دوبلر الليزر: أداة لقياس البنكرياس جزيرة فاسوموشن ميكروفاسكولار في فيفو

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد الحالة الوظيفية لحركة الأوعية الدموية الدقيقة لجزيرة البنكرياس في الجسم الحي لتقييم تأثيرها على الأمراض ذات الصلة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الدورة الدموية الطبية مثل ما إذا كانت حركة الأوعية الدموية الدقيقة في جزيرة البنكرياس قد تغيرت في الحالة المرضية. كانت لدينا فكرة عن هذه الطريقة لأول مرة عندما أظهرنا أن هناك دورة ميكانيكية وظيفية تطورت في تطور مرض السكري.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها يمكن أن تقيم الحالة الوظيفية لحركة الأوعية الدموية الدقيقة للأنسجة والأعضاء في كل من الإعدادات السريرية والمخبرية. يمكن أن توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة للأمراض المرتبطة بجزر البنكرياس. يمكن تطبيقه أيضا على أنظمة أخرى ، مثل أمراض الكلى والأوعية الدموية الدقيقة المرتبطة بالشبكية.

تمتد تطبيقات هذه التقنية أيضا نحو فهم طبيعة الاتجاهات في الحالة الوظيفية لحركة الأوعية الدموية الدقيقة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة نظرا لوجود كميات هائلة من البيانات الأكاديمية للأوعية الدموية الدقيقة المستمدة من دوبلر الليزر أثناء التجارب. تأكد من أن عرض هذه الطريقة أمر بالغ الأهمية لأن العديد من العوامل يمكن أن تؤثر سلبا على الجمع الدقيق لبيانات دوران الأوعية الدقيقة.

يبدأ هذا البروتوكول بإعطاء الفئران حقنة يومية من STZ لمدة خمسة أيام متتالية. قم بإذابة STZ في مخزن سترات الصوديوم إلى تركيز عمل قدره خمسة ملليغرام لكل ملليلتر. ثم, إعطاء الحقن داخل الصفاق عن طريق حقنة واحدة مليلتر و 25 إبرة مقياس.

يجب أن تصوم الفئران لمدة أربع ساعات قبل الحقن ، ولكن لا ينبغي إزالة وصولها إلى الماء. حقن الفئران الضابطة بنفس الحجم من المخزن المؤقت لسترات الصوديوم النقي. بعد الحقن ، قم بتزويد الفئران بالطعام العادي و 10٪ ماء السكروز.

بعد اليوم الخامس من حقن STZ ، استبدل ماء السكروز بنسبة 10٪ بالماء العادي. بعد تسعة أيام ، اختبر نسبة الجلوكوز في الدم. أولا قم بصوم الفئران لمدة ست ساعات مع الوصول المجاني إلى الماء.

بعد ذلك ، خذ الدم من أوردة الذيل واستخدم جهاز قياس السكر القياسي المحمول باليد لقياس الدم. ضع في اعتبارك أي فئران تزيد مستويات الجلوكوز في الدم عن 200 ملليغرام لكل ديسيلتر مريض بالسكري. قبل استخدام جهاز دوبلر الليزر ، قم أولا بتنظيف الأسطح البصرية لطرف المسبار وموصل المسبار بقطعة قماش ناعمة غير كاشطة ، ثم قم بتوصيل الكابل بمنفذ الجهاز.

بعد ذلك ، قم بتجميع حامل المعايرة. أولا ، دع معيار التدفق المخزن يصل إلى درجة حرارة الغرفة. هذا يستغرق حوالي نصف ساعة.

بعد ذلك ، رج معيار التدفق برفق لمدة 10 ثوان واتركه يرتاح على قاعدة المعايرة لمدة دقيقتين. بعد ذلك ، ارفع المشبك إلى أعلى مستوى ممكن وقم بتأمين المسبار في المشبك. الآن قم بغمر المسبار ببطء في معيار التدفق وقم بتأمين المسبار باستخدام حاملي المسبار.

للمتابعة ، قم بتعتيم أضواء الغرفة واضغط على المعايرة على جهاز دوبلر الليزر. اختر الآن قناة العمل التي يتصل بها المسبار وقم بتشغيل برنامج المعايرة. ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف على منصة عمل وقم بتثبيته باستخدام شريط جراحي.

بعد ذلك ، قم بتعقيم جلد البطن بنسبة 75٪ من الإيثانول من منطقة عنق الرحم إلى الذيل ، ثم قم بتغطية محيط المنطقة بإسفنجة شاش جافة بها ثقب بعرض ثلاثة سنتيمترات في المنتصف. بعد ذلك ، ارفع جلد البطن بالملقط وقم بعمل شق رأسي أولي على طول خط الوسط للبطن باستخدام مشرط أو مقص جلدي. ثم أمسك العضلة الأساسية بالملقط والشق لدخول تجويف البطن.

