوس داخل مخروط الآنف متصل بإمدادات إيسوفلوراني واكسجين.</li>
	<li>تخفيض التبخر isoflurane إلى 2 في المائة، والحفاظ عليه طوال العملية الجراحية.</li>
	<li>تطهير جلد الماوس وتعقيم أنه بالمسح بالقطن المعقم الإيثانول 70% غارقة.</li>
</ol>2-الجراحة
<ol><li>
ظهرت جزئية
	<ol>
<li>جعل شق عرضية من حوالي 1 سم في الجلد تحت القص، عمودي فقط إلى عملية الرهابه ومواز للقفص الصدري، مع مساعدة مقص التشغيل مباشرة.</li>
		<li>فصل الجلد مرفقة مع طبقة العضلات البطن محيط قطعي بالملقط أو نصائح القطن ترطب العقيمة للتمييز بين الجلد وطبقة العضلات البطن بلطف. نقع منطقة الأدمة مع برنامج تلفزيوني استخدام تلميحات القطن المعقمة للتهرب من جفاف.</li>
		<li>تعرض منطقة الفص الأيسر بسلاسة بجعل شق عرضية من خلال طبقة البريتوني تحت فقط الرهابه. استخدام اثنين القطن ترطب نصائح لفضح ورفع الفص الأيسر من الكبد.</li>
		<li>ضع واحد من نصائح القطن على الجانب البطني من القطع، ومكان آخر نصيحة القطن من ناحية الحجاب الحاجز. اضغط نصيحة وضع نحو الحجاب الحاجز برفق، وإعطاء دفعة انزلاق من طرف أخرى برفع الفص الأيسر من الكبد.</li>
		<li>كشف خيط نايلون مع حلقة من خلال الفص الأيسر رفع، والشرائح في الحلقة نحو قاعدة الفص الأيسر قريبة من هيلوم مع مساعدة نصائح الملقط الصغير أو القطن. ادفع برفق أسفل حلقة الخيط النايلون لقاعدة للفص الأيسر.</li>
		<li>ربط طرفي الخيط النايلون فوق الجزء العلوي من الفص الأيسر استخدام حامل إبرة الجراحة الدقيقة والملقط الصغير. جعل اثنين عقده إضافية على الجانب الآخر.</li>
		<li>تشريح خارج الفص مقيدة بمساعدة المقص. لا تحاول قطع جداً قريبة من الموضوع. في حالة الإجراء الذي يدوم أكثر من 5 دقائق، الحفاظ على التجويف الصفاقى وأجهزة رطبة مع PBS العقيمة لتجنب جفاف بسبب فقدان السوائل.</li>
		<li>خياطة الصفاق بخياطة استخدام المستمر خياطة الوتر 4-0. بعد ذلك، قم بإغلاق الجلد بخياطة متقطع بأقصى سرعة ممكنة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
زرع الخلايا ملاحظة: خلايا الكبد وإذ تعرب عن التجارة والنقل كانت معزولة من الفئران المحورة وراثيا في التجارة والنقل (C57BL/6--تيراغرام (UBC-التجارة والنقل) 30 Scha/J)، وفقا للإجراء الذي وصفته لي وآخرون. 22 وشين وآخرون. واستخدمت تتمثل مثل الخلايا (نيوهيب) من أصل البشرية المتباينة من وحيدات24 23 أيضا لزرع الأعضاء. ومع ذلك، يمكن أيضا الخلايا المشتقة من أي مصادر أخرى في البروتوكول.<ol>
<li>تعليق 0.2 مليون خلايا قابلة للحياة في حوالي 50 ميليلتر من المتوسطة (إيمدم "تعديل دولبيكو" ل Iscove)، ونضح أنه في حقنه الأنسولين 1 مل توج بإبرة 30 جرام. الاحتفاظ حقنه الباردة بوضعه على الجليد.</li>
		<li>ضع الماوس بطريقة الجزء الجانبي الأيسر يواجه تجاه الشخص الذي يقوم بعملية جراحية. تحديد منطقة الطحال والعرض تشريح الجلد بالقرب من منطقة هيبوتشوندرياك، تليها شق قصيرة من خلال طبقة البريتوني فقط لفضح الطحال.</li>
		<li>بلطف رفع الطحال وتعقد خارج تجويف بمساعدة اثنين من برنامج تلفزيوني مبلل نصائح القطن.</li>
		<li>عقد الطحال بعناية مع نصائح القطن اثنين في يد واحدة، ومكان الإبر المحاقن بالضبط الرأسي للطحال. بلطف بيرس الطحال ودفع الإبرة ببطء شديد في الداخل؛ لا يجب أن تحصل على الإبرة أعمق من 2 مم.</li>
		<li>دفع أسفل مكبس المحاقن ببطء حقن الخلايا في الطحال. بعد زرع الأعضاء، تبقى الإبرة للمحاقن مستقرة وإزالته ببطء من الطحال لتجنب نزيف أو فقدان الخلايا.</li>
		<li>بعد وضع الطحال مرة أخرى في التجويف الصفاقى مع نصائح القطن، إغلاق الطبقة البريتوني بخياطة مستمرة مع خياطة الوتر 4-0. خياطة الجلد بخياطة نفس discontinuously. تجنب استخدام مقاطع الجرح لإغلاق الجلد؛ بدلاً من ذلك، بإغلاقه قبل خياطة 4-0. مقاطع الجرح تقييد الحركة الطبيعية للماوس، ومقاطع غالباً ما تصبح فضفاضة ويخرج بسرعة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-بعد العمليات الجراحية الرعاية
<ol><li>بعد إغلاق الجلد، مسح المنطقة المحيطة بكل المواقع خياطة الجروح بمحلول اليود (تدين) استخدام تلميح القطن معقمة.</li>
	<li>حقن جرعة من المضادات الحيوية cefotaxime كما 600 مغ/كغ وزن (عادة cefotaxime 12 ملغ في 100 ميليلتر من المحلول الملحي/الماوس) جسم إينترابيريتونيلي استخدام المحاقن 1 مل.</li>
	<li>إعطاء جرعات يومية من ميلوكسيكام مسكن ك 1 مغ/كغ من وزن الجسم (عادة 12 ميكروغرام ميلوكسيكام في 100 ميليلتر من المحلول الملحي/الماوس) للحيوان إينترابيريتونيلي، لمدة تصل إلى ثلاثة أيام بعد الجراحة.</li>
	<li>بعد الانتهاء من عملية جراحية، وقف تدفق الغاز isoflurane وضع الماوس مرة أخرى في القفص التهوية على حدة.</li>
</ol>4-يوثانيزيشن والأوصاف
<ol><li>وبعد اندبوينتس التجريبية (1 يوم و 10 أيام بعد الجراحة)، euthanize الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية الحيوان المؤسسية.</li>
	<li>جمع الدم بالنزيف الميؤوس من شفائهم الحيوانات، وثقب الضفيرة المحطة الطرفية العين.</li>
	<li>عزل المصل من الدم.</li>
</ol>

<ol><li>Nussler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Present+status+and+perspectives+of+cell-based+therapies+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases.</a> J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).</li>
<li>Ponder, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hepatocytes+migrate+to+liver+parenchyma+and+function+indefinitely+after+intrasplenic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).</li>
<li>Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+hepatocyte+and+fetal+liver+transplantation+and+xenogeneic+hepatocyte+transplantation+for+Nagase%27s+analbuminemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats.</a> Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).</li>
<li>Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models.</a> Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).</li>
<li>Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15158325">Hepatocyte transplantation.</a> J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).</li>
<li>Glanemann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+monocyte-derived+hepatocyte-like+cells+%28NeoHeps%29+improves+survival+in+a+model+of+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure.</a> Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).</li>
<li>Rahman, T. M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute hepatic failure.</a> Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte+colony-stimulating+factor+treatment+ameliorates+liver+injury+and+improves+survival+in+rats+with+D-galactosamine-induced+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure.</a> Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).</li>
<li>Gardner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+nitric+oxide+in+acetaminophen-induced+hepatotoxicity+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat.</a> Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).</li>
<li>Nardo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+CCL4-induced+acute+liver+failure+with+portal+vein+arterialization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat.</a> Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).</li>
<li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure+in+rats+induces+oxidative+stress+differentially+in+cerebral+cortex%2C+cerebellum+and+pons+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla.</a> Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laennec+protects+murine+from+concanavalin+A-induced+liver+injury+through+inhibition+of+inflammatory+reactions+and+hepatocyte+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Pharm.+Bull%22%5BJournal%5D)">Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis.</a> Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).</li>
<li>Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+hesperidin+on+lipopolysaccharide-induced+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity.</a> Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).</li>
<li>Rupertus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+but+not+minor+hepatectomy+accelerates+engraftment+of+extrahepatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).</li>
<li>Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+survival+of+syngeneic+hepatocytes+in+rat+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum.</a> Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).</li>
<li>Tang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+donor+hepatocytes+and%2For+splenocytes+pre-injection+in+reducing+islet+xenotransplantation+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary.+Pancreat.+Dis.+Int%22%5BJournal%5D)">The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection.</a> Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).</li>
<li>Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+transplantation+through+the+hepatic+vein%3A+a+new+route+of+cell+transplantation+to+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver.</a> Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).</li>
<li>Gabelein, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasplenic+or+subperitoneal+hepatocyte+transplantation+to+increase+survival+after+surgically+induced+hepatic+failure%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?</a> Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+From+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+cMET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. , (2016).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf">Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme</a>. , http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf (2017).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li>
<li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> J. Vis. Exp. (79), (2013).</li>
<li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> J. Vis. Exp. (64), (2012).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+from+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+c-MET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li>
<li>Vidal, I., Richert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nude+mouse+as+model+for+liver+deficiency+study+and+treatment+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation.</a> Int. J. Hepatol. , 1400147(2012).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li>
<li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> J. Vis. Exp. (79), e50544(2013).</li>
<li>Krikri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+vs.+open+abdominal+surgery+in+male+pigs%3A+marked+differences+in+cortisol+and+catecholamine+response+depending+on+the+size+of+surgical+incision%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+%28Athens%29%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision.</a> Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

ظهرت الجزئي أسلوب المنشأة لتجديد الكبد التحقيق، وذكر ظهرت المفرط لتقليد النموذج أف. بين نماذج حيوانية من أف، من القوارض، خاصة من الفئران، نموذج بحث آخر. للحصول على نموذج إصابة كبد في الفئران، حتى ظهرت 70% سجلت مع25،معدل البقاء على قيد الحياة جيدة26. ومع ذلك عارية وأخرى الماوس العوز، ظهرت 70% أفيد كقاتلة والحيوانات توفي خلال 24 ساعة27.
ميتشل وويلينبرينج28 أظهر أسلوب جيد التحمل واستنساخه لظ...

في الوقت الراهن، يقترح زرع تتمثل كبديل لزرع كامل لعلاج المرضى بعد اضطرابات حادة في الكبد. ويعتقد أنه يمكن سد المرضى للجهاز كله زرع1. بالإضافة إلى خلايا الكبد allogenic2،3 من خلايا الكبد إكسينوجينيك وخلايا الكبد المستمدة من الخلايا الجذعية البالغة4 كما يجري التحقيق في نماذج حيوانية. في هذا السياق، بصاروخ موجه وانجرافتمينت إمكانية زرع خلايا المتلقي معياراً هاما للخلية على أساس العلاج في فشل كبدي حاد (AHF).
للتحقيق في زرع خلايا الكبد أو خلايا تتمثل مثل5، يتم إنشاء أهف في نموذج حيوان أما عن طريق الجراحة6 أو الإجراءات الدوائية7 ، متبوعاً بزرع الخلايا. جعل نموذج حيوان AHF الكواشف الدوائية، والعديد من هيباتوتوكسينس مثل د-جالاكتوساميني8، أسيتامينوفين9،10من رابع كلوريد الكربون، ثيواسيتاميدي11، كونكانافالين A12، lipopolysaccharide13 ، إلخ.، وقد استخدمت. من هذه القائمة، كل كاشف ينشئ مجموعة فريدة من ميزات لأهف، ولكن للأسف لا كاشف واحد يقلد AHF البشرية. وعلاوة على ذلك، AHF الناجمة عن هيباتوتوكسينس وقتاً طويلاً، مما يضع الحيوانات تحت الإجهاد المزمن، وصعوبة الحصول على النتائج استنساخه.
من ناحية أخرى، العملية الجراحية لظهرت الجزئي (PHx) تعتمد المهارة، والنتائج استنساخه من السهل الحصول عليها بعد تطوير المهارات المطلوبة. مطلوب لحمل أهف بالتدخل الجراحي وحدها، بتر أكثر من 70% من الكبد؛ ومع ذلك، أقل من ظهرت 70% لا يزال يمكن أن تستخدم لدراسة انجرافتمينت وانتشار زرع الخلايا في الكبد لتحليل قدراتها العلاجية خلال14من تلف في الكبد. وقد زرع خلايا الكبد ظهرت الوظيفة المؤداة عن طريق الصفاق15، ذيل الوريد16، الوريد الكبدي17أو الطحال18. حقن الوريد الكبدي وزرع خلايا الكبد إينتراسبلينيك حاليا الإجراءات المفضلة، كما أنها أسهل في إعادة إنتاج.
في هذه الورقة، التي وصفناها إجراء لظهرت جزئية في إيماءة 30%. إخضاعها (إيماءة. CB17-Prkdcscid/J) الفئران هي التي اقتطعت الفص الأيسر من الكبد. تبعتها زرع 0.2 مليون بروتينات فلورية خضراء وإذ تعرب عن الماوس (C57BL/6--تيراغرام (UBC-التجارة والنقل) 30Scha/ي) خلايا الكبد، فضلا عن البشرية المنشأ نوب19 في الطحال. ويؤدي هذا الإجراء إلى engraftment الخلايا المزروعة في الكبد. ويتم هذا الإجراء الأقل الغازية وتقنية دنيا مؤلمة.

<table><tbody><tr><td>نظام التخدير الغازي</td><td>Ugo Basile. إيطاليا</td><td>211000</td><td></td></tr><tr><td>آلة الوزن</td><td>Goldtech ؛ </td> خزانة السلامة <td>البيولوجية للمشتريات المحلية</td>في الهند <td></td></tr><tr><td>(الفئة الأولى)</td> <td>كارتوس الدولية. &nbsp; الهند</td><td></td><td>المشتريات المحلية</td></tr><tr><td>ماكينة تشذيب الشعر</td><td>باناسونيك ; &nbsp; اليابان&nbsp;</td><td>ER-GY10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>مقص تشغيل مستقيم بشفرات حادة / حادة جراحية</td><td>رئيسية ؛ ملقط</td><td>المشتريات المحلية</td>في الهند <td></td></tr><tr><td>مع المسننات العمليات</td><td>الجراحية الكبرى. الهند</td><td></td><td>المشتريات المحلية</td></tr><tr><td>أصحاب الإبر الصغيرة&nbsp; مستقيم & منحني&nbsp;</td><td>مرسيان ; &nbsp; إنجلترا&nbsp;</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>حقنة الأنسولين 1 مل مع 30G * 5/16 إبر &nbsp;</td><td>ديسبو فان. الهند</td><td></td><td></td></tr><tr><td>حقنة 1 مل مع 26 جم * 1/2 إبرة</td><td>BD ؛ الولايات المتحدة&nbsp;</td><td>REF 303060</td><td></td></tr><tr><td>خيوط النايلون&nbsp; &nbsp;</td><td>قوي; الهند</td><td></td> <td>(1-0) المشتريات المحلية</td></tr><tr><td>MERSUTURES 4-0 خياطة إبرة جراحية معقمة</td><td>Ethicon ، Johnson & amp جونسون ، الهند</td><td>NW 5047</td><td></td></tr><tr><td>TRUGUT 76 سم 4-0 خيوط جراحية قابلة للامتصاص</td><td>الهند المحدودة ؛ الهند</td><td>SN 5048</td><td>معقمة جراحية إبرة خياطة Catgut براعم</td></tr><tr><td>القطن</td><td>الكروم نقية مسحات Pvt Ltd ؛ &nbsp; الهند</td><td></td><td></td></tr><tr><td>المشتريات المحلية الشريط الجراحي</td><td>3M الهند ; الهند</td><td>1530-1</td><td>Micropore Surgical Tape</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Histo-Line Laboratories ، إيطاليا</td><td>MRS3500</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryotome E Cryostat</td><td>Thermo Electron Corporation ؛ </td> مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر الأمريكي <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>كارل زايس ; ألمانيا&nbsp;</td><td>LSM 510 META</td><td></td></tr><tr><td>مجهر المجال الساطع</td><td>أوليمبوس ، اليابان</td><td>محلل آلي LX51</td><td></td></tr><tr><td></td><td>توليب ، ألتو سانتراكروز ، الهند</td><td>محلل الشاشة Maaster 3000</td><td>للاختبار الوظيفي</td></tr><tr><td>للكبد مقياس التدفق الخلوي</td><td>BD ؛ الولايات المتحدة&nbsp;</td><td>BD FACتقييم مختلف</td><td>لوجود الخلايا بعد الزرع</td></tr><tr><td>كريم إزالة الشعر Veet &nbsp;</td><td>ريكيت بينكيزر ، الهند</td><td></td><td></td></tr><tr><td>فوران</td><td>أبوت ؛ </td><td></td><td>الولايات المتحدة isoflurane USP 99.9٪&nbsp;</td></tr><tr><td>تاكسيم</td><td>الكم ; الهند</td><td></td><td>سيفوتاكسيم حقن الصوديوم</td></tr><tr><td>محلول بوفيدون اليود &nbsp;</td><td>وين ميديكير. &nbsp; الهند</td><td></td><td>البيتادين</td></tr><tr><td>بارافورمالدهايد</td><td>هيميديا. الهند</td><td>GRM 3660</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>تقنيات الحياة ، Thermo Fisher العلمية ; الولايات المتحدة</td><td>12200-036</td><td></td></tr><tr><td>السكروز</td><td>سيجما ; الولايات المتحدة</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>الأنسجة تيك</td><td>ساكورا. الولايات المتحدة</td><td>25608-930</td><td>مركب OCT</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Himedia; الهند</td><td>MB 097</td><td></td></tr><tr><td>مضاد للألبومين الماعز متعدد النسيلة</td><td>الحراري العلمي ، بيرس ، الولايات المتحدة</td><td>PA126081</td><td></td></tr><tr><td>مضاد للكونيكسين 32 / GJB1 متعدد</td><td>النسيلة أبكام ، المملكة المتحدة</td><td>ab64609-500</td><td></td></tr><tr><td>مضاد GFP أرنب متعدد النسيلة &nbsp ؛</td><td>التكنولوجيا الحيوية في سانتا كروز. US</td><td>SC 8334</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 حمار مضاد للماعز</td> <td>&nbsp; المجسات الجزيئية ، ثيرمو فيشر العلمي ؛ &nbsp; الولايات المتحدة</td><td>A11058</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 حمار مضاد للأغنام</td> <td>&nbsp ؛ المجسات الجزيئية ، ثيرمو فيشر العلمي ؛ &nbsp; الولايات المتحدة</td><td>A11015</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 الدجاج المضادة للأرانب</td> <td>&nbsp; المجسات الجزيئية ، ثيرمو فيشر العلمي ؛ &nbsp; الولايات المتحدة</td><td>A21442</td><td></td></tr><tr><td>الماعز المضادة للأرانب IgG HRP</td><td>Invitrogen ، Thermo Fisher Scientific ؛ الولايات المتحدة&nbsp;</td><td>65-6120</td><td></td></tr><tr><td>الأجسام المضادة المضادة ل Ki67</td><td>abcam ، حل كشف القناع بالمستضد في المملكة المتحدة</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr>، مختبرات<td>ناقلات قاعدة حامض الستريك</td> ، تقنيات الحياة المضادة للتلاشي <td>المضادة للماسي الأمريكية</td><td>H-3300</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ProLong ، Thermo Fisher العلمية. US</td><td>P36966</td><td></td></tr><tr><td>SGOT (ASAT) KIT</td><td>النظام السريري المرجاني ، الهند</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SGPT (ALAT) KIT</td><td>CORAL النظام السريري ، الهند</td><td></td><td></td></tr><tr><td>مجموعة الفوسفاتيز القلوية (DEA)</td> <td>النظام السريري المرجاني ،</td> محلول الهيماتوكسيلين الهندي <td></td><td></td></tr><tr><td>،</td> مايرز <td>سيجما. محلول US</td><td>MHS16</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y ،</td><td>سيجما الكحولي ؛ الولايات</td><td>المتحدة HT110132</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mountant&nbsp;</td><td>سيغما; الولايات المتحدة</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>ميلونكس (مسكن للألم)</td> <td>إنتاس المستحضرات الاصطلانية المحدودة ؛ حقن ميلوكسيكام الهندي</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>DAB تعزيز نظام الركيزة السائلة رباعي هيدروكلوريد</td><td>سيجما ; الولايات المتحدة</td><td>D3939</td><td></td></tr></tbody></table>

إينتراسبلينيك زرع خلايا الكبد بعد ظهرت جزئيا في إيماءة. الفئران مشمولان

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

ظهرت الجزئي أسلوب تنوعاً واستنساخه لدراسة تجديد الكبد وتأثير الخلية على أساس المداواة في مختلف الحالات المرضية. ظهرت جزئية يسهل أيضا انجرافتمينت زيادة وانتشار الخلايا المزروعة neovascularization المتسارع والهجرة الخلية نحو الكبد. هنا، يمكننا وصف بروتوكول بسيط لأداء ظهرت 30% وزرع الخلايا في الطحال من غير السمنة السكري/حاد جنبا إلى جنب إيماءة العوز. إخضاعها (إيماءة. /J CB17-بركدكمشمولان) الماوس.
في هذا الإجراء، يتم إجراء شقوق صغيرة اثنين. الشق الأول هو فضح ويرسخ الفص الأيسر من الكبد، ويتم إجراء شق صغير آخر لفضح الطحال لزرع الخلايا إينتراسبلينيك. هذا الإجراء لا يتطلب أي مهارات جراحية متخصصة، وأنها يمكن أن تكتمل في غضون 5-7 دقائق مع أقل الإجهاد والألم والشفاء أسرع وأفضل البقاء على قيد الحياة. لقد أظهرنا زرع خلايا الكبد المعزولة من بروتين فلورية خضراء (بروتينات فلورية خضراء) معربا عن الماوس (المعدلة وراثيا C57BL/6--تيراغرام (UBC-التجارة والنقل) 30Scha/ي)، فضلا عن تتمثل مثل خلايا المنشأ البشرية (نوب) في هيباتيكتوميزيد جزئيا إيماءة. مشمولان الفئران.

تتمثل في انتشار بعد 30% ظهرت الجزئي: انتشار خلايا الكبد في بقية الكبد بعد 30% ظهرت بحثت المناعي (المدينة) تلطيخ لعلامة انتشار الخليوي، كي-67. ظهرت بعد يوم واحد، كانت euthanized الفئران والفصوص الكبد المتبقية قد اقتطعت وتم الحصول على مقاطع البارافين. المقاطع كانت ملطخة بجسم كي-67، متبوعاً بوضع العلامات مع الفجل البيروكسيديز (HRP) مترافق جسم الثانوية. دي الأمينية البنزيدين (DAB) استخدمت كالركيزة لبرنامج الصحة الإنجابية لوضع اللون البنى لتحديد الخلايا الملون. وكان النواة العداد الملون مع الهيماتوكسيلين والن...

لقد قمنا بوصف بروتوكول لأداء ظهرت الجزئي (PHx) وزرع الخلايا عن طريق الطحال في إيماءة. إخضاعها (إيماءة. /J CB17-بركدكمشمولان) الفئران. في هذا البروتوكول، ويتم شق إلى فضح ويرسخ الفص الأيسر من الكبد متبوعاً بشق آخر لزرع الخلايا إينتراسبلينيك.

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

تعد زراعة الخلايا الكبدية بديلاً لزراعة العضو الكامل في علاج المرضى الذين يعانون من الفشل الكبدي الحاد. ويُستخدم استئصال الكبد الجزئي كتقنية لإحداث الفشل الكبدي الحاد (AHF). بالإضافة إلى ذلك، تُستخدم هذه التقنية أيضاً لدراسة انغراس الخلايا وتكاثرها أثناء العلاج القائم على الخلايا.يُعد الفأر أحد أكثر النماذج بحثاً لإجراء استئصال الكبد لتحقيق مثل هذه الأهداف. سنعرض في هذا الفيديو إجراءً لاستئصال جزئي للكبد يليه زرع لخلايا كبدية في طحال فأر من نوع NOD. SCID.قبل البدء، تأكد من حصولك على الموافقات اللازمة من لجنة أخلاقيات الحيوان المختصة لإجراء التجربة. في هذا الإجراء، سنقوم بعمل شقين صغيرين؛ الشق الأول مخصص لاستئصال جزئي للكبد، وسيكون طوله حوالي 1 سم، ويُجرى أسفل الناتئ الخنجري مباشرةً لكشف الكبد.لأجل زراعة الخلايا، يتم إجراء شق أصغر آخر في الجزء الجانبي الأيسر للكشف عن طحال الحيوان. وتتمثل المزايا في أن ذلك يؤدي إلى تقليل الصدمات والألم للحيوان، وتسريع عملية التعافي، وبقاء الحيوانات على قيد الحياة بنسبة تصل إلى مائة بالمائة تقريبًا. علاوة على ذلك، لا يتطلب هذا الإجراء أي مهارات جراحية متخصصة ويمكن إكماله بسرعة في غضون خمس إلى سبع دقائق.سنقوم في هذا الفيديو بتوضيح عملية زراعة خلايا شبيهة بالخلايا الكبدية تسمى NeoHep وخلايا كبدية معزولة من فأر معدل وراثياً ببروتين GFP في فأر NOD. SCID خضع لاستئصال جزئي للكبد. ولا تقتصر هذه الإجراءات على نوع محدد من الخلايا المراد زراعتها.تم تعقيم جميع الأدوات الجراحية ومحلول PBS في الجهاز التعقيمي (autoclave) بشكل مناسب وجرى تجهيزها قبل الجراحة. قم بوزن الفأر. تشتمل هذه العملية على فئران NOD. SCID التي تتراوح أعمارها بين ستة إلى ثمانية أسابيع وتتراوح أوزانها بين 14 إلى 18 جراماً.قم بحلاقة المنطقة المركزية والعلوية واليسرى من بطن الفأر. ولإزالة الشعر المقصوص، ضع كريم إزالة الشعر فوق المنطقة المحلوقة. انتظر لمدة أربع إلى خمس دقائق ثم قم بإزالة الشعر برفق.قم بفتح صمام أسطوانة الأكسجين. ضع الفأر في غرفة الإيزوفلوران (Isoflurane). اضبط تدفق الأكسجين عند 4 liter per minute.اضبط تبخير الإيزوفلوران عند نسبة 4% لاستحثاث التخدير. تأكد من تخدير الفأر بشكل صحيح عن طريق قرص إصبع القدم برفق. ضع لوحة الجراحة داخل كابينة السلامة البيولوجية.ضع الحيوان على لوحة الجراحة بحيث يكون الجزء البطني للفأر متجهًا للأعلى، ويوضع الجزء الأمامي من الفأر داخل المخروط الأنفي المتصل بإمدادات الـ Isoflurane والأكسجين. خفّض تبخير الـ Isoflurane إلى 2% للحفاظ على التخدير. قم بتطهير الجلد عن طريق مسحه بقطنة معقمة مبللة بـ 70% ethanol.قم بإجراء شق عرضي بطول حوالي واحد سنتيمتر في الجلد أسفل عظمة القص مباشرة، بحيث يكون عمودياً على الناتئ xiphoid وموازياً للقفص الصدري. افصل الجلد والبريتون بلطف بالقرب من الشق. قم بإجراء شق عرضي عبر الطبقة البريتونية أسفل الناتئ xiphoid مباشرة للكشف عن الفص الأيسر للكبد.سيتم استخدام مسحتين قطنيتين مبللتين. ضع إحدى المسحات القطنيات على الجانب البطني من الشق، وضع المسحة القطنية الأخرى على جانب الحجاب الحاجز. الآن، اضغط برفق على الطرف الموجود جهة الحجاب الحاجز، ثم قم بدفعه انزلاقياً بواسطة الطرف الآخر لرفع الفص الأيسر من الكبد.ضع عروة من خيط الحرير على قاعدة الفص الجانبي الأيسر بالقرب من سرة الكبد باستخدام ملاقط التشريح الدقيق. بعد إغلاق العقدة قليلاً، قم بسحب خيط الحرير قدر الإمكان إلى قاعدة فص الكبد. أحكم ربط العقدة وضع عقدتين إضافيتين على الجانب الآخر.اقطع الفص المربوط باستخدام مقص الجراحة المجهرية. تُظهر هذه الصورة الجزء المتبقي من الفص الأيسر بعد الاستئصال. خيِّط الصفاق عن طريق الخياطة المستمرة باستخدام خيط Catgut قابل للامتصاص بقياس 4/0.أغلق الجلد عن طريق الخياطة المتقطعة باستخدام خيوط Catgut القابلة للامتصاص ذات المقاس 4-0. ضع Betadine في المنطقة المحيطة بالغرز. حافظ على الخلايا الكبدية أو NeoHep معلقة في 50 µL من وسط IMDM، جاهزة في محقنة إنسولين سعة 1 mL مع إبرة بقياس 29 gauge.ضع الفأر بحيث يكون الجانب الأيسر متجهًا للأعلى. حدد منطقة الطحال وقم بتشريح الجلد عرضياً. اصنع قطعاً بطول اثنين إلى ثلاثة مليمتر في الطبقة البريتونية للكشف عن الطحال.ضع الطحال بين قطعتين مبللتين من مسحات القطن واركعه برفق. اغرز الإبرة في قشرة الطحال بلطف ثم قم بتفريغ معلق الخلايا داخل الطحال. أغلق الصفاق عن طريق الخياطة المستمرة باستخدام خيط جراحي بقياس 4-0، وأغلق الجلد عن طريق الخياطة المتقطعة.ضع Betadine على الغرز الجراحية. احقن 100 µL من المحلول الملحي داخل التجويف البريتوني يحتوي على 12 mg من المضاد الحيوي Cefotaxime. احقن 100 µL من المحلول الملحي داخل التجويف البريتوني يحتوي على 12 µg من مسكن الآلام Meloxicam.يُعطى هذا الدواء يومياً لمدة ثلاثة أيام بعد الجراحة. أغلق مبخر الإيزوفلوران وضع الفأر في القفص. س يستعيد الحيوان وعيه خلال ثوانٍ.تم فحص تكاثر الخلايا الكبدية في الكبد بعد مرور أربع وعشرين ساعة من استئصال الكبد بنسبة ثلاثين بالمئة عن طريق الصبغ الكيميائي النسيجي المناعي لقطاعات الكبد باستخدام Ki-67، والذي يعد مؤشراً على تكاثر الخلايا. وبعد صبغ هذه القطاعات، تم استخدام جسم مضاد ثانوي مقترن بإنزيم peroxidase الفجل الحار المضاد لـ Ki-67 لغرض الكشف، واستُخدم Di-Amino Benzadine كركيزة لإظهار اللون البني. كما صُبغت النواة بصبغة الهيماتوكسيلين كصبغة مضادة.في هذه الصورة، تمثل الخلايا ذات اللون البني الخلايا الكبدية المتكاثرة الموجبة لـ Ki-67. بعد عشرة أيام من عملية الزرع، تم تفعيل القتل الرحيم للفأر وفحص الكبد. تظهر هنا صورة تمثيلية.من الكبد المتجدد، تم استئصال الفص الجانبي الأيمن والفص الإنسي الأيمن والفصوص الإنسية اليسرى، وتم الحصول على مقاطع بسمك خمسة ميكرون. صُبغت هذه المقاطع باستخدام أجسام مضادة أولية من الأرانب متعددة النسائل anti-GFP وأجسام مضادة ثانوية anti-rabbit Alexa Fluor 594. صُبغت النواة بصبغة DAPI المقابلة.تظهر هذه الصورة توجه الخلايا الكبدية التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر، والذي يظهر هنا باللون الأحمر. وعند زرع خلايا شبيهة بالخلايا الكبدية من أصل بشري تسمى NeoHep، لاحظنا تعبير Albumin البشري وConnexin 32 البشري في مقاطع الكبد للفئران المستقبلة التي خضعت لاستئصال جزء من الكبد. وبعد عشرة أيام من الجراحة، أكد التحليل البيوكيميائي للإنزيمات الكبدية المفرزة في المصل أن مستويات aspartate aminotransferase وalanine amintransferase وalkaline phosphatase قد عادت إلى طبيعتها.وبالمثل، أظهر الفحص النسيجي لمقاطع الكبد باستخدام صبغة الهيماتوكسيلين والإيوسين عدم وجود أي تشوهات بعد عشرة أيام من الجراحة، مما يشير إلى تعافي الكبد بشكل سليم. ومن المهم اتخاذ بعض الاحتياطات؛ لذا حاول وضع عقدة خيط النايلون عند قاعدة فص الكبد.لا تنسَ عمل عقدتين إضافيتين محكمتين في الجانب المقابل، ولا تحاول القص بالقرب الشديد من الخيط. ولزرع الخلايا في الطحال، اغرز الإبرة بشكل عمودي تماماً، ويجب ألا يتجاوز عمق الغرز مليمترين. وتجنب استخدام مشابك الجروح عند إغلاق الجلد.بدلاً من ذلك، أغلقه باستخدام غرزة جراحية مقاس 4-0. حيث إن مشابك الجروح تقيد الحركة الطبيعية للفأر، وغالباً ما ترتخي هذه المشابك وتخرج في وقت قصير. بعد إعادة الحيوان إلى القفص، يمكنك وضع بضع قطع من رقائق الذرة المعقمة في القفص وتوفير مياه معقمة تحتوي على 5% جلوكوز.إذا لم تكن لديك خبرة سابقة في جراحة الحيوانات، فتدرب بشكل منفصل على استئصال جزء من الكبد وزراعته في الفئران الطبيعية ذات الكفاءة المناعية، ثم قم بإجراء كلا العمليتين في حيوان واحد. ولا تنفذ هذه الإجراءات في فئران NOD. SCID ناقصة المناعة إلا بعد تحقيق معدل بقاء بنسبة مئة بالمئة في الفئران ذات الكفاءة المناعية.

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

هو مفصل في زرع الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) في النخاع الشوكي للفئران مع إزالة الميالين المعمول بها. إعداد NSCs ، هي الخطوط العريضة لاستئصال الصفيحه من الفقرات الصدرية 9 (T9) ، وزرع NSCs جنبا إلى جنب مع الرعاية قبل وبعد العملية ، من الفئران.

الجراحية زرع الخلايا الجذعية العصبية الماوس في النخاع الشوكي لفئران مصابة موجه للعصب الماوس فيروس التهاب الكبد

يوضح هذا الفيديو طريقة لإنشاء نموذج فأر مزدوج متوافق مع البشر مع جهاز مناعي بشري وخلايا كبد. يتضمن زرع خلايا الكبد البشرية والخلايا الجذعية المكونة للدم والخلايا السلفية في فأر يعاني من نقص المناعة المعدلة وراثيا عن طريق الحقن داخل الطحال ، مما يؤدي إلى تطعيم خلايا الكبد وتطوير الخلايا المناعية البشرية.

تطوير نموذج فأر متوافق مع البشر مع خلايا الكبد البشرية والخلايا المناعية

xenografts الورم في الفئران العوز المناعي البشري هي أدوات قيمة لدراسة بيولوجيا السرطان. موصوفة بروتوكولات محددة لتوليد xenografts تحت الجلد وداخل الكبد من خلايا سرطان الكبد الإنسان أو شظايا الورم. ويرد تجديد الكبد الناجم عن استئصال الكبد الجزئي في الفئران المتلقية كاستراتيجية لتسهيل engraftment داخل الكبد.

جيل من تحت الجلد والخلايا الكبدية داخل الكبد سرطان Xenografts الإنسان في الفئران العوز المناعي

هنا ، نقدم نموذجا جديدا لكبد الفأر المتوافق مع البشر تم إنشاؤه في الفئران بالضربة القاضية للخلية بوساطة مستقبلات السموم Alb-toxin (TRECK) / SCID بعد زرع الخلايا الجذعية الكبدية البشرية غير الناضجة والقابلة للتوسيع.

جيل من كبد الفأر أنسنة طريق كبد الإنسان خلايا الجذعية

نقدم هنا، طريقة جديدة لاستئصال جزئي للفص الكبدي الأيسر في الفئران حديثي الولادة (يوم 0). هذا البروتوكول الجديد مناسبة لدراسة إصابة الكبد الحاد والإصابة وردا في إعداد المواليد.

ظهرت مفصص الجزئي: نموذج جراحية لتجديد الكبد مورفولوجك

نقدم هنا، وضع بروتوكول لإنشاء نموذج ماوس تشيميريك كبد البشري من الكوليستيرول الأسرية باستخدام خلايا الكبد المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية المستحثة pluripotent. وهذا نموذجا قيماً لاختبار علاجات جديدة الكوليستيرول.

طراز ماوس تشيميريك كبد البشري الكوليستيرول أسرية باستخدام خلايا الكبد المستمدة من الخلايا الجذعية المستحثة Pluripotent

يوفر هذا البروتوكول طريقة موثوقة لإنشاء الفئران أنسنة مع كل من الجهاز المناعي البشري وخلايا الكبد. الفئران المزدوجة التي تعاني من نقص المناعة التي تحققت عن طريق الحقن داخل الطحال من خلايا الكبد البشرية وCD34+ الخلايا الجذعية المكونة للدم عرضة للعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية-1 وتلخيص تلف الكبد كما لوحظ في المرضى المصابون بفيروس نقص المناعة البشرية.

إنشاء نموذج الماوس ثنائي الأنسنة TK-NOG لمسببات أمراض الكبد المرتبطة بفيروس نقص المناعة البشرية

هنا، ونحن نصف تطور نموذج المورين ذات الصلة سريريا من سرطان الكبد تلخيص السمات المناعية النموذجية للسرطان الكبدي (HCC).

نموذج ماوس متثّل بالكبد من سرطان الكبد الناشئ في إعداد التهاب الكبد والتليف

خلايا الكبد المحملة بالدهون متأصلة في تجديد الكبد ولكنها عادة ما تضيع عند الطرد المركزي المتدرج الكثافة. هنا ، نقدم بروتوكول عزل الخلايا الأمثل الذي يحتفظ بخلايا الكبد الدهنية ، مما ينتج عنه مجموعات تمثيلية من خلايا الكبد المتجددة بعد استئصال الكبد الجزئي في الفئران.

عزل خلايا الكبد المتجددة بعد استئصال الكبد الجزئي في الفئران

في هذا البروتوكول ، نناقش تنفيذ نموذج لزراعة الكبد التقويمية الناجحة (OLT) في الفئران. بالإضافة إلى ذلك ، تتم مناقشة المواد المساعدة لمزيد من تحليل سالكية الطعم الخيفي بعد نجاح OLT في الماوس ، وتحديدا باستخدام فحوصات التصوير المقطعي المحوسب (microCT).

زرع الكبد التقويمي الناجح في الفئران باستخدام تصوير الأوعية المقطعي المحوسب

تم وصف نموذج الفأر لاستئصال الكبد الجزئي 2/3 (66٪) جيدا في الأدبيات ، ولكن نادرا ما تم استخدام عمليات استئصال الكبد الممتدة التي تحاكي متلازمة الحجم الصغير بعد زراعة الكبد. وصفنا إجراء استئصال الكبد الممتد بنسبة 78٪ في نموذج فأر ينتج عنه حوالي 50٪ من الفتك بعد الجراحة في الفئران السليمة.

تمديد 78٪ استئصال الكبد في نموذج جراحي للفأر

تعلم تقنية استئصال جزئي للكبد وزراعة الخلايا الكبدية داخل الطحال في فئران NOD.SCID. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة علاجات الفشل الكبدي الحاد وتطور العلاجات الخلوية.

إينتراسبلينيك زرع خلايا الكبد بعد ظهرت جزئيا في إيماءة. الفئران مشمولان

استكشف المزيد من الفيديوهات