لا تؤذي أي أعضاء. للكشف عن تجويف البطن ، قم بطي الجلد والعضلات الأساسية فوق الصدر ، ثم قم بتعريض جسم البنكرياس والطحال برفق باستخدام زوج من الملقط الحاد الأنف. الآن ، في برنامج التحكم لجهاز دوبلر الليزر ، قم بإنشاء ملف قياس جديد ، ثم قم بتكوين الشاشات المتصلة.

ضمن علامة التبويب عام، قم بتعيين مدة المراقبة إلى التشغيل الحر واستخدم المصنع الافتراضي لعلامة التبويب شاشة LDF. بعد ذلك ، افتح مربع حوار إعداد العرض وحدد القنوات المناسبة. بعد ذلك، قم بتبديل المعلمات التالية:مصدر البيانات للقناة والتسمية والوحدات واللون، ثم انقر فوق التالي.

بعد ذلك ، أدخل معلومات التعريف حول الموضوع والقياس في مربع حوار معلومات الملف وتابع بالنقر فوق التالي مرة أخرى. الآن ، اكتمل التكوين وستظهر نافذة قياس. بعد ذلك ، قم بدفع القطب يدويا إلى مسافة ملليمتر واحد من البنكرياس.

ترتبط دقة القياس بالمسافة بين المسبار وأنسجة جزيرة البنكرياس. ستكون قراءة تدفق الدم غير دقيقة ما لم يتم الالتزام بفجوات ملليمتر واحد بين الأنسجة والمسبار بعناية. لبدء التسجيل ، انقر فوق أيقونة البدء وستبدأ بيانات PU في الدم الوعائي الدقيق في الحفظ.

قم بذلك لمدة دقيقة كاملة واستخدم أزرار العرض للضغط والتوسيع وأزرار زيادة أو تقليل ارتفاع تتبع الرسم البياني لضبط التأثير المعروض أثناء التسجيل ثم إيقاف التسجيل. ثم احفظ الملف باسم مناسب. الآن ، قم بإعادة وضع المسبار يدويا لتجنب التأثيرات المضافة والاستنفاد الموضعي لقدرة الانقباض والاسترخاء.

إجمالا ، اجمع بيانات PU من ثلاث نقاط عشوائية على البنكرياس لكل فأر. في مرحلة ما أثناء التجربة ، قم بقياس بيانات PU من لوحة غير عاكسة للحصول على قيمة تحكم أساسية. بعد أخذ القياسات الثلاثة ، استخدم خيوط ثلاثية لإغلاق طبقات العضلات ثم خيوط بأربعة خيوط لإغلاق طبقة الجلد.

الآن راقب الماوس في قفص الاسترداد حتى يصبح جاهزا للنقل إلى قفص منزلي نظيف. بشكل عام ، يتم تمثيل حالة الدورة الدموية الدقيقة لجزيرة البنكرياس بمراحل الانكماش والاسترخاء الدورية. تخلق الظواهر الديناميكية الدموية الشاملة نمطا من نضح تدفق الدم.

باستخدام جهاز دوبلر الليزر ، تم جمع بيانات PU لإظهار نمط توزيع نضح الدم في الأوعية الدموية الدقيقة في الفئران غير المصابة بالسكري والسكري. كانت النتائج مختلفة تماما. كان إيقاع الانقباضات والاسترخاء في حركة الأوعية الدموية الدقيقة في جزيرة البنكرياس فوضوية وغير منتظمة في الفئران السكرية التي يسببها STZ ، في حين أن الضوابط غير المصابة بالسكري كان لها تذبذبات إيقاعية.

بعد ذلك ، تم قياس حركة الأوعية باستخدام ملفات تعريف PU. بالمقارنة مع الضوابط ، انخفض متوسط نضح الدم في دوران الأوعية الدقيقة في جزيرة البنكرياس في الفئران المصابة بالسكري الناجمة عن STZ. أظهرت هذه الفئران أيضا انخفاضا كبيرا في سعة وتواتر هذه الحركة الوعائية ، وكذلك في السرعة النسبية لنضح الدم إلى جزيرة البنكرياس.

بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التأكد من أن المسافة بين المسبار وأنسجة البنكرياس في حدود ملليمتر واحد. تعطي المسافة غير المناسبة زيادة أو انخفاضا مصطنعا في قراءة تدفق الدم.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل البقع بالليزر ونقل الأكسجين من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل تصور نقص التروية وتقييم تدفق الدم والحالة الوظيفية لتقييم حركة الأوعية الدموية الدقيقة. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين والأطباء في مجال الغدد الصماء والتمثيل الغذائي لاستكشاف آليات الدورة الدموية الدقيقة المخبأة وراء الأمراض المرتبطة بجزيرة البنكرياس. لا تنس أن العمل باستخدام أداة الليزر يمكن أن يكون خطيرا للغاية بسبب التعرض للإشعاع ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل الجانب البيئي على بعد 200 ملم على الأقل من العين أثناء تنفيذ هذا الإجراء